Similar presentations:
Жидкостная хроматография
1. Жидкостная хроматография
2. ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
МЕТОД РАЗДЕЛЕНИЯ И АНАЛИЗА ВЕЩЕСТВ,ГДЕ П.Ф. СЛУЖИТ ЖИДКОСТЬ
Методы жидкостной хроматографии
ЖИДКОСТНО–ТВЕРДОФАЗНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
(адсорбционная)
(ионообменная)
ЖИДКОСТНО-ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
(распределительная)
ЖИДКОСТНО-ГЕЛЕВАЯ
(эксклюзионная)
3. ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЖИДКОСТНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ - ВЭЖХ
ХРОМАТОГРАФИЯ ВЫСОКОГО ДАВЛЕНИЯВпервые реализовали в 1970 г
Шаба Хорват и С.Р. Лински
Эффективность разделения достигается
применением колонок с мелкодисперсными
частицами носителя неподвижной фазы
4. Схема жидкостного хроматографа
5.
6.
7. Распределительная ВЭЖХ
Н.ф. – жидкость, п.ф.- жидкость• Метод основан на распределении вещества между
двумя несмешивающимися жидкостями.
• Разделение происходит из- за различий в
растворимости разделяемых веществ в неподвижной
и подвижной жидких фазах.
8. Неподвижные жидкие фазы
• Иммобилизованные неподвижные жидкие фазын.ж.ф. закреплена на поверхности носителя за счет сил
физической адсорбции.
• Химически закрепленные неподвижные жидкие
фазы
н.ж.ф. закреплена на поверхности носителя
химической связью.
• Носители – сферические пористые частицы на основе
сверхчистого оксида кремния диаметром 3 – 10 мкм.
Диаметр пор – 60 – 300 А˚.
9. Носители неподвижной фазы
10. Неподвижные жидкие фазы
На поверхности SiO2 находятся силанольныегруппы, которые используют для химической
модификации поверхности неподвижной фазы.
CH3
Si OH + Cl Si R
CH3
CH3
Si O Si R + HCl
CH3
11. Неподвижные жидкие фазы
Полярность п.ф. и н.ф. всегда различается.Нормально-фазовая хроматография
п.ф. – малополярная жидкость
н.ф. – полярная жидкость
Обращенно – фазовая хроматография
п.ф. –полярная жидкость
н.ф. – малополярная жидкость
12. Обращенные фазы
CH3Si O Si
CH3
C8, C18
13. Нормальные фазы
R=CH3
Si O Si
R
CH2
3
O
CH2 CH
OH
CH2
CH3
CH2
3
3
CN
NH2
CH2OH
14. Подвижные фазы
• В нормально-фазовой хроматографии п.ф. –диэтиловый эфир, хлористый метилен, хлороформ,
регулируют полярность добавками гексана
(модификатор).
• В обращенно-фазовой хроматографии п.ф. –
метанол, ацетонитрил, тетрагидрофуран,
регулируют полярность добавками воды.
15. КОЛОНКИ
• Прямые трубки правильной формы изнержавеющей стали.
• Для решения различных аналитических задач
выпускают колонки различного диаметра и длины.
Чаще с внутренним диаметром d = 3.9 и 4.6мм.
• Колонка d = 4.6 мм, заполненная частицами
диаметром 5 мкм имеет эффективность от 60000 до
90000 т.т./м при скорости потока 1 мл/мин.
• При длине колонки 25 см можно разделить от 50
до 100 пиков.
16. КОЛОНКИ
17. Детекторы
УФ-детекторы.Флуоресцентные детекторы.
Рефрактометрические детекторы.
Электрохимические
детекторы(кондуктометрические,
кулонометрические, вольтамперометрические).
• Масс-спектрометрический детектор.
18. Заключение
• Жидкостная хроматография является фармакопейнымметодом анализа и является значимым методом
определения фармакологически активных веществ, а
также вспомогательных веществ и примесей.