Схема диагностики стафилококковой (St.) и стрептококковой(Str.) инфекции

1.

Схема диагностики
стафилококковой (St.) и
стрептококковой(Str.)
инфекции

2.

Род Staphylococcus
3 вида : S. aureus S. epidermidis
S. saprophyticus
Морфология и
физиология :
• Стафилококки имеют правильную круглую форму размером 0,5 1,5 мкм
• В мазках размещаются в виде «гроздей винограда»
• Гр+, неподвижные, не образуют спор, отдельные виды в
организме имеют нежную капсулу. В состав клеточной стенки
входят пептидогликан (муреин) и тейхоевые кислоты.
• факультативные анаэробы, лучше растут в аэробных условиях.
• По цвету пигмента : S. aureus – золотистый ; St. аlbus –белый ;
St. сitreus – лимон.желтый

3.

• К питательным средам непритязательные, хорошо
культивируются на простых средах
• Стафилококки выделяют протеолитические и
сахаролитические ферменты. Они разжижают
желатин, вызывают оседание молока
• Ферментируют все у/в короткого ряда до кислоты
• Особенность пат. St – расщепляет манит в
анаэробных условиях!
• Среда накопления на 1эт. – соляной бульон (8-9 %
Na Cl)
• Элективный фактор – поваренная соль Na Cl
• Основная ЭДС – ЖСА
• 2я среда – МСА (молочносолевой агар) хорошо
образуют пигменты

4.

Факторы агрессии:
Микрокапсула
Ферменты агрессии
Экзотоксины

5.

Ферменты агрессии
(вирулентности)
1. Лецитиназа : расщепляет лецитин. Наличие фермента
определяют на 2эт. На ЖСА
вокруг колонии зона лизиса
(просветление) – «перламутровый венчик»
2. Плазмокоагулаза : коагулирует плазму. Определяется на
3эт посев чистой культуры на плазму кролика
3. Гиалуронидаза ( способствует распространению
стафилококков в тканях вследствие нарушения их
проницаемости)
4. ДНКаза (деполимеризует ДНК)
5. Фосфатаза и др.
Антигенная структура стафилококков достаточно сложная и вариабельная. Описано
более 30 антигенов, связанных с белками, тейхоевыми кислотами, полисахаридами.
Основным из них является капсульный белок А.

6.

Экзотоксины
1. Гемолитический токсин (гемолиз Er)
Определяют методом посева на КА
2. Некротоксин (дермонекротический) – некроз кожи
3. Лейкоцидин (разрушает лейкоциты макрофаги и
другие клетки, а в меньших концентрациях подавляют
их фагоцитарную функцию)
4. Эксфолиатины (импетиго детей и
пузырчатку новорожденных)
5. Энтеротоксин (пищевые токсикоинфекции и
энтероколиты) накапливается в пищевых продуктах

7.

Заболевания
• Гнойные фурункулы,карбункулы,
стафилодермия
• St Отиты
• St Пневмонии
• St Бактериемии , St сепсис
• Пузырчатка новорожденных
• Маститы (кормящих матерей)
• Пищевые интоксикации
Носители коагулаз+
и лецитиназ+ не допускаются
на работу в род.дома

8.

Бактериологический метод
Материал : гной,
Схема:
мокрота , зев/нос,
моча , кровь ,
экссудат
1эт. // Посев иссл. материала на среды накопления (соляной или
сахарный бульон) и ППС (ЖСА и МСА) Посевы – закрытым
способом !
2 эт. 1. Оценка культуральных св-в 8 признаков на ППС :
Величина- 2-4 мм
Форма- круглая
Контур края- ровный
Рельеф -выпуклый
Поверхность- гладкая, блестящая
Структура не определяется – матовые колонии
Консистенция- пастообразная
Цвет (через 24ч на МСА)- от желтого до жемч.белого

9.

