Внутрилабораторный контроль качества количественных определений

1.

Внутрилабораторный контроль качества
количественных определений.

2.

ЭТАПЫ (ПЕРИОДЫ) ЛАБОРАТОРНОГО
АНАЛИЗА
Основные понятия и термины:
Образец – это биологический материал,
взятый у пациента с целью лабораторного
анализа. Образцом может быть и цельная
кровь, и сыворотка, ликвор, выпотная
жидкость и др. Материал будет образцом до
того момента, пока не начался анализ.
Проба –
часть образца, которая
используется при измерении.

3.

Этапы лабораторного анализа
Доаналитическая фаза (период)
начинается с назначения врачом
лабораторного анализа, включает
взятие материала и заканчивается,
когда проба поступает в
лабораторию. В доаналитической
фазе можно выделить:
внелабораторный и
внутрилабораторный этапы.

4.

Лабораторный (аналитический) период (фаза) –
включает доприборный , инструментальный
период и период связанный с передачей
результатов. Доприборный период включает в
себя транспортировку, разделение, перелив,
хранение и др. процедуры.
Доприборная аналитическая вариация - это
вариация связанная с процедурами от момента,
когда игла входит в вену, до того как образец не
станет пробой, т.е. на этой стадии проблемы
связаны с образцом.
Приборная аналитическая вариация – вариация,
связанная с процессом измерения.

5.

3. Постлабораторный
(постаналитический) период
(фаза) – включает в
себя аналитическую фазу,
связанную с
интерпретацией полученных
результатов.

6.

Факторы влияющие
на результаты
лабораторных
исследований

7.

КАНЦЕЛЯРСКИЕ ОШИБКИ
1. Ошибочно назван больной. Например, два больных с
одинаковой фамилией (записывают инициалы, возраст).
Неправильно выписан бланк - направление на другого
больного (созвучная фамилия и др.).
2.
Ошибочно идентифицирован образец. Например,
лаборант берет пробу 25 и отливает сыворотку в пробирку
26. После окончания работы лаборант находит 2 образца с
одинаковым номером.
3. Ошибочно заполненные бланки. Например, в образце
198 содержание глюкозы 108 мг, лаборант выписывает
величину 198 мг. В сыворотке исследуют кальций и
фосфор, лаборант результат исследования записывает
наоборот.

8.

Биологические факторы
Внутренние факторы такие как раса, пол и возраст, могут влиять на
концентрации
исследуемых
клинико-химических
и
гематологических
анализов.
Эти
факторы
является
индивидуальными особенностями и по этому их нельзя устранить
Возраст может влиять на концентрации анализов в крови и моче в
период сразу после рождения, в пубертатных значительно выше, чем
у взрослых
Раса. Содержание аналитов от расовой принадлежности. По
сравнению европейцев у чернокожих американцев оба пола
содержание лейкоцитов существенно меньше
Пол. Как и в отношении внешнего вида и специфичных для каждого
пола гормональных уровней, различия могут быть обнаружены и в
клинико-химических и гематологических показателях.
Беременность. Трактуя результаты лабораторных исследований у
беременных, необходимо учитывать срок беременности в момент
взятия пробы

9.

Изменения физического состояния
Диета и потребление жидкости служит основным
факторами, влияющими на многие аналиты в клинической
химии. Степень вызванных приемом пищи изменений
содержание аналитов зависит от состава пищи времени,
прошедшим от момента приема пищи до взятия пробы.
Обычно забор крови для анализа делают натощак после 8—12
ч. голода. За редким исключением, разрешается пить воду.
Если забор крови производится через 3—4 ч. после завтрака,
полученные результаты стандартных тестов отличаются от
величин «натощак». Если же кровь берут через 3—4 ч.
после обеда, показатели отклоняются в 'еще большей
степени.
С другой стороны, недостаточное питание и голодание
могут изменить
концентрации аналитов клинически
значимым образом.

10.

Положение тела.
Объем плазмы, измеренный у человека,
который лежал несколько часов, на 10—15%
больше, чем у человека, который менял
положение или стоял около часа. Это
означает, что результаты измерения
концентрации веществ в крови у человека,
который лежал, больше часа, будут более
низкими, чем у него же после ходьбы.

