Молекулярная диагностика рака молочной железы

1. Молекулярная диагностика рака молочной железы

Ст. 652гр. л/ф Зеленова Е.Е.

2.

Список сокращений
ER – еstrogen receptor
PR – progesterone receptor
ИГХ – иммуногистохимия
ПЦР – полимеразная цепная реакция
ОТ-ПЦР – обратно-транскриптазная ПЦР
BRCA1 – BReast CAncer 1
BRCA2 – BReast CAncer 2
Ki67 – индекс пролиферации
HER2 – Human Epidermal growth factor Receptor 2
FISH – fluorescence in situ hybridization
CISH – chromogenin in situ hybridisation
РЭА – раковый эмбриональный антиген
СА-15-3 – Cancer Antigen 15-3
miR21 – микроРНК21
miR155 – микроРНК155
ERBB – гомолог В вирусного онкогена эритробластной лейкемии птиц
(синоним EGFR/HER);
2

3.

Рак молочной железы – злокачественная опухоль,
исходящая из эпителия ткани
молочной железы.
От 60 до 75% случаев связано с
нарушениями биосинтеза и метаболизма
гормонов, от 20 до 30% — с
гиперэкспрессией гена ERBB2 и 5—10% — с
наследственными факторами
(BRCA1, BRCA2, CHECK, NBS1, tP53).
(№1(95)_2011 НАУКА И ИННОВАЦИИ)
В структуре смертности женского
населения РМЖ находится на первом
месте, составляя 17,0%.
РМЖ у мужчин составляет менее 1%
опухолей этой локализации, занимая
0,3% в структуре заболеваемости.
3

4.

…Определение в опухоли и/или в пораженных опухолью лимфатических
узлах уровня экспрессии РЭ и РП является обязательным; предпочтение
отдают ИГХ–методу.
Результат определения рецепторного статуса должен включать
данные о процентном содержании РЭ+ и РП+ клеток и интенсивности
окрашивания. Одновременно ИГХ–методом должны быть определены
уровни экспрессии HER2 и Ki67, которые также учитываются при
планировании терапии. При спорном результате ИГХ–анализа HER2
следует провести определение амплификации гена HER2 методом in situ
гибридизации (FISH или CISH).
Клинические рекомендации по диагностике и
лечению больных раком молочной железы, 2017
4

5.

Зачем нужна молекулярная диагностика рака
молочной железы?
Рекомендуется план системной (лекарственной) терапии основывать
на принадлежности опухоли к одному из биологических подтипов.
Уровень убедительности рекомендаций - A (уровень
достоверности доказательств - Ia)
Рекомендуется план адъювантной лекарственной терапии основывать
на принадлежности опухоли к одному из молекулярно-биологических
подтипов
Уровень убедительности рекомендаций - A (уровень
достоверности доказательств - Ia).
5

6.

Иммуногистохимическое исследование
Альберт Кунс
(1912 – 1978)
– разновидность исследования ткани с помощью специальных реактивов по
принципу антиген-антитело.
Прямая ИГХ
Непрямая ИГХ
6

7.

ПЦР – полимеразная цепная реакция
ОТ-ПЦР – обратно-транскриптазная ПЦР
(ПЦР-РВ, Real-Time PCR)
ПЦР в реальном времени
— экспериментальный метод молекулярной биологии, способ значительного
увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты
(ДНК) в биологическом материале (пробе).
с помощью
интеркалирующих
красителей
ОТ-ПЦР
на основе
флуоресцентно-меченых
олигонуклеотидных
зондов
7

8.

FISH – fluorescence in situ hybridization
FISH
цитогенетический метод, который применяют для детекции и определения
положения специфической последовательности ДНК на метафазных хромосомах
или в интерфазных ядрах in situ. Кроме того, FISH используют для выявления
специфических мРНК в образце ткани.
8

9.

CISH – chromogenin in situ hybridisation
CISH
альтернативный нефлуоресцентный метод, при котором выявление
гибридизованных ДНК-зондов происходит с помощью иммунопероксидазной
реакции.
9

10.

Микрочипирование
ДНК
используются меченные
флуоресцентом последовательности
ДНК.
10

11.