На ЖСА выбираем х-ные колонии с зоной
лецитиназной активности- вокруг колонии
«перламутровое кольцо»
2. Мазок по Грамму
кокки
Гр+ гроздьевидные
3. Остатки материала из колонии
сеют газоном на скошенный агар 37 , 24ч

10.

3 эт. 1. Оценка роста на скошенном агаре – сплошной
пастообразный рост
2. Мазок по Грамму – Гр+ кокки грозди
3. Идентификация выделенной чист.культуры:
Посев на короткий ряд Гисса + манит в анаэроб
условиях
Фаготипирование – посев газоном и определение
чув-ти к 40 фаговарам (с помощью международного
набора стафилококковых бактериофагов)
Определение плазмокоагулазы – посев на плазму
кролика
Определение гемолитической активности
Определение чув-ти к а/б + к новобиоцину
(чувствителен только пат.St )

11.

12.

Дифференциация видов
стафилококков, выделенных от
человека

13.

Свойства золотистого стафилококка

14.

Протокол №1
Тема: Диагностика кокковых инфекций. Схема
диагностики стафилококковой и стрептококковой
инфекции – 1 этап.
1. Чашки Петри с ЖСА промаркировать по дну
2. Стерильным тупфером снять собственный налет с
глоточного кольца
3. Закрытым методом засеять половину ЖСА с
маркировкой «З»
4. Стерильным тупфером взять собственный мазок из
обоих носовых ходов
5. Закрытым методом засеять половину ЖСА с
маркировкой «Н»
6. Чашки поставить в термостат дном вверх при
температуре 37 С

15.

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
Контрольные вопросы
Латинские названия рода и трех видов St, наиболее
значимых для человека. патогенный вид – подчеркнуть.
Назвать фактор (фермент) на основе которого осуществляют
деление стафилококков на вирулентные и маловирулентные
Морфологические и тинкториальные свойства St
Среды обогащения
Элективный фактор
Культуральные свойства на ЖСА
Культуральные свойства на КА
Антигенная структура
Перечислите факторы вирулентности St. аureus (включая
ферменты вирулентности и экзотоксины)
Перечислите тесты, на основе которых проводят
дифференциацию для выделения патогенного стафилококка
Перечислите основные заболевания вызываемые St. аureus

16.

Род Streptococcus
Streptococcus agalactiae – Str. Гр В
Str.pyogenes= β-гемолитический Str гр.А
Морфология и физиология :
• Стрептококки имеют круглую или овальную форму размером 0,61,0 мкм, располагаются в виде цепочек разной длины(зависит от
свежести к-ры и качества среды), Гр+, неподвижные, не имеют
спор, нек. виды образуют микрокапсулы.
• факультативные анаэробы
• На простых средах не растут. Ср. накопления –
сахарный бульон, Выделение чист.к-ры - сывороточный и КА.
• Протеолитическая активность выражена слабо. Сахаролитическая
активность : 4 у/в- лактоза глюкоза сахароза маноза до кислоты,
Манит + - в зависимости от штамма

17.

Классификация Str.
В основе : культуральные св-ва способность к
гемолизу
α-гемолитический
Str.
Образует зону
неполного гемолиза
зеленого цвета
вокруг колонии –
зеленящий Str
β-гемолитический
Str.
Образует вокруг
колонии зону
полного гемолиза.
Зона четко
выделяется на
красном
фоне.(Большинство
вирулентных Str. )
ϒ- гемолитический
Str.
Не обладает
гемолитической
способностью.
(Авирулентные
штаммы)

18.

19.

20.

На ППС выделяют колонии:
мукоидные,
шероховатые ,
мелкие,
плоские,
Rтип,
гладкие,
круглые до 5 мм,
более 5 мм,
Sтип,
поверхность
гладкая,влажная,
плоские,
плоские,
морщинестые,
ровный край,
край ровный,
неровные,
сер-зеленые.
прозрачные,
фестончатый край,
цвет зелен-серый
сер-зеленые
(Авирулентные
штаммы)

21.

Особенности роста на ЖПС
• Пристеночный, придонный , зернистый или
крошковатый рост. Бульон прозрачный

22.

Антигенная структура Str.pyogenes
Все Str.р Имеют групповой полисахаридный С антиген.
Видовые а/г – нуклеопротеиды
Типовые а/г - протеины
По видовым а/г группа Str.р разделена на 17
серологических групп, которые отражаются большими
буквами лат. алфавита от А до V. Большинство патогенных
сероваров входят в группу А. У некоторых Str. этой
серогруппы обнаружены перекрестнореагирующие
антигены (ПРА). Антитела к ним реагируют с мышечными
волокнами миокарда, тканью почки и других органов
человека. ПРА могут стать причиной
иммунопатологических состояний.
В серогруппе А насчитывается до 70 сероваров. В
зависимости от серотипа различается вирулентность
Str.pyogenes . Вирулентность сероваров зависит от
факторов агресси и экзотоксинов.

23.

Экзотоксины Str. pyogenes
1. О стрептолизин разрушает Er. Его
продуцируют штаммы, кот.несут ПРА к
сердечной мышце. Эти штаммы формируют
аутоиммунное заболевание – ревматизм. В
результате – ревматоидный эндокардит. В
сыв-ке крови таких больных – а/т к О
стрептолизину.

24.

2. Эритрогенный (скарлатинозный) токсин
Формирует классическую картину скарлатины
(дети 1-8 лет). Нарушается проницаемость
сосудистой стенки, сыпь,лицо красное.
Очень высокая t.
3. Лейкоцидин (Лейкопения)
Разрушает лейкоциты.Образуют
высоковирулентные штаммы.
4. Цитотоксин обладает нефротропным
действием- поражается почечная
паренхима гломерулонефрит

25.

Ферменты патогенности (агрессии)
гиалуронидаза,
фибриназа,
ДНК-аза,
протеиназа,
амилаза,
липаза…
Для стрептококков характерное наличие
термостабильных эндотоксинов и
аллергенов.

26.

Заболевания
• Гнойные инфекции (фурункулы ,карбункулы отит)
• Str. Ангина
• Негнойные заболевания:
o Ревматоидный эндокардит(Острептолизин)
o Скарлатина(эритрогенный токсин)
o Пневмонии
o Рожистое воспаление(заболевание кожи с
поражением л/у - лимфостаз)

27.

Основной метод диагностики Сероидентификация

28.

29.

Бактериологический метод
Материал : слизь из
зева,гной,кровь,мок
Схема:
рота,моча
1 эт. // посев на ср.накопления- сах.бульон; на
ППС – КА и СА (37 , 24ч)
2 эт. 1. Учет роста а ППС. Выбираем мукоидные и
шероховатые колонии с зоной α и βгемолиза
2. Мазок по Грамму – Гр+ цепочка
3. Посев остатков на бульон Мартена для
приготовления экстракта а/г. Посев
осуществляется 2кратно:
1й посев культивир. 6 ч.
Пересев 2й посев 24ч

30.

3 эт. 1. Оценка роста на бульоне Мартена :
придонно пристеночный зернистый рост ,
бульон прозрачный.
2. Мазок по Грамму – длин. цепочки Гр+
кокки
3. Приготовление экстракта из бульонной
культуры : бульон центрифугируют, к осадку
добавляют НСI ; нейтрализация до рН 7.4
4. Реакции кольцепреципитации с видовыми
и типовыми сыворотками

31.

32.

Контрольные вопросы
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
Латинские названия рода и видов Str.A и Str.B
Морфологические и тинкториальные свойства
стрептококков
Среда обогащения
Культуральные свойства на КА. Классификация
по гемолитической активности
Биовары Str.A
Антигенная структура и классификация
стрептококков
Факторы вирулентности Str.A
Основной метод идентификации возбудителя
Перечислите основные заболевания
вызываемые Str.A