Итоги работы подразделения НИЛ ЛРБ в 2022 г

1.

ИТОГИ работы подразделения НИЛ ЛРБ в 2022 г.
Было проведено 22 ферментации в лаборатории:
• 14 ферментаций на Украинском штамме IHR CСM 7884 (Инсулин человеческий)
• 7 ферментаций на штамме BGG 18; Р-ФАРМ (Инсулин Гларгин)
• 1 ферментация на штамме BAS-2; Р-ФАРМ (Инсулин Аспарт)

2.

ИТОГИ работы подразделения НИЛ ЛРБ в 2022 г.
Было отработано несколько вариантов выделения белка из клеточной культуры:
Разрушение клеток/Выделение телец включения
Трис-ЭДТА буфер
Трис-ЭДТА буфер
+ 1М мочевина
Трис-ЭДТА буфер
+ лизоцим
Трис-ЭДТА буфер
+ 2М мочевина
Трис-ЭДТА буфер
+ лизоцим +
Тритон Х-100
По результатам электрофореза, наиболее эффективным был способ разрушения
клеток в Трис-ЭДТА буфере + 2М мочевине

3.

ИТОГИ работы подразделения НИЛ ЛРБ в 2022 г.
Было отработано несколько вариантов выделения белка из клеточной культуры:
Отмывка телец включения
Трис-ЭДТА буфер
+ 1М мочевина
Трис-ЭДТА буфер
+ 2М мочевина
Трис-ЭДТА буфер
+N
лаурилсаркозил
М – Белковый маркер
1 – До индукции
2 – После индукции
3 – После разрушения (осадок)
4 – После разрушения (фильтрат)
5 – Отмывка водой (осадок)
6 – Отмывка водой (фильтрат)
7 – 1я отмывка ТЕТ (осадок)
Трис-ЭДТА буфер
+ Тритон Х-100
8 – 1я отмывка ТЕТ (фильтрат)
9 – 2я отмывка ТЕТ (осадок)
10 – 2я отмывка ТЕТ (фильтрат)
11 – Отмывка водой (осадок)
12 – Отмывка водой (фильтрат)
13 – Растворение в 8М мочевине (осадок)
14 – Растворение в 8М мочевине (фильтрат)
По результатам электрофореза, наиболее эффективным был способ отмывки телец
включения в Трис-ЭДТА буфере + Тритон Х-100

4.

ИТОГИ работы подразделения НИЛ ЛРБ в 2022 г.
Было отработано несколько вариантов выделения белка из клеточной культуры:
Рефолдинг
ß-меркаптоэтанол
+ рефолдирующий
буфер без
глицерином
ß-меркаптоэтанол
+ рефолдирующий
буфер с
глицерином
DTT +
рефолдирующий
буфер с
глицерином
DTT +
рефолдирующий
буфер без
глицерином
По результатам электрофореза и хроматографии, наиболее эффективный рефолдинг
с добавлением DTT в рефолдирующем буфере без глицерина

5.

ИТОГИ работы подразделения НИЛ ЛРБ в 2022 г.
Успешно проведен трипсинолиз с человеческим инсулином.
М – Белковый маркер
Инс – Инсулин стандарт
До – Образец до трипсинолиза
0ч – Начало трипсинолиза
2ч – Трипсинолиз 2 ч
5ч – Трипсинолиз 5 ч
24ч – Трипсинолиз 24 ч