11

12.

РЭА – раковый эмбриональный антиген
СА-15-3 – Cancer Antigen 15-3
miR21 – микроРНК21
miR155 – микроРНК155
Маркеры опухолевого роста:
1. белок-ассоциированные маркеры
(CA 15-3 и РЭА)
2. РНК-маркеры (miR21, miR155)
3. ДНК-маркеры.
12

13.

BRCA1 – BReast CAncer 1
BRCA2 – BReast CAncer 2
BRCA-1:
• 5382insC
• 4153delA
185delAG
BRCA-2:
• 6174delT
13

14.

ER- еstrogen receptor
PR-progesterone receptor
1. ER / PR
Процент, который говорит о том, сколько
клеток из 100 дали положительный
результат в отношении наличия рецепторов
гормонов.
0% - ни одна клетка не имеет рецепторов
100% - рецепторы гормонов обнаружены во
всех клеток.
- протеиновые ядерные рецепторы
Оценка в баллах по шкале «Allred»
(оценивается количество клеток,
вырабатывающих рецепторы гормонов, а
также интенсивность (выраженность)
окраски при определении рецепторов)
- 2 балла: редкие клетки, которые проявляют
слабое окрашивание (0-2б = ERотрицательный);
- 4-6 экспрессия эстрогенов умеренная,
- 7-8 экспрессия эстрогенов высокая.
14

15.

Ожидаемый эффект эндокринной терапии
1) РЭ-положительный, РП-положительный: эффект терапии у 75-80% больных;
2) РЭ-положительный, РП-отрицательный: 40-50%;
3) РЭ-отрицательный, РП-положительный: 25-30%;
4) РЭ-отрицательный, РП-отрицательный: 10% пациентов или менее.
15

16.

2. Her2
Her2 = Human Epidermal Growth Factor Receptor 2
- тирозиновая протеинкиназа семейства рецептора эпидермального фактора
роста EGFR/ErbB, кодируемого геном человека ERBB2
- Опухоли с Her2neu позитивным статусом отличаются агрессивным течением
Существует две методики определения наличия у опухоли гена Her2neu:
1. Иммуногистохимическое исследование (определяются белки)
0-1 означает, что опухоль без гиперэкспрессии Her2neu.
3 означает, что опухоль с гиперэкспрессией Her2neu.
2. Метод FISH (Флуоресцентная гибридизация in situ) определяется наличие
генов, кодирующих протеины Her2.
16

17.

3. Ki-67
- ядерный белок, связанный с клеточной пролиферацией, маркер пролиферативной
активности опухолевой клетки. Показывает, сколько процентов опухолевых клеток активно
делятся.
Ki-67 меньше 15%, опухоль слабоагрессивная
Ki-67 от 30 до 50% опухоль агрессивная
Ki-67 выше 50% опухоль высокоагрессивная.
Чем ниже показатель Ki-67, тем хуже опухоль реагирует на химиотерапевтическое лечение.
DNA topoisomerase IIα and Ki67 are prognostic
factors in patients with hepatocellular carcinoma
Authors: Yi Cao Ruisheng Ke Shaohu Wang Xu Zhu
Jianwei Chen Chao Huang Yi Jiang, April 6, 2017
Ki-67 является раковым антигеном, который
обнаруживается в делящихся клетках, но
отсутствует в фазе покоя клеточного роста.
Observation of nuclear Ki67 staining in a case of HCC. (A) High expression
of Ki67 in HCC (magnification, ×200). (B) High expression of Ki67 in HCC
17
(magnification, ×400).

18.

Молекулярно-биологический подтип
Клинико-патологическое определение
подтипа
Люминальный А
Наличие всех факторов:
- РЭ положительные
- HER2 отрицательный
- Ki67 низкий (<20%)
- РП высокие (>20%)
Люминальный В (HER2 отрицательный)
- РЭ положительные
- HER2 отрицательный
и наличие одного из следующих факторов:
- Ki67 высокий (>30%)
- РП низкие (<20%)
Люминальный В (HER2 положительный)
- РЭ положительные
- HER2 положительный
- Ki67 любой
- РП любые
HER2 положительный (не люминальный)
- HER2 положительный
- РЭ и РП отрицательные
Базальноподобный
- отрицательные РЭ, РП, HER2 (тройной
негативный протоковый)
1) значение Ki67 следует оценивать, исходя из опыта локальной патоморфологической лаборатории: например, если медиана
значений Ki67 при гормонозависимом РМЖ составляет в данной лаборатории 20%, то значение этого показателя, равное ≤ 10%,
следует расценивать как низкое, а ≥ 30% − как высокое;
2) пороговым значением при определении РП считается 20%;
18

19.

