2_Общая_организация_потока_работы,_фиксация,_вырезка,_промывка

1. Общая организация потока работы, фиксация, вырезка, подготовка к проводке.

Пешков М.В.
Биолог
Донецк, 2024

2. Поступление материала

Эндоскопические или любые другие мелкие биоптаты
Операционный материал
Аутопсийный материал
Вырезка – не толще 3 мм и не шире 24 х 24 мм
Фиксация ЛЮБОГО вырезанного материала не меньше 24 часов, но не
более 72 часов
Проводка: биоптатов 3 часа,
операционного и аутопсийного материала 13-28 часов

3. Кассетирование материала

• Для проводки использовать только кассеты (ни в коем случае
марлю!)
• Не перегружать кассеты больше ¾ их объема
• Для мелких биоптатов использовать прокладки из разных
материалов
• Толщина кусочков – не более 3 мм, жировых образцов не более 2
мм

4. Правила адекватной фиксации

2-3 мм
10% NBF
Толщина кусочков
ткани для
проводки
10% нейтральный
забуференный
формалин
24 часа
20:1
При комнатной
температуре
Или 18 часов
при 37оС
Соотношение
объемов
фиксатора и ткани

5. Виды формалина

Розовый – для любых мелких образцов
цвет помогает оценить размер и форму, сориентировать
при заливке и увидеть его расход при микротомии
Голубой – для любых больших образцов
цвет нужен для исключения случайного
перепутывания с любой другой жидкостью

6. Цвет и запах формалина

По цвету и запаху формалина можно убедиться, что клиницисты
использовали правильный формалин.
Тип и концентрации красителей подобраны так, чтобы они не влияли на
конечную окраску цитоплазмы и ядер.
Если материал доставлен в пятницу, особенно лимфоузлы и опухоли, их
обязательно нужно вырезать и не оставлять до понедельника (фиксация
вырезанных кусочков не должна превышать 72 часа). Или оставить
макроматериал фиксироваться при +4оС.

7. Формирование потоков для проводки. Ручной вариант.

Обычные образцы
Мелкие образцы
1л емкость: 38-40 кассет
1 л емкость: до 45 кассет
Несколько параллельных батарей при большем ежедневном
объеме материала
Использовать обычные литровые емкости, не более

8. Кассетирование материала

Внутренние размеры кассеты 25 х 32 х 4.8мм
Заполнять кассету до 75% объема (если это соскоб)
Размер кусочка не более 20 х 20 х 3 мм
Соотношение фиксатор/ткань не меньше 10/1, т.е.,
на каждую кассету не меньше 16.8 мл фиксатора
0.5л емкость - 25 кассет
0.75 л емкость – 38 кассет
1 л емкость – 45 кассет
3л емкость – 135 кассет

9. Предосторожности при ручной проводке

Место батареи для проводки должно быть хорошо вентилируемым, но
не холодным. Если холодно, то смеси и масло можно поместить в
термостат 40оС.
Для перекладки понадобятся 3 дополнительных пустых емкости (одна
для дегидратантов, вторая для смесей и масла, третья для парафинов).
Перекладывая кассеты, нужно дать хорошо стечь остаткам жидкости,
чтобы не загрязнять последующие реагенты предыдущими.
После перекладывания большим пинцетом нужно аккуратно
перемешать кассеты.
Для перекладывания в парафиновые емкости рядом с термостатом
должно быть свободное пространство.

10. Работа с термостатами

Показания на индикаторе температуры как правило не совпадают с
реальной температурой реагента в емкости. Всегда требуется
коррекция.
Оптимальная загрузка – 12 литровых емкостей с парафином (3+3 сверху
и 3+3 снизу).
Термоэлементы располагаются по бокам снизу (самые теплые места).
Тепло в термостате лучше распределяется при наличии встроенного
вентилятора.
Пинцет для перекладывания кассет и пустую емкость нужно
обязательно держать внутри термостата.
При работе с горячими емкостями используйте перчатки или прихватки.

11. Батареи для проводки в Таганроге 2007-2023гг

12. Время смены реагентов

При ручной работе смена реагентов в проводке проводится после
помещения тканей в последующие реагенты. Запас
расплавленного парафина должен готовиться за 2 дня до его
смены.
Смену реагентов в процессоре удобнее всего делать либо утром,
перед запуском партии эндоскопий, либо перед запуском ночной
партии материала. Все зависит от пригодности реагентов для
дальнейшей работы.

13. Печать номеров

Программа Excel
Шрифт 18, жирный,
выравнивание по правому краю
Все границы ячеек выделить
Номера с… по…
Бумага обычная, для принтеров
(не растворяется в фиксаторе и
реактивах для проводки)
Лазерный (черно-белый)
принтер

14.

15. Потоки биологического материала. Мелкие образцы.

• Мелкие образцы (эндобиоптаты, трепанобиоптаты, соскобы и прочие
мелкие образцы, толщина не более 2 мм)
- Проводятся по ускоренному расписанию (3-4 часа). Можно выполнить
2 прогона в день, но нужно учесть время, необходимое для заливки
проведенных образцов
- Проводятся в тех же аппаратах, что и хирургический материал, потому
нужно запускать утром
- Как правило, здесь неполные загрузки, потому смена реагентов
проводится перед этими запусками и после них реагенты не меняются
(если корзины неполные)
- Фиксируются и промываются заранее, вне процессора
- Отсрочка старта возможна, но почти не практикуется

16. Потоки биологического материла. Крупные образцы.

Крупные образцы (аутопсийные, операционные образцы толщиной не
более 3 мм)
Проводятся по ночному расписанию (13-14 часов). Только один прогон в
ночь
Проводятся в тех же аппаратах, что и мелкий материал, потому
запускается обычно после эндоскопического прогона и цикла очистки
Как правило, здесь полные загрузки, смена реагентов проводится перед
запусками мелких биоптатов (если неполные), и перед хирургическими,
если биопсийные запуски идут полные
Фиксируются и промываются заранее, вне процессора
Задержка выполняется либо в первом спирте (дегидратанте), либо в
любой станции, где позволяет процессор

17. Фиксация любых образцов

Начинается после вырезки и кассетирования, примерно к 14 часам
- Кассеты помещают в 10% нейтральный забуференный формалин
- Мелкие образцы помещают в подкрашенный (красный) формалин
- Оставляют все в термостате 40оС до утра
- На выходные кассеты оставляют в формалине без термостата
- Перед проводкой кассеты промывают в проточной воде, активно
пошевеливая: мелкие объекты не менее 30 мин, все остальные 60 мин
- Загружают в корзины процессора по рекомендациям производителя
процессора
-

18. Формирование очереди проводки в аппаратах

Мелкие биоптаты стартуют с утра (примерно 3-4 часа)
Хирургические/аутопсийные образцы стартуют после мелких
объектов
На пятницу хирургические образцы ставятся в ожидание (первый
спирт и к утру понедельника – финиш)
При проводке мелких биоптатов в отдельных процессорах старт
можно начинать как удобно, но учитывать время на заливку. Два
последовательных прогона мелких биоптатов можно сделать за
день, но заливка потребует дополнительного времени

19. Формирование очереди проводки. Ручной метод.

Мелкие биоптаты стартуют с утра (примерно 3-4 часа) в отдельной
батарее.
Хирургические/аутопсийные образцы стартуют с утра. Первый день
– дегидратанты и промежуточные смеси. Перерыв на ночь –
минеральное масло. Второй день – парафины с утра и до обеда.
Потом заливка.
В пятницу хирургические образцы проводятся в спиртах и смесях и
на выходные остаются в минеральном масле. Парафин – в
понедельник с утра.

20. Прерывание проводки

Проводку не рекомендуется прерывать
При ручном методе возникает необходимость перерыва на ночь, то
есть объекты, находящиеся в технологической жидкости не
должны повреждаться
В методе этанол(изопропанол)-ксилол перерыв делают в смеси
ксилол/парафин 1/1 в термостате 40оС
В методе с изопропанолом и минеральным маслом ткани
правильно оставить до утра или несколько дней в минеральном
масле, не опасаясь переуплотнения и прочих вредных эффектов
Можно оставить ткани застыть после пропитывания парафином

21. Количество объектов в кассете

Одна гистологическая кассета = один объект, ему присваивается один
номер.
Размеры и количество объектов для проводки определяет патолог.
Объект не доложен превышать размеры кассеты. Оптимальные
размеры: 2 х 2 х 0.3 см.
Объекты, содержащие жировую ткань не должны быть толще 2 мм.
Кассета не должна быть заполнена более 75% своего внутреннего
объема.
Кассета используется один раз. Основание кассеты используется как
основа блока при заливке и остается в архиве вместе с блоком.
Значения цветовой маркировки кассет устанавливаются внутренними
правилами каждой лаборатории.

22. Количество объектов в ручной проводке

Для удобства расчетов и работы выгоднее всего использовать емкости
объемом 1л. В нее вмещается 40 стандартных гистологических кассет с
объектами и 900мл реагентов. Это оптимальное количество для работы.
900мл/40 кассет=22,5мл реагента/кассета (один объект).
В батарее для мелких биоптатов можно использовать меньший объем
емкостей и больше кассет.
Емкости должны быть устойчивы к действию используемых реагентов для
проводки. Обычно хорошо противостоят любым реагентам стеклянные
емкости с завинчивающимися крышками и широким горлом. Также емкости
должны не деформироваться и не изменять свой состав при нагреве не выше
70оС (для расплавленного парафина). Емкости с парафином используются без
крышек.
Количество емкостей зависит от используемого протокола проводки и потока
объектов. Если их больше 40, используют дополнительные емкости и
параллельные батареи.

23. Количество объектов в процессорах

Карусельный или линейный процессор: 12 емкостей по 2л.
2000мл/100кассет=20мл/кассета. 2 или 3 парафина.
Вакуумный процессор: реторта на 2.5 или 5л и емкости такие же 150 или
300 кассет. 5000мл/300касет=16,7мл/кассета. 3 или 4 парафина.
Обязательны для процессоров блоки бесперебойного питания, которые
позволяют за время их работы принять решение, что делать дальше.
При неполных загрузках почти все процессоры используют полный
объем реактивов, это нужно учитывать при замене растворов.