11.

Возраст. Возраст может влиять на показатели аналитов биологических
жидкостей в различные возрастные периоды. Особенно показательны
изменения красной и белой крови.
Причем нижеприведенные отличия показателей периферической крови имеют
физиологическое обоснование. начительные изменения претерпевает
лейкоцитарная формула, что выражается в падении числа нейтрофилов и
увеличении количества лимфоцитов. На 5-ый день жизни их число сравнивается
(так называемый первый перекрест), составляя в среднем 40–44% в формуле
белой крови.
После года вновь увеличивается число нейтрофилов, а количество
лимфоцитов постепенно снижается. В возрасте 5–6 лет вновь происходит
перекрест в лейкоцитарной формуле (так называемый второй перекрест),
когда число нейтрофилов и лимфоцитов вновь сравнивается. В последующем
отмечается нарастание числа нейтрофилов при снижении числа лимфоцитов.
С 12 лет лейкоцитарная формула уже мало чем отличается от таковой
взрослого человека.

12.

Раса.
По сравнению с европейцами у чернокожих
американцев обоего пола.
Содержание лейкоцитов существенно меньше.
Эта разница без труда объясняется за счет
уменьшенного числа гранулоцитов.
Наоборот, содержание Нв, гематокрита и
число лимфоцитов одинаково в обеих
группах. Число моноцитов у европейцев
превышает этот показатель у негров.

13.

Беременность.
При неосложненной беременности в организме
женщины происходит целый ряд адаптационноприспособительных процессов, направленных на
обеспечение адекватного течения гестационного
периода, роста и развитие плода. Значительная
перестройка жизнедеятельности организма
беременной сопряжена с изменениями в системах
крови, гемостаза, эндокринной, иммунной,
биохимического состояния организма. Следовательно,
лабораторные показатели беременных
и небеременных женщин различны.

14.

Голодание. Длительное голодание тесно связано со
снижением расхода энергии.
Во
избежание
неправильной
интерпретации
лабораторных результатов в качестве стандартной
процедуры взятие образцов рекомендуется производить
после 12-часового голодания и при снижения
физических активности.
Физические упражнения. Следует выделить 2 типа
упражнений. При упражнения первого типа статических или изометрических упражнениях короткой
продолжительности и высокой интенсивности используется энергия.
Второй тип – динамическая или изотоническая
упражнения
малой
интенсивности
и
большой
продолжительности

15.

Высота над уровнем моря. Содержание некоторых
компонентов крови подвержено значительным
изменениям в зависимости от высоты над уровнем
моря. С увеличеньем высоты значительно
повышение наблюдается в отношении, например С
- реактивного белка (до 65% на высоте 3600 м),(до
43 на высоте 5400 м) гематокрит и гемоглобин(да
8% на высоте 1400 м) и мочевой кислоты.
Влияния курения. Курение вызывает множество
острых и хронических изменений концентрации
аналитов, причем хронические эффекты скорее
умеренные. Курение повышает концентрации в
плазме или сыворотке жирных кислот, адреналина,
свободного глицерина, альдостерона и кортизола

16.

Алкоголь. Употребление алкоголя в зависимости от
его продолжительности и степени может влиять на
многие аналиты. Эти изменения частично
используются для диагностики и терапевтического
мониторинга. Среди обусловленных алкоголем
изменений следует выделить остро и хронических
возникающих изменения
Остро возникающие изменения (в течение 2-4
часов) при употреблении этилового спирта
проявляются снижением глюкозы в сыворотке и
повышением лактата в плазме в результате
торможения глюконеогенеза в печени.

17.

Взятия образцов. Влияние циркадного
ритма
Некоторые анализы обнаруживают тенденцию к колебаниям
их концентрации в плазме в течение суток. Так концентрация
калия ниже после полудня, по сравнению с утренней тогда как
содержание кортизола возрастает в течение дня и снижается
ночью. Ритм кортизола является причиной недостоверных
результатов теста на толерантность к глюкозе, проводимого
во второй половине дня. По этой причине референтные
интервалы обычно устанавливают при исследованиях между
7 и 9 часами утра.
Анализы могут изменяться в течение менструального цикла
Анализы пробы которые взяты не во время может быть хуже
чем отсутствие анализа вообще
Проба результат анализа который слишком поздно взята
напрасно

18.

