защита

1. Клинико-генеалогическое исследование родословной пробанда с гемофилией

Государственное бюджетное общеобразовательное учреждение г. Москвы Школа №1191
Клинико-генеалогическое исследование
родословной пробанда с гемофилией
Исполнители проекта:
Сафонова Арина Евгеньевна, 10 "А" класс
Чернышова Доминика Романовна, 10 "А" класс
Руководитель проекта:
Тарасова Елена Николаевна, учитель химии
Научный консультант:
Рожнова Татьяна Михайловна, к.м.н., доцент, ФГАОУ Первый МГМУ им.
Сеченова

2. Актуальность

• Изучение гемофилии обусловлена недостаточной
изученностью патологии и осложнениями этого
заболевания. Гемофилия относится к
заболеваниям с X-сцепленным рецессивным
типом наследования
Гипотеза
• Наследственная причина заболевания​

3. Цель и задачи проекта

Цель:
Изучить вклад генетических факторов в развитии гемофилии
Задачи:
1. Изучить научную литературу, посвященную гемофилии
2. Исследовать родословную пациента с носителем гена гемофилии и
составить ее графически
3. Провести анализ родословной пробанда
4. Провести молекулярно-генетическое исследование с использованием
клеток буккального эпителия
5. Изучить лечение пациента, больного гемофилией
6. Составить персональные рекомендации для пациента с гемофилией

4. Положения, выносимые на защиту

Положения, выносимые на защиту
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Гемофилия А в исследованной родословной наследуется по Хсцепленному рецессивному типу: больны только мужчины
(III.10, V.10), передача происходит через фенотипически
здоровых женщин-носителей
В ходе генеалогического анализа выявлены женщиныносители мутантного гена в четырёх поколениях (II.9, IV.35,
IV.44, V.3, V.11), что позволяет прогнозировать генетический
риск для потомков
У пробанда (V.10) диагностирована тяжёлая форма гемофилии
А в сочетании с синдромом Жильбера; в родословной также
прослеживаются другие наследственные заболевания
(дисплазия соединительной ткани, гетерохромия)
Предложенный протокол выделения ДНК из буккального
эпителия является эффективным неинвазивным методом для
молекулярно-генетического подтверждения диагноза и статуса
носительства
Комплексный анализ родословной и молекулярных данных
позволяет разработать персонализированные рекомендации
по лечению и профилактике осложнений для конкретного
пациента
Рис.1. Носительницы
гена гемофилии

5. Материалы и методы исследования

ОБЪЕКТ ИССЛЕДОВАНИЯ:
ПРОБАНД (V.10) – ПАЦИЕНТ С
ТЯЖЁЛОЙ ФОРМОЙ ГЕМОФИЛИИ
А И СИНДРОМОМ ЖИЛЬБЕРА;
РОДСТВЕННИКИ ПРОБАНДА (6
ПОКОЛЕНИЙ, 230 ЧЕЛОВЕК)
КЛИНИКО-ГЕНЕАЛОГИЧЕСКИЙ
МЕТОД: СБОР АНАМНЕЗА И
СОСТАВЛЕНИЕ ЛЕГЕНДЫ
РОДОСЛОВНОЙ; ПОСТРОЕНИЕ
ГРАФИЧЕСКОЙ СХЕМЫ
РОДОСЛОВНОЙ; АНАЛИЗ ТИПА
НАСЛЕДОВАНИЯ И
ГЕНЕТИЧЕСКОГО РИСКА
МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ
МЕТОД: ЗАБОР БУККАЛЬНОГО
ЭПИТЕЛИЯ (СТЕРИЛЬНЫЙ ЗОНД,
ВОЗДЕРЖАНИЕ ОТ ПИЩИ ЗА 2
ЧАСА); ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК С
ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ НАБОРА
РЕАГЕНТОВ (ЛИЗИС БУФЕРОМ
LB, ПРОТЕИНАЗА К, СОРБЦИЯ НА
КОЛОНКАХ); ОБОРУДОВАНИЕ:
ТЕРМОСТАТ (56°C), ЦЕНТРИФУГА
(10000 RCF), ВОРТЕКС,
ДОЗАТОРЫ: ЭЛЮЦИЯ ДНК
БУФЕРОМ EB; АНАЛИЗ МЕТОДОМ
ПЦР (КЛАССИЧЕСКАЯ)
АНАЛИТИЧЕСКИЙ МЕТОД: ОБЗОР
НАУЧНОЙ ЛИТЕРАТУРЫ; АНАЛИЗ
КЛИНИЧЕСКОЙ КАРТИНЫ И
ТАКТИКИ ЛЕЧЕНИЯ ПАЦИЕНТА