Молекулярнобиологический
подтип
Рекомендуемая
адъювантная системная
терапия
Примечания
Люминальный А
Только гормонотерапия в
большинстве случаев
Адъювантная химиотерапия + гормонотерапии:
- большая степень распространения болезни: ≥Т3; ≥4
пораженных метастазами регионарных лимфатических
узлов;
- 3 степень злокачественности.
Люминальный В
(HER2
отрицательный)
Гормонотерапия +
химиотерапия в
большинстве случаев
При T1a (≤5 мм) и N0: только адъювантная
гормонотерапия.
Остальные больные: химиотерапия антрациклинами и
таксанами в дополнение к гормонотерапии
Люминальный В
(HER2
положительный)
Химиотерапия + антиHER2 терапия +
гормонотерапия
При T1a (≤5 мм) и N0: только адъювантная
гормонотерапия; трастузумаб не показаны.
При T1b,с и N0: возможна химиотерапия паклитакселом
(без антрациклинов) в сочетании с трастузумабом (с
последующей гормонотерапией).
При Т2-Т4 или N+: антрациклины → таксаны +
трастузумаб (с последующей гормонотерапией)
HER2
положительный (не
люминальный)
Химиотерапия + антиHER2 терапия
При T1a и N0: системная терапия не показана.
При T1b и N0: возможна химиотерапия паклитакселом
(без антрациклинов) в сочетании с трастузумабом
При Т1с-Т4 или N+: антрациклины → таксаны +
трастузумаб
Тройной
негативный
(протоковый)
Химиотерапия с
включением антрациклинов и
таксанов
При T1a (≤5 мм) и N0: системная терапия не показана;
Производные платины могут быть включены в режим
адъювантной химиотерапии у больных с доказанными
мутациями гена BRCA
19

20.

Литература:
1) Е.Н. Имянитов. Практическая онкология. 2010; Т.11, №4: 258-266.
2) Берштейн Л.М. Гормональный канцерогенез. - СПб.: Наука, 2000
3) Клинические рекомендации по лечению и диагностике рака молочной железы,
.
2017
4) ЭКСПРЕССИОННЫЙ АНАЛИЗ МИКРОРНК ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И ПРОГНОЗА
РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ - Текст научной статьи по специальности
«Медицина и здравоохранение»Поспехова Н.И.,Поярков С.В.,Зенит-Журавлёва
Е.Г., Шубин П.В.,Карпухин А.В.,Каткова Е.В.,Хайленко В.А. (JOURNAL OF
MALIGNANT TUMOURS)
5) Muti P., Bradlow H I . , Micheli A. et al. Estrogen metabolism and risk of breast cancer:
a prospective study of the 2:16alpha-hydroxyestrone ratio in premenopausal and
postmenopausal women. Epidemiology, 2000, 11, 635-640.
6) Telang NT., Suto A., Wong G.Y. et al. Induction by estrogen metabolite 16 alphahydroxyestrone of genotoxic damage and aberrant proliferation in mouse mammary
epithelial cells. J. Natl. Cancer Inst. 1992, 84, 634-638.
7) http://www.hpvinfo.ru/cancer/Tumors-of-reproductive-bodies/glava-3.html
8) https://medbe.ru/materials/rak-grudi-ili-molochnoy-zhelezy/molekulyarnobiologicheskie-metody-pri-rake-molochnoy-zhelezy/
9) http://worldofoncology.com/materialy/vidy-raka/vidy-raka-ot-a-do-ya/rak20
molochnoy-zhelezy/molekulyarnye-podtipy-raka-molochnoy-zhelezy/