Similar presentations:
Жидкостная хроматография
1. Жидкостная хроматография
подвижная фаза – жидкостьнеподвижная фаза – жидкость или сорбент
жидкостно-жидкостная
Распределительная
бумажная
осадочная
жидкостно-адсорбционная
ионообменная
жидкостