Характеристика генетических мутаций, отвечающих за лекарственную устойчивость Mycobacterium tuberculosis среди пациентов

1. Келейникова Валерия Дмитриевна «Характеристика генетических мутаций, отвечающих за лекарственную устойчивость Mycobacterium

tuberculosis
среди пациентов в
Сибирском федеральном округе».
Научный руководитель:
Врач-микробиолог, Альховик О.И.

2. Актуальность:

• В течение последних лет отмечается неуклонный
рост числа ежегодно регистрируемых случаев
туберкулеза с множественной и широкой
лекарственной устойчивостью (МЛУ и ШЛУ). В
России число заболевших туберкулезом с
множественной лекарственной устойчивостью на
2017 г. составило 49 тыс. человек. В Сибирском
Федеральном округе данный показатель в 2015
году составил 48%.
• В этих условиях для назначения пациенту
оптимального и эффективного режима
химиотерапии необходимо быстрое и точное
исследование лекарственной чувствительности M.
tuberculosis с помощью молекулярно-генетических
методов.

3.

• Тест-системы гибридизационного анализа
на стрипах позволяют одновременно
выявить все известные мутации,
связанные с развитием устойчивости МБТ
к изониазиду и рифампицину («GenoType
MTBDRplus»), а также к фторхинолонам,
аминогликозидам/циклическим пептидам
(канамицин, амикацин/капреомицин,
виомицин) («GenoType MTBDRsl»).
• Однако остается не ясным спектр мутаций
лекарственно-устойчивых штаммов
микобактерий туберкулеза циркулирующих
на территории Сибирского федерального
округа.

4. Цель исследования

• Определить спектр мутаций, связанных
с лекарственной устойчивостью
микобактерий туберкулеза к
антибиотикам первого и второго ряда у
больных в Сибирском федеральном
округе.

5. Задачи исследования:

1. Оценить текущие уровни распространенности
лекарственной устойчивости к основным и
резервным препаратам штаммов микобактерий
туберкулеза, выделенных от пациентов в
Сибирском федеральном округе.
2. Выявить основные мутации, ассоциированные
с лекарственной устойчивостью к
противотуберкулезным препаратам первого и
второго ряда.
3. Сравнить полученные результаты с
фенотипическими тестами для оценки
лекарственной устойчивости M.tuberculosis.
4. Оценить чувствительности и специфичности
молекулярно-генетических методов Genotype.

6. Материалы и методы исследования:

Исследование образцов от пациентов проводилось
на базе Новосибирского научно-исследовательского
института туберкулеза.
Всего было исследовано 143 образца
патологического материала от пациентов. Для
исследования образцов с помощью теста GenoType
MTBDRplus был взят материал от 90 пациентов (40
мужчин и 50 женщин), для теста GenoType MTBDRsl
от 53 пациентов (25 мужчин и 28 женщин).
В качестве образцов для данных тестов
использовались мокрота и культура M.tuberculosis.
Амплификация осуществлялась в режиме реального
времени на приборах ДТ Прайм 96 (ДНК –
технология), гибридизация проводилась в
термошейкере Tween Cubator (Hain Lifescience,
Германия).

7. Результаты исследований

Диаграмма 1. Уровень распространенности M.tuberculosis с
множественной лекарственной устойчивости

8.

Диаграмма 2. Уровень распространенности M.tuberculosis с
широкой лекарственной устойчивости

9.

Локус гена
Мутация
Количество
rpoB
Ser531Leu
33% (35)
katG
Ser315Thr1
52% (55)
inhA
C15T
15 % (16)
Таблица 1. Мутации изолятов M.tuberculosis, связанные с множественной
лекарственной устойчивостью
Локус гена
Мутация
Количетсво
gyrA
Ala90Val-4
33% (15)
gyrA
D94N
4% (2)
rrs
Ala1401Gly
52% (24)
embB
Met306Izo
11% (5)
Таблица 2. Мутации изолятов M. Tuberculosis, связанные с широкой
лекарственной устойчивостью

10.

Сочетание мутаций
Количетсво
rpoB S531L + katG S315T1 + inhA C15T
15% (9)
rpoB S531L + katG S315T1
55% (33)
rrs A1401G + embB M306I
35,2% (12)
rrs A1401G + gyrA A90V
8,8% (3)
gyrA A90V + embB M306I
6% (2)
rrs A1401G + gyrA A90V + embB M306I
8,8% (3)
Таблица 3. Сочетания мутаций изолятов M.tuberculosis, связанные
с множественной и широкой лекарственной устойчивостью

11. Выводы

• 1) Среди 90 штаммов M.tuberculosis в 33% случаев имеет
место мутации в кодоне rpoB S531L , ответственные за
устойчивость к рифампицину, и в 52% мутации katG S315T1,
связанные с устойчивостью к изониазиду, что не позволяет
использовать изониазид в высоких дозировках для лечения
МЛУ-ТБ. Мутации к гену inh A выявлены у 15% штаммов МБТ,
это не позволяет включать в схему лечения этих пациентов
этионамид/протионамид.
• 2) Самым часто встречающимся сочетанием мутаций в
изолятах возбудителя МЛУ-ТБ являлись кодоны rpoB S531L +
katG S315T1 – 55% случаев.
• 3) Доминирующей мутацией, вызывающей формирование
устойчивости к фторхинолонам, явилась мутация gyrA A90V –
33%. Также был обнаружен высокий удельный вес штаммов
устойчивых к аминогликозидам с мутацией в гене rrs A1401G –
52%.
• 4) Самым часто встречающимся сочетанием мутаций в
изолятах возбудителя ШЛУ-ТБ являлись кодоны rrs A1401G +
embB M306I – 35,2%.

12. Спасибо за внимание!