Описание эксперимента. Рыба: Данио рерио

1.

Описание эксперимента
Рыбы: Данио рерио (розовые, флуоресцентные)
Начало эксперимента: 08.10.15 внутримышечно
капсулы с SNAF/Dextran (9500-95000 шт. на
рыбу)
+
14.10.15
внутримышечно
капсулы
Fluorescein/BSA (2250*106 шт. на рыбу)
Окончание эксперимента: 23.10.15
Фиксация: формалин 10%, рН 7.5
Толщина срезов: 7 мкм
Окраска: гематоксилин-эозин

2.

При осмотре полученных срезов через флуоресцентный микроскоп
обращает на себя внимание то, что практически все ткани рыб имеют
очень яркую флуоресценцию, с четко выраженной внутриклеточной
локализацией красителя. Особенно яркой флуоресценцией обладают
эритроциты, содержимое ооцитов и гранулы в гепатоцитах.
почка
Капилляры
с эритроцитами
х10
Флуоресценция на срезах тканей (Ex. 484-504, Em. 517-537 nm).

3.

Эритроциты
Почечные
канальцы
х10
Почка
Мышцы

4.

Жабры
Сосуды
Жаберные
ламеллы
х10
Капилляры
ламелл
Эпителий ламелл
Пилорические
клетки
Эритроциты
х60

5.

Почка
х10
Почечные
канальцы
х60
эритроциты

6.

Почка
Окрашенные
канальцы
Неокрашенные
канальцы
х20
х40

7.

Мозг
х40

8.

Кишечник
х20

9.

Ооциты
х10
Оболочка
ооцита
Разрыв оболочки и
выход содержимого
х10
Гранулы
х60

10.

Объектов по размеру и форме похожих
на капсулы (UFO) на гистологических
срезах не обнаруживается, или они
единичны

11.

Мышцы
UFO
х20
Мышцы (слева) и препарат капсул (справа) при одинаковом увеличении

12.

Мышцы
UFO
Эритроцит
х60
х60
Мышцы (сверху) и препарат капсул (снизу) при одинаковом увеличении

13.

В
печени
рыб
обнаруживается
множественное точечное свечение.
Исходя из того, что «точки», похоже,
локализованы внутри клеток паренхимы
печени и по размеру меньше капсул, это,
видимо,
включения
в
цитоплазме
гепатоцитов.

14.

Сосуд
х40
Гранулы
Паренхима
х60
Печень
Препарат
капсул (ув. х60 р.)

15.

паренхима
х20
х40
Печеночный проток
Х60
Печень (слева, центр) и препарат капсул (справа) при одинаковом увеличении

16.

Результаты:
1. На гистологических срезах через 7 дней
после введения капсул с флуоресциином
самих капсул не обнаруживается (кроме
единичных случаев, которые могут быть
артефактами).
2.
Цитоплазма
клеток,
особенно
эритроцитов, а также включения в
гепатоцитах и ооцитах демонстрируют
сильную флуоресценцию с эмиссией около
530 нм.

17.

Выводы:
1. Капсулы могут теряться при нарезке тканей и
депарафинизации, а могут быть полностью
разрушены в организме.
2. Эозин обладает мощной флуоресценцией в
том же диапазоне длин волн что и
флуоресцеин, что также затрудняет поиск
капсул с флуоресцеином
3. Необходимо делать препараты каждой партии
капсул (иммобилизованные под стеклом) для
контроля