6. Анализ родословной пробанда

По составлению родословной пробанда
с геном носителя гемофилии мы можем
выделить несколько факторов:
1. Гемофилия идет по материнской
линии. Также женщины в этом
роду (V.11, V.3, IV.44, IV.35,
II.9) являются переносчиками этого
заболевания
2. Гемофилия типа А у представителей
мужского пола (V.10, III.10). Этот тип
гемофилии переносится осложнено и
требует особого лечения
3. Также в родословной есть другие
заболевания: гетерохромия, дисплазия с
оединительных тканей,
синдром Жильбера, болезнь
Альцгеймера, шизофрения и другие
Рис. 2 Больные
гемофилией

7. Эксперимент "Выделение ДНК"

Эксперимент "Выделение ДНК"
1.
Подготовить все оборудование, реагенты и буккальный
эпителий
2.
Лизис образцов
3.
Нанести на колонку и центрифугировать исследуемый
буккальный эпителий
4.
Промывка колонки
5.
Элюция ДНК
6.
Анализ выделенной ДНК
Рис.3. Лаборатория исследования

8. Лечение пациента с гемофилией

Лечение пациента с гемофилией
Лечение гемофилии включает 2 способа:
1 способ:
Постоянное введение компонентов, которые
поддерживают минимальный уровень фактора крови. Это
предотвращает спонтанные кровотечения.
2 способ:
Фактор вводят только при возникновении кровотечения, но
этот способ используется при легких формах гемофилии
или в отдельных случаях, когда врач посоветовал терапию
"по потребности".
Рис.4. Данные пациента

9. Персональные рекомендации для пациента, больного гемофилией

1.
Строгое соблюдение назначений врача
2.
Круглосуточная связь с врачом-гематологом
3.
Избегать зоны повышенного травматизма
4.
Избегать даже минимальных травм
5.
Повышение иммунитета и общего уровня здоровья с
целью профилактики вирусных и бактериальных
инфекций, способных осложнить течение
заболевания - гемофилия
Рис. 5 Рекомендации
для больного

10. Выводы и результаты проекта

1.
2.
3.
В ходе изучения научной литературы было установлено,
что гемофилия — это редкое наследственное
заболевание, сцепленное с Х-хромосомой, при котором
человек склонен к обильным кровотечениям и
кровоизлияниям даже при незначительных травмах изза дефицита факторов свертывания крови
Родословная пациента была исследована и составлена
графически. В нее включены родственники пробанда
вплоть до шестого поколения.
Проведенный
анализ
родословной
пробанда
подтверждает
X-сцепленный
рецессивный
тип
наследования гемофилии. В семье заболевание
наблюдается у лиц мужского пола (V.10, III.10), а
носителями патологического гена являются женщины
(V.11, IV.44, V.3, IV.35, II.9).
Рис.
Рис. 6 Лабораторная
работа

11. Выводы и результаты проекта

4. В рамках проекта была освоена и описана методика
молекулярно-генетического
исследования
с
использованием клеток буккального эпителия для
выделения ДНК
5. Изучено лечение пациента (V.10). На основании анализа
клинической картины (тяжелое течение гемофилии типа А,
аналогичное дедушке IIII.10) пациент применяет тактику
профилактического лечения (1-й способ), постоянно вводя
концентраты
факторов
свертывания
крови
для
поддержания их гемостатического уровня
6. На основе изученных данных для пробанда были
составлены персональные рекомендации, направленные на
предотвращение осложнений, которые включают строгое
соблюдение лечения, избегание травм и поддержание
общего здоровья.
Рис. 7 Концентрация ДНК
в буккальном эпителии
пациента

12. Значимость проекта

• Теоретическая значимость:
• Впервые на школьном уровне составлена и проанализирована родословная из 6 поколений (230
человек) с гемофилией типа А. Выявлены закономерности наследования, носительства и
сочетания с другими заболеваниями (синдром Жильбера, дисплазия соединительной ткани).
• Апробирована методика выделения ДНК из буккального эпителия в условиях лаборатории.
• Практическая значимость:
• · Позволяет оценить риск рождения больных детей в данной семье
• · Даёт основу для медико-генетического консультирования
• · Рекомендации могут быть использованы для терапевтического ведения пациента, больного
гемофилией
• · Может служить моделью для школьных проектов по генетике

13. Перспективы дальнейшего исследования

1. Проведение полноценного ПЦР-анализа
2. Изучение компаунд-патологии
Исследовать молекулярные основы сочетанной патологии: гемофилия А + синдром Жильбера,
гемофилия + дисплазия соединительной ткани
3. Анализ других наследственных заболеваний в родословной. Провести генеалогический
анализ в молекулярно-генетической лаборатории ФГАОУ Первого МГМУ им. Сеченова на
предмет наличия шизофрении, болезни Альцгеймера, сердечно-сосудистой патологии с
оценкой типа наследования
4. Создать информационные материалы по рискам наследования, современным методам
профилактики и лечения гемофилии