Обнаружение амилазы в прорастающих семенах

1. Обнаружение амилазы в прорастающих семенах

Обнаружение амилазы в
прорастающих семенах

2.

Основы метода:
• Ферменты могут действовать не только в той клетке,
которая их вырабатывает, но и вне ее, перемещаясь в
другие клетки или выделяясь во внешнюю среду. Чтобы
наблюдать быстрое выделение ферментов из клеток семян
злаков, необходимо разрезать зерновки, так как семенная
кожура и околоплодник препятствуют диффузии веществ.
• В данной работе изучается внеклеточное действие амилазы
на крахмал. В растениях встречаются две амилазы: альфаамилаза,
вызывающая распад молекулы крахмала на
крупные осколки (декстрины), и бета-амилаза, которая
отщепляет от крахмала концевые остатки мальтозы. В сухих
семенах пшеницы, ржи и ячменя содержится только, бетаамилаза, причем почти вся она связана с белками. При
прорастании бета-амилаза переходит из связанного
состояния в свободное, и, кроме того, происходит синтез
бета-амилазы.

3.

Ход работы:
• Разрезать несколько не проросших зерен
пополам, слегка смочить водой и разложить
пинцетом на одной половине пластинки из
крахмального агара поверхностью среза вниз, не
вдавливая семена в пластинку.
• На другую половину агаровой пластинки поместить
несколько проросших семян того же растения,
также разрезанных пополам и смоченных водой
(желательно оставить на некоторых проросших
семенах корешки и приложить их к поверхности
крахмального агара).
• Закрыть крышкой, чтобы не было подсыхания.
• Через час осторожно снять семена и облить всю
пластинку слабым раствором йода.

4.

• Отметить результат и ответить на
следующие вопросы:
1. Какое действие оказали семена на
пластинку?
2. Почему проросшие и не проросшие
семена оказали неодинаковое действие?

5. Обнаружение нитратов в растениях

Обнаружение нитратов в
растениях

6.

Основы метода:
• Соли азотной кислоты (нитраты), поглощаемые
корнями из почвы, восстанавливаются в растении
до аммиака через ряд этапов, каждый из
которых
катализирует
особый
фермент
(нитратредуктаза,
нитритредуктаза,
гипонитритредуктаза
и
гидроксиламинредуктаза).
• Аммиак связывается кетокислотами ( альфа кетоглутаровой,
щавелевоуксусной
и
пировиноградной),
образуя
в
процессе
восстановительного аминирования первичные
аминокислоты - глутаминовую, аспарагиновую и
аланин. Другие аминокислоты образуются путем
трансаминирования
или
ферментативного
превращения одних аминокислот в другие.

7.

• Сказанное можно представить в виде
схемы:
• При
достаточном
содержании
растворимых
углеводов
и
высокой
активности соответствующих ферментов
перечисленные биохимические процессы
происходят в корнях.

8.

• Однако часть нитратов (нередко весьма
значительная)
может
пройти
через
паренхиму корня в неизменном виде. В
этом случае нитраты попадают в сосуды
ксилемы и поднимаются с восходящим
током к листьям, где и происходит их
восстановление.
• Для восстановления нитратов требуется
АТФ,
образующаяся
в
процессе
окислительного
или
фотофосфорилирования.

9.

• Определение содержания
нитратов в соке,
отжатом из стеблей или черешков, позволяет
судить о восстановлении нитратов в корнях: чем
меньше обнаруживается ионов NO3 в соке, тем
полнее проходит этот процесс в клетках корня.
• Сопоставление содержания нитратов в черешках и
листовых
пластинках
дает представление о
нитратредуктазной активности клеток мезофилла.
Для обнаружения нитратов можно использовать
реакцию с дифениламином, который в
присутствии
иона
NO3 образует синюю
анилиновую краску. По интенсивности посинения
можно приблизительно судить о количестве
нитратов в исследуемом объекте.

10.

Ход работы:
• Поместить на белую тарелку кусочки черешка
и листовой пластинки какого-либо растения.
• Размять эти кусочки стеклянной палочкой
(палочку каждый раз споласкивать чистой
водой и вытирать) и облить раствором
дифениламина в крепкой серной кислоте.
• Исследовать 2-3 растения разных видов.
Желательно также проанализировать растения
одного вида, произраставшие в разных
условиях (на солнце и в тени, до и после
подкормки минеральными удобрениями и
т.п.).

11.

Результаты записать в таблицу, оценивая посинение
по пятибалльной шкале.
Растения
Условия
Количество нитратов
В черешке
В листовой
пластинке