Транспортировка и хранение
Влияние времени температуры при
транспортировке. Передача проб в лабораторию
может осуществляться различными путями.
Обычно пробы передаются за короткий срок,
если лаборатория расположена поблизости или
в самой клинике и при этом не возникает ни
каких проблем
Однако интервал времени от момента взятия
пробы крови до ее центрифугирования не
должно превышать 1 час.

19.

Высвобождение калия из эритроцитов при
комнатной температуре минимально вследствие
температурной зависимости активности Na K –
Атф-азы. Этот эффекты усиливается при 4 С и
свыше 30 С. Концентрация глюкозы с повышением
температуры снижается, тогда как в отношении
явление, поскольку его концентрация повышается
под давлением.
При пересылке крови или других биологических
жидкостей, взятых от человека, в отдаленную
лабораторию должны соблюдаться строгие
правила безопасности

20.

Термины и определения.
Точность измерений - качество измерений,
отражающее близость их результатов к истинному значению
измеряемой величины. Высокая точность измерений
соответствует малым погрешностям всех видов, как
систематических, так и случайных.
Погрешность измерения - отклонение результата
измерения от истинного значения измеряемой величины.
Систематическая погрешность измерения - составляющая
погрешности измерения, остающаяся постоянной или
закономерно изменяющаяся при повторных измерениях
одной и той же величины.

21.

Правильность измерений - качество измерений,отражающее
близость к нулю систематических погрешностей в их
результатах.
Случайная погрешность измерения - составляющая
погрешности измерения, изменяющаяся случайным образом
при повторных измерениях одной и той же величины.
Воспроизводимость измерений
- качество измерений, отражающее близость друг к другу
результатов измерений, выполняемых в одинаковых
условиях.
Аналитическая серия - совокупность измерений
лабораторного показателя выполненных единовременно в
одних и тех же условиях без перенастройки и калибровки
аналитической системы.

22.

Внутрисерийная воспроизводимость (сходимость
измерений) - качество измерений, отражающее близость
друг к другу результатов измерений, выполняемых в одной
и той же аналитической серии.
Межсерийная воспроизводимость - качество измерений,
отражающее близость друг к другу результатов измерений,
выполняемых в разных аналитических сериях.
Общая воспроизводимость - качество измерений,
отражающее близость друг к другу результатов всех
измерений (определяется внутрисерийной и межсерийной
воспроизводимостью).
Примечание. Обратным понятию воспроизводимости
является понятие вариабельности измерений, являющейся
мерой различий их результатов.

23.

Установленное значение - метод-зависимое значение
определяемого показателя, указываемое
изготовителем контрольного материала в паспорте
или инструкции.
Специфичность (селективность) – это способность
метода выявлять лишь тот компонент, для
определения которого данный метод исследования
предназначен. На специфичности анализа сказывается
прежде всего интерференция веществ, т.е. влияние
посторонних продуктов на ход реакции.

24.

Аналитический период
включает
собственно
обработку
биологических материалов, выбор метода,
проведение лабораторного анализа и расчет.
Лаборатория
несет
ответственность
за
аналитический период.
Высокое качество требует исполнения всех
условий
согласно
методике:
строгого
температурного
и
временного
режимов,
применения стандартных растворов вместо
калибровочных кривых, наборов реактивов одной
серии.

25.

Методы исследования по своим аналитическим качествам
можно разделить на три группы:
а) рутинные, повседневно используемые в лабораторной
практике. Они могут быть унифицированными, рекомендованными
и
характеризуются
доступностью
для
повседневного
воспроизведения в обычных клинических лабораториях и
достаточной точностью в соответствии с потребностями
клинической диагностики;
б) референтные, обладающие более высокой точностью, чем
рутинные методы и используемые для оценки свойств последних и
их аттестации, для апробации материальных средств анализа
приборов, контрольных материалов и калибраторов;
в) окончательные (дефинитивные) - отличающиеся наиболее
точными характеристиками, достижимыми на современном уровне
науки и техники. Они используются для оценки референтных
методов и первичных референтных материалов.

26.

В
практике
клинической
диагностики клиницист имеет дело с
результатами,
полученными
рутинными методами, но он должен
знать, что в cпopных случаях
надежность результатов исследований
может
быть
проверена
с
использованием более точных методов
и средств.

27.

При выборе методов следует учитывать их качество:
надежность,
в
том
числе
правильность
и
точность;
чувствительность и специфичность.
Надежность лабораторного исследования - это совокупность
качеств и параметров, которые характеризуют информативность,
аналитическую пригодность и результативную применимость
анализа в зависимости от целей исследования.
Правильность анализа выражает, в какой степени средние
величины результатов лабораторных исследований совпадают с
истинным содержанием исследуемого компонента в биологической
пробе.
Сходимость результатов - это качество измерений, отражающее
близость друг к другу результатов измерений при выполняемых
условиях (параллельность анализов).
Воспроизводимость - это качество измерений, отражающее
близость друг к другу результатов повторных определении в одном
и том же материале, выполняемых в разное время (или в разных
местах).

28.

Например, один анализ будет проведен
завтра, другой послезавтра и т.д. - это
разброс по времени.
Чувствительность метода определяется
его способностью выявлять наименьшие
различия между двумя концентрациями
исследуемого вещества. При этом следует
учитывать объем исследуемой пробы, объем
общей пробы, характер измеряемой пробы.
Предел чувствительности - это та
наименьшая
концентрация
компонента,
которая выявляется данным методом.

29.

Практически определить нижний предел
чувствительности для фотометрических методов
можно
следующим
образом:
про
водят
многократное исследование (не менее 20) холостой
пробы и проб с низкой концентрацией
анализируемого вещества и устанавливают с
заданным уровнем значимости статистически
достоверные различия между результатами
холостой и опытной проб с низким значением
анализируемого вещества, которое и будет
количественно соответствовать нижнему пределу
чувствительности метода.

30.

Специфичность - свойство метода выявлять
искомое вещество вне зависимости от других
ингредиентов. В настоящее время наиболее
специфичным является метод иммуноферментного
анализа.

31.

Необходимо отметить следующие ошибки
аналитического периода.
1. Грубые оши6ки - те, которые выходят за пределы
допустимых ошибок. Они могут быть обусловлены плохой
пипеткой, неправильным светофильтром.
2. Случайные ошибки - они не выходят резко за допустимые
пределы. От них избавиться трудно, но важно оценить размер этих
ошибок. Именно эти ошибки приводят к разбросу данных, т.е.
влияют на сходимость и воспроизводимость результатов.
З. Систематические ошибки - имеют одинаковую погрешность
по знаку. Они повторяются при каждом определении и могут быть
вызваны неправильно приготовленным стандартным раствором или
испорченным фотоэлементом.

32.

Грубые
ошибки:
одиночное
значение исследуемого компонента,
выходящее за допустимые пределы
погрешности.
Причины:
недостаточная
тщательность
в
работе
(неправильная дозировка, ошибки в
расчетах, небрежность в методике).

33.

Случайные ошибки: одиночное значение, не
выходящее за допустимые пределы погрешности,
но стремящиеся к входу за эти пределы. Причины:
1.неравномерное перемешивание пробы;
2.нестабильность приборов, инструментария;
3.неточность работы персонала (ошибки в
пипетировании,
неправильное
считывание
результатов).
Случайные ошибки невозможно исключить, но
можно ограничить.

34.

Систематические ошибки: погрешности, одинаковые по знаку,
происходящие от определенных причин, влияющие на результаты
либо в сторону увеличения, либо в сторону уменьшения. Наиболее
часто встречаются следующие виды систематических ошибок:
1.
Методические ошибки - зависят от особенностей
применяемого метода (наиболее серьезные причины и устранить их
трудно).
2.
Ошибки, зависящие от приборов и реактивов.
3.
Ошибки оперативные - неправильное или неточное
выполнение аналитических операций.
4.
Ошибки индивидуальные.
Последние три причины систематических ошибок можно устранить
и свести до минимума.

35.

Величина систематических ошибок
влияет на правильность результатов.
Нужно отметить, что случайные
ошибки, определяющие сходимость
и воспроизводимость, также влияют
на правильность.

36.

Постаналитический
период
подразумевает регистрацию анализов в
лабораторных журналах и клиническую
интерпретацию результатов.
Цель внутри лабораторного контроля
качества - это система мер, направленных на
сведение к минимуму случайных ошибок.

37.

Точность и правильность анализа можно контролировать,
исследуя пробы специального контрольного материала. Для
организации внутрилабораторного контроля качества контрольным
материалом могут служить:
1. Контрольные
сыворотки с
неизвестным
содержанием
компонентов - для определения воспроизводимости. Они могут
быть собственного изготовления - так называемые сливные
сыворотки, а также производственные (в этом случае в паспорте
должен быть указан перечень компонентов и методы анализа). При
анализе важна стабильность концентраций компонентов во времени.
2. Заводские контрольные материалы с известным содержанием
компонентов. К ним должен быть приложен перечень
биохимических компонентов, их концентрации, методы анализа и
единицы измерения.

38.

Контрольные материалы с неизвестным содержанием обычно
готовятся самостоятельно. Этапы приготовления сыворотки:
Оставшуюся от ежедневных проб сыворотку от больных
сливают в пластиковые бутыли, замораживают и хранят при
температуре - 20 градусов. Гемолизированную, желтушную,
липемическую и загрязненную сыворотку, а также сыворотку
больных с подозрением на гепатит и СПИД от6расывают. Это
делают до тех пор, пока не накопится 1,5 л сыворотки.
Перед разливом сыворотку оттаивают при комнатной
температуре, тщательно перемешивают стеклянной палочкой или
при помощи магнитной мешалки. Слив центрифугируют при 3000
06/ мин в течение 10-20 минут в нескольких удо6ных 6утьиях для
оседания фи6рина.
Сыворотку фильтруют через 6умажный фильтр, разливают по 35 мл в отдельные стерильные флаконы (например, из-под
пенициллина) , герметически укупоривают и помещают в
вертикальном положении в морозильную камеру при -20 градусов.

39.

Флаконы подписывают по дате разлива
сыворотки.
Приготовленная таким образом сыворотка
хранится до 6-8 месяцев и может использоваться
для контроля за анализом глюкозы, общего 6елка,
холестерина, креатинина, кальция, мочевины.
Самым чувствительным из перечисленных
компонентов является глюкоза, Снижение ее
уровня в контрольном материале тре6ует замены
старой сыворотки.

40.

Систематическая погрешность характеризует правильность
измерений, которая определяется степенью совпадения
среднего результата повторных измерений контрольного
материала (Хср) и установленного значения измеряемой
величины (УЗ). Разность между ними называется величиной
систематической погрешности или смещением, сдвигом и
может быть выражена в абсолютных или относительных
величинах. Систематическая погрешность, выраженная в
относительных величинах, или относительная
систематическая погрешность рассчитывается в процентах
по формуле:
где Хср- среднее значение измерений контрольного
материала,
УЗ - установленное значение.

41.

Математически величина случайной погрешности
выражается среднеквадратическим отклонением (S)
и коэффициентом вариации (CV), которые
рассчитываются следующим образом:
-среднеквадратическое отклонение (S):
-где Хср- среднее арифметическое значение
результатов n измерений (x1, x2,... , xn);
- Х – результат отдельного определения;
- n – число определений.

42.

-коэффициент вариации (CV):

43.

Контрольные правила
12S - если один из результатов анализа контрольного мазка выходит за
пределы X ± 2S, то проверяется последовательно наличие всех
нижеследующих признаков, и аналитическая серия признается
неудовлетворительной, если присутствует хотя бы один из них
(используют как предупредительный критерий).
13S - одно из контрольных измерений выходит за пределы X ± 3S.
- два последовательных контрольных исследований выходят за пределы X
± 2S.
R4S - два контрольных исследования расположены по разные стороны от
коридора X ± 2S.
4iS - четыре последовательных контрольных исследования выходят за
пределы X ± 1S.
10х - десять последовательных контрольных исследований располагаются
по одну сторону от линии X.
Контрольные пределы l3s, R4s говорят о случайных ошибках; 22S , 41S,
10Х – о систематических ошибках.