Схема диагностики пневмококковой инфекции

1.

Схема диагностики
пневмококковой инфекции

2.

Streptococcus pneumoniae (Pn)
Морфология и физиология :
• Гр + ланцетовидные диплококки с макрокапсулой, размеры
колеблются от 0,5 до 1,5 мкм
• не образуют спор, не подвижны
• факультативные анаэробы, но хорошо
растут и в аэробных условиях при 37 °С.
• На простых средах не культивируются. выращивают на средах с
добавлением крови или сыворотки. Лучше растет при
насыщении воздуха СО
• Среда накопления - сыв.бульон, ППС – сыв.агар и КА
• Кроме маннита ферементирует все у/в до кислоты
• Для дифференциации с Str. pyogenes ставят пробу с инулином.
Pn ферментирует инулин до кислоты.
• Проба с желчью. Pn лизируется желчью, в отлчии от Str.
pyogenes .

3.

Культуральные св-ва Pn
• На ППС : полупрозрачные колонии , S типа. 1-2
мм. На КА : сер-зеленые колонии с зоной
α гемолиза –необходима дифференциация с
Str. pyogenes
• На ЖПС : Диффузное
помутнение
В препарате – короткие цепочки - необходима
дифференциация с Str. pyogenes

4.

Антигенная структура Str. pneumoniae
• У пневмококков обнаружены несколько видов
антигенов полисахаридный, 0-соматический а/г- в
клеточной стенке; полисахаридные капсульные Ка/г и М-белок. По структуре капсульных антигенов
пневмококки разделяют на 84 серовара. При
переходе из S в R-форму капсульные антигены
утрачиваются. Сероварианты обозначают римскими
цифрами. У человека наиболее часто выделяют
пневмококки I, II и III серовариантов. Они наиболее
вирулентны для человека, поэтому реакцию
агглютинации первоначально ставят, используя
антисыворотки к этим вариантам.

5.

Факторы агрессии Str. pneumoniae
Капсула
Ферменты :
гиалуронидаза, нейраминидаза,
фибринолизин
Токсины :
гемолизин, лейкоцидин
Устойчив к высушиванию.
Чувствителен к химическим и физическим факторам, в
частности, к солям желчи (лизис), оптохину, NaCI

6.

Заболевания
o Крупозная пневмония
o Ползучая язва роговицы
o Гнойные воспаления
(абсцессы, отиты..)
o Возможен сепис

7.

8.

Бактериологический метод
Материал :
мокрота, кровь ,
Схема:
гной
1эт. 1. Изучение иссл.м-ла. Мазки по Грамму и
Бури-Гинса
2. // Посев на ср.накопления сыв.бульон и ППС –
КА и Сыв.агар (37 , 24 ч СО2)
Если исслед.м-л содержит большое кол-во
сопутствующей флоры
биологический
метод (внутрибрюшинное заражение белых
мышей исследуемым материалом (чаще
мокротой)) – через 6ч. – септицемия= Pn в
крови. Далее по схеме.

9.

2 эт. 1. Изучение культуральных св-в на КА – серзеленые колонии до 1мм с зоной α гемолиза ;
на СА – нежные, слегка розовые мелкие
колонии
2. Мазок по Грамму – Гр+ диплококки
3. Пересев ост .колони на скошенный сыв.агар
(37 , 24ч)
3эт. 1. Учет роста на скош.агаре –
сплошной.нежный рост
2. Определение чистоты к-ры – мазок по Гр
3. Идентификация :

10.

3. Идентификация:
Посев на короткий ряд Гисса
Пробы на инулин (жидкая среда с
инулином)
Определение чувствительности к оптохину
(среда с оптохином) – культивирование –
роста нет
Проба с желчью :
Контроль – ЖПС
рост
Опыт – ЖЕЛЧЬ
роста нет
Чувствительность к а/б
37 24ч
37 24ч

11.

12.

Контрольные вопросы
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Латинские названия рода и вида Пневмококка
Морфологические и тинкториальные свойства Pn
Среды обогащения
Культуральные свойства на СА
Культуральные свойства не КА
Перечислите факторы вирулентности Pn
Перечислите тесты, на основе которых проводят
дифференциацию между Pn и зеленящим
стрептококком
8. Перечислите основные заболевания вызываемые
Pn

13.

Протокол №2
Тема: Схема диагностики кокковой инфекции (St и Str – 2
этап исследования.
1.
2.
3.
4.
Оценить характер роста на ч. Петри с ЖСА и КА .
Выбрать колонии характерные для St. аureus и Str.A
Выбранные колонии промаркировать по дну цифрами
Из материала выбранных колоний сделать мазки и
окрасить их по Грамму (Исследования стрептококка
заканчиваются на этом этапе)
5. При соответствии морфологических и тинкториальных
свойств искомому возбудителю (St.) остатки культуры
из этих колоний засеять на скошенный агар.

14.

Изучение культуральных свойств
Культуральные свойства стафилокка на желточно - солевом агаре
(ЖСА):
• размер - от 1 до 4 мм.
• форма – круглая
• контур края – ровный
• рельеф - выпуклый
• поверхность - гладкая блестящая
• структура – не просматривается
• консистенция – вязкая
• цвет – все оттенки желтого. (после 24 часовой экспозиции на
рассеянном свету)
очень важно!
Выбирают только те колонии, вокруг которых образуются радужные
венчики и зоны помутнения. Это действие фермента лицитиназы,
котрая есть только у патогенного стафилококка

15.

Работа с материалом выбранных колоний
1.Характерные колонии промаркировать по дну
2.Промаркировать предметное стекло в соответствии с колм выбранных колоний. Стерильной, остуженной петлей
нанести физ. р-р.
3.В каждую каплю стерильной остуженной петлей внести
материал из соответствующей колонии и растереть.
Важно!: необходимо отколоть лишь небольшой кусочек
колонии, чтобы осталась культура для дальнейшего
посева.
4. Высушить мазки на воздухе. Зафиксировать в пламени
горелки 6 сек.Покрасить по Грамму
5. При наличии в характерной колонии
стафилококков остатки культуры засевают газоном
на скошенный агар. Посевы поставить в термостат
на 24 ч при Т= 37 .

16.

Тема: Схема диагностики пневмококковой
инфекции (Pn) - 1 этап.
Количественный метод посева
Предварительная подготовка мокроты:
1.Мокроту изучают в ч. Петри на темном фоне
для выявления гнойных и кровяных тяжей
2.Стерильной бак. петлей тяжи переносят в
стерильную ступку, где их растирают со
стеклянным песком и физ. раствором.
3.Студенты для работы получают уже
подготовленный для посева материал.

17.

Секторный метод (метод Gould)
• По существу является вариантом метода
серийных разведений. Применяется для
микробиологического исследования мокроты,
мочи.
1. Петлей диаметром 2 мм, емкостью 0,005 мл
берут каплю материала и делают 30-40 штрихов
на сектор А чашки Петри.
2. Прожигают петлю и производят 4 штриха через
сектор А в сектор I.
3. Аналогичным образом из сектора I
засевают сектор II, а из сектора II - сектор III.

18.

Следует помнить, что исследуемый
материал берут только один
раз. После каждого сектора бак.
петлю прожигают и остужают о
внутреннюю поверхность
крышки. Штрихи сектора «III»
не должны касаться сектора
«А».
Учет результатов проводят по
специальной таблице
.