Получение рекомбинантного гексона аденовируса третьего типа

1. ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНОГО ГЕКСОНА АДЕНОВИРУСА 3 ТИПА

2. Актуальность исследования

3.

4.

5. Материалы и методы исследования

6.

7. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

8.

Рис. 1 - Схема генетической конструкции на основе
pET28 плазмиды несущей ген фрагмента Nтерминальной части гексона бычьего аденовируса 3-го
типа
Рис. 2 - Схема генетической конструкции на основе
pET32 плазмиды несущей ген фрагмента Nтерминальной части гексона бычьего аденовируса 3-го
типа

9.

10.

Рис. 3 - Электрофорез продуктов полимеразной цепной
реакции: 1 – продукт первого раунда полимеразной
цепной реакции; 2,3 – продукт второго раунда
полимеразной цепной реакции; 4 – молекулярные
маркеры

11.

12.

Рис. 4 - Электрофорез продуктов ПЦР скрининга колоний
трансформированных клеток: 1-7 – клона клеток штамма
BL21/pET28/bAdv3 hexon; 8-14 – клона клеток штамма
BL21/pET32/bAdv3 hexon; 15 – положительный контроль; 16 –
отрицательный контроль; 17 – молекулярные маркеры
После криоконсервации полученных штаммов микроорганизмов, определялась их экспрессионная
активность.

13.

Рис. 5 - ПААГ электрофорез белков при определении экспрессионной
активности штамм-продуцентов BL21/pET32/bAdv3 hexon (А) и
BL21/pET28/bAdv3 hexon (Б): 1 – культура клеток без ИПТГ; 2 – 2
часа инкубирования с ИПТГ; 3 – 4 часов инкубирования с ИПТГ; 4 – 6
часов с ИПТГ; 5 – 12 часов с ИПТГ;
6 – молекулярные маркеры
Штамм E.coli BL21/pET32/bAdv3hexon производил белок молекулярной массой 34 кДа.
Штамм-продуцент E.coli BL21/pET28/bAdv3hexon производил белок молекулярной массой 24 кДа.

14.

Таблица 1
Относительные количества рекомбинантных белков (%) в
нерастворимых фракциях лизатов штаммов-продуцентов при различных
условиях индукции экспрессии

15.

16.

Рис. 6 - ПААГ электрофорез белков после денатурации
мочевиной: 1 –осадок после разрушения клеток; 2 – над
осадочная жидкость после разрушения клеток; 3 – 1М
мочевина; 2 - 4М мочевина; 5 – 8М мочевина; 6 – 2 М
мочевина; 7 – молекулярные маркеры

17.

Рис.7 - ПААГ электрофорез белков после
хроматографической очистки: 1-3 – 200 мМ имидазол; 4 –
молекулярный маркер; 5-7 – 500 мМ имидазол