Влияние обработки фенолом на биохимические показатели альбуминовой фракции белков плазмы

1.

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РФ
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего
образования
«Удмуртский государственный университет»
Институт естественных наук
Кафедра физиологии, клеточной биологии и биотехнологии
Учебно-научная лаборатория иммунохимии и иммунохимического анализа
Направление подготовки 19.03.01 – Биотехнология
Профиль 13.03.01.01 – Фармацевтическая биотехнология
ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА
на тему:
«Влияние обработки фенолом на биохимические
показатели альбуминовой фракции белков плазмы»
Выполнила: студентка Саркисян Ани Кареновна
группа ОБ-19.03.01.01-41
Научный руководитель: к.б.н., доцент кафедры
Минаева Елена Владимировна
Ижевск, 2023

2.

Актуальность
Препараты ЧСА активно используются в медицине,
для лечения состояний угрожающих здоровью
человека.
Боенская кровь КРС может служить источником
для
получения
ветеринарных
биопрепаратов
альбумина, однако отсутствие надлежащей заготовки
плазмы собранной с мясокомбинатов и скотобоен
является причиной утилизации данного вида сырья.
Проблемой использования дезинфектантов в
данном случае является их возможное влияние на
структуру и функциональные свойства белков, что
может привести к снижению эффективности и
безопасности лекарственного препарата.
2

3.

Цели и задачи
Цель: оценить влияние фенола на биохимические показатели
белков альбуминовой фракции.
В рамках цели решали следующие задачи:
1) Получить
альбуминовый
полуфабрикат
с
помощью
фракционирования плазмы крови сульфатом аммония с конечной
концентрацией фенола 1%.
2) Изучить влияние фенола на фракционирование белков плазмы
крови.
3) Изучить влияние 1% и 1,5 %фенола на связывающую
способность альбумина.
4) Изучить влияние фенола на связывающую способность
альбумина при хранении в течение 7 дней.
3

4.

Фенол
Фенол имеет ряд преимуществ перед другими
дезинфектантами:
- является одним из наиболее эффективных
дезинфектантов, который способен уничтожать
различные вирусы, бактерии, грибки;
- фенол является относительно дешевым и
доступным, что играет важную роль при его
использовании в промышленных масштабах;
- имеется большой опыт применения фенола в
медицине и лабораториях;
- имеет длительный срок годности и может сохранять
свои свойства в течении многих лет.
4

5.

Схема получения опытного альбуминового полуфабриката
5

6.

Влияние добавления 1% фенола в фракционирующий
раствор, содержащий конечную концентрацию сульфата
аммония 27% от насыщения при фракционировании плазмы
на распределение и выход общего белка
21%
± 2,5
79%
± 2,5
Контрольный образец
(без фенола)
19%
±4
гаммаглобулин
альбумин
100%
90%
80%
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
85%
±2
контрольный
образец
81%
±4
83%
±3
гаммаглобулин
альбумин
Опытный образец
(с фенолом)
опытный образец
Процент выхода общего белка
Добавление 1% фенола в насыщенный раствор сульфата аммония не влияет
на распределение и выход общего белка.
6

7.

Влияние 1% фенола на фракционный состав альбуминовых
полуфабрикатов при фракционировании плазмы сульфатом
аммония с конечной концентрацией 27% от насыщения
100%
3
5
90%
80%
31
27
9
11
70%
60%
50%
40%
высокомолекулярные
соединения
гамма-глобулин
трансферрин
30%
20%
44
41
альбумин
10%
Контрольный
образец
Опытный
образец
0%
контрольный образец опытный образец
1% фенола в составе альбуминового полуфабриката не оказывает
влияния на электрофоретический спектр белков.
7

8.

Схема изучения влияния фенола на связывающую способность
альбумина
89,5%
98,3%
8

9.

Определение связывающей способности
контрольного образца на аффинном сорбенте
Номер пробирки
Стартовый буфер: 0,01М натрий-фосфатный буфер + 0,15М NaCl
Десорбирующий буфер: 0,05М натрий-фосфатный буфер + 1,5M
NaCl
В контрольном образце с сорбентом связалось 13 мг белка.
Опытные
образцы
анализировали
относительно
значения, принимая 13 мг за 100%
данного
9

10.

Влияние 1% и 1,5% фенола на связывающую способность
альбумина
0,6
0,5
ОП280
0,4
КОНТРОЛЬ
0,3
БСА + 1% ФЕНОЛ
0,2
БСА + 1,5% ФЕНОЛ
0,1
0
процент
связавшегося белка
0
10
20
30
40
50
60
100%
80%
60%
40%
100%
20%
38%
27%
БСА+1% фенол
БСА+1,5% фенол
0%
БСА
С увеличением концентрации фенола, воздействующего на
альбумин, наблюдается снижение связывающей способности
белка
10

11.

Влияние фенола на связывающую способность
альбумина при хранении в течение 7 дней
0,6
0,6
1% фенол
0,5
1,5 % фенол
0,5
0,4
0,4
0,3
0,3
0,2
0,2
0,1
0,1
0
0
0
10
20
30
40
КОНТРОЛЬ
БСА + 1% ФЕНОЛ (1 ДЕНЬ)
БСА + 1% ФЕНОЛ (7 ДНЕЙ)
50
60
0
100%
100%
7 дней
40%
60%
100%
7 дней
38%
0%
БСА
БСА+1% фенол
50
1 день
40%
20%
40
80%
1 день
100%
30
БСА + 1,5% ФЕНОЛ (7 ДНЕЙ)
120%
60%
20
КОНТРОЛЬ
БСА + 1,5% ФЕНОЛ (1 ДЕНЬ)
120%
80%
10
15%
20%
БСА+1% фенол
0%
27%
БСА
БСА+1,5% фенол
9%
БСА+1,5% фенол
При хранении образцов с фенолом наблюдается снижение
связывающей способности белка
11
60

12.

Выводы
1) Представленная схема получения альбуминового полуфабриката,
включающая в себя стадии фракционирования сульфатом аммония 27%
от насыщения и внесением 1% фенола, позволяет получить фракцию
альбумина с процентом выхода общего белка – 83%, и
электрофоретической чистотой альбумина 41%.
2) Использование 1% фенола в бактерицидно-фракционирующем
растворе не влияет на фракционирующие свойства сульфата аммония при
концентрации 27% от насыщения.
3) С увеличением концентрации фенола наблюдается снижение
связывающей способности альбумина. При обработке 1% фенолом
связывающая способность белка снизилась до 38±3%, при добавлении
1,5% фенола – до 27±4% .
4) При хранении альбумина с фенолом в течение 7 дней наблюдается
снижение связывающей способности с лигандом:
при содержании 1% фенола количество связавшегося белка снизилось до
15±3%;
при содержании 1,5 % фенола – до 9±3%.
12