Процесс изготовления материала для гистологического исследования

1.

www.Histotechnology.ru
Добро
пожаловать!
В школу для лаборантов-гистотехнологов г. Санкт-Петербург
г. Санкт-Петербург 2023
год

2.

www.Histotechnology.ru
Возможные артефакты в процессе изготовления
материала для гистологического исследования.
Пути решения.
Палеха Т.Ю.
Член Ассоциации специалистов в области лабораторной
гистотехнологии
г. Санкт-Петербург 2023 год

3.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты - это серьезная проблема в гистологической технике, с позиции их влияния на
интерпретацию микроскопической картины и формулировку патоморфологических заключений.
Артефакты являются результатом нарушения методики приготовления препаратов и могут возникать
на следующих этапах гистологического цикла:
• До лабораторный этап;
• Фиксация;
• Декальцинация;
• Проводка;
• Заливка;
• Микротомия;
• Монтирование среза на предметное стекло;
• Окраска;
• Заключение под покровное стекло.

4.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Причины возникновения…
• Последствия неправильных действий сотрудников
операционного блока и эндоскопических отделений;
• Некачественная работа гистотехника;
• Неправильные протоколы и методики;
• Неисправность оборудования;
• Отсутствие коммуникации внутри лаборатории и между
отделениями.

5.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Как избежать появления артефактов до попадания материала в
лабораторию…
Избегать перегрева и высушивания материала.
Максимально быстро помещать материал в фиксатор.
Использовать 10% нейтральный формалин (НЕ готовить самостоятельно, НЕ физраствор, НЕ
спирт, НЕ вода).
Использовать подходящую тару.
Соблюдать условия хранения и транспортировки (не перегревать, не переохлаждать)

6.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты фиксации…
Причины неравномерной или недостаточной фиксации
Несвоевременная фиксация;
Недостаточный объем фиксирующего раствора;
Фиксирующий раствор низкого качества;
Недостаточное время фиксации;
Температура фиксатора выше 50°C –коагуляция белков.
Как можно быстрее доставлять в лабораторию;
Соотношение фиксатора к образцу должно быть 20:1;
Использовать качественные реагенты;
Подкрашивать мелкие образцы.

7.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты фиксации…
Формалиновый пигмент
Коричневый или черный мелкозернистый
осадок, связанный с эритроцитами или
находящийся вблизи них.
Необходимо использовать фиксационный раствор
высокого качества с оптимальным pH.
Перед
окрашиванием
обработать
срез
насыщенным спиртовым раствором пикриновой
кислоты.
www.Histotechnology.ru

8.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты декальцинации…
Плохая фиксация.
Длительная декальцинация.
Неполная декальцинация .
Неадекватно подобранный декальцинирующий раствор.
Адекватная и качественная фиксация обеспечивает
достаточную защиту ткани от дегидратации при
обработке в кислотах .
Избыток кальция может быть удален путем
смачивания поверхности блока декальцинатором на 515 мин перед микротомией.
www.Histotechnology.ru

9.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты проводки…
Неправильная программа проводки
Программу проводки необходимо выбирать в зависимости от используемого
оборудования, реагентов, типа ткани и размеров образцов.
Слишком длинная программа для маленьких (например,
эндоскопических) биопсий или слишком короткая для
крупных образцов, особенно содержащих жировую ткань
(молочная железа и др.), может привести к дефектам
проводки материала.

10.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты проводки…
Отсутствие дополнительной фиксации
Если после неполной фиксации образцы ткани при проводке попадают в спирт, то возникает феномен
зональной фиксации (формалиновая фиксация по периферии образца, спиртовая фиксация в центре).
Для оптимальной проводки и получения качественных
микропрепаратов ткань должна быть хорошо
зафиксирована за пределами процессора, чтобы обеспечить
отмывку буфера из нейтрального формалина.
Rolls G.O.(editors). 101 Steps to Better Histology // Leica
Microsystems / пер. на русский язык / под ред. П.Г
Малькова, Г.А. Франка. – Wetzlar, 2010.

11.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты проводки…
Некачественные реагенты
Грязные реактивы;
Недостаточный объем жидкости в канистрах;
Перепутанные реагенты.
Реагенты для проводки заменяются в четком соответствии с
инструкциями!
Канистры с отработанными реагентами должны быть
подписаны и утилизированы.
www.Histotechnology.ru

12.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты заливки…
Механические и термические повреждения объектов
Образцы не следует силой придавливать ко дну заливочной формочки. Некоторые образцы могут быть
переломаны.
Если щипцы, которыми производится заливка, нагреваются до температуры большей, чем температура
плавления парафина, возникают локальные термические повреждения ткани.
Все манипуляции с образцами необходимо
выполнять аккуратно.
Следить за температурой горячей части
заливочной станции и инструментов.

13.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты заливки…
Переполнение формочки парафином
При заливке в кассету следует наливать ровно столько
парафина, чтобы заполнить ее до краев.
Потеки парафина вокруг блока необходимо обрезать по краям.
Избыточное количество парафина вызывает его затекание
между кассетой и формой. Из-за чего кассеты не плотно
фиксируются в микротоме.
www.Histotechnology.ru

14.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты заливки…
Неадекватно подобранный размер формочек
Заливочные формочки следует подбирать
сообразно размеру тканевых образцов.
Широкая полоса пустого парафина, не содержащего
ткани, значительно увеличивает площадь среза.
Образец ткани не должен касаться краев формочки,
так как не вся ткань прорежется при микротомии.
www.Histotechnology.ru

15.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты заливки…
Неплотное прилегание кусочка к
поверхности реза
Необходимо аккуратно прижимать кусочек к
поверхности горячей формочки.
Неплотное прилегание кусочка к поверхности реза
в блоке увеличивает количество «пустого
парафина», который при микротомии приходится
срезать. Это увеличивает время процедуры,
вызывая дополнительный износ деталей и лезвий.
www.Histotechnology.ru

16.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты заливки…
Преждевременное застывание
парафина в формочке
Преждевременное застывание парафина в форме приводит к неравномерному застыванию в блоке,
появлению трещин в толще блока и в окружности кусочка.
Парафин нужно наливать быстро, в хорошо прогретую
заливочную форму.
При обнаружении дефектов блок следует расплавить и залить
вновь.

17.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты заливки…
Пузыри в блоке
Пузыри в блоке, образуются при начале его застывания
во время заливки. Они усложняют микротомию и могут
привести к потере кусочка.
Использовать нужно парафин,нагретый выше его
верхней цифры диапазона точек плавления на 3-4 °C.
Например парафин с температурой плавления 56-60 °C
греть до 64 °C.
www.Histotechnology.ru

18.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты микротомии…
Следы от ножа
Для микротомии всегда следует использовать острые
лезвия высокого качества.
Не следует использовать лезвия после появления на
нем полос.
www.Histotechnology.ru

19.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
Артефакты микротомии…
Неаккуратная подрезка (тримминг) блока.
В результате грубой подрезки с поверхности блока
могут выпадать фрагменты ткани, а так же
появляться рваные дефекты ткани, похожие на
дырки, «проеденные молью».
Нужно аккуратно отполировывать поверхность блока.
Первые 5-6 тонких срезов не использовать для
монтирования на стекло.
www.Histotechnology.ru

20.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты микротомии…
Эффект жалюзи
Малозаметная вибрация лезвия с маленькой
амплитудой, может быть вызвана плохим
закреплением блока, лезвия, держателя лезвия
(станины) или очень твёрдой тканью (кальцинаты и
проч.)
Быстрая резка хрупких плотных блоков может
привести к вибрационным артефактам.
Уменьшить скорость резки.
Хорошо отрегулировать и очищать микротом.
Обращать внимание на надежность крепления ножа и образца в держателях.

21.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты микротомии…
Пузырьки воздуха под срезом
Предотвращайте образование пузырьков воздуха во флотационной емкости до того, как срезы
помещаются в воду.
Область среза над пузырьком часто разрушается и может быть утрачена во время окрашивания.

22.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты микротомии…
Срезы с разных блоков во флотационной емкости
(контаминация) и прочие загрязнения
Не следует оставлять во флотационной емкости
срезы с двух или нескольких блоков. Это может
привести к неверной идентификации образцов.
Особенно высокий риск возникает при
одновременной обработке тканей одного типа.
Срезы более чем с одного блока не должны находиться вместе во флотационной емкости.
Необходимо тщательно очищать емкость.
Соблюдать гигиенические меры, направленные на исключение попадания плоского эпителия с
рук и клеток эпителия слизистых оболочек носоглотки и ротовой полости при чиханье и кашле.

23.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Артефакты микротомии…
Неверно выбранная температура в бане
Температуру воды во флотационной емкости следует тщательно контролировать. Оптимальная
температура – на 10-12 ºС ниже температуры плавления парафина, тогда срезы быстро расправляются,
но парафин не плавится.
Если срезы оставляются на водяной бане более 15 минут и парафин плавится. Происходит
перерастяжение среза, повреждение и разрушение ткани.
Если вода недостаточно теплая ткань не будет расправляться и при монтаже на предметное стекло будут
возникать морщины.

24.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Как избежать появление артефактов при окрашивании…
Обеспечить постоянные и приемлемые условия окраски.
Необходимо всегда добиваться полной депарафинизации
препаратов.
Реагенты следует регулярно менять в зависимости от
количества окрашенных в них препаратов и следить за уровнем
жидкостей в емкостях для окраски.
Хорошо отмывать препараты от остатков любых реагентов и
растворов, т.е доводить до воды перед погружением в
красители.

25.

Школа для лаборантов-гистотехнологов г.Санкт-Петербург
www.Histotechnology.ru
Спасибо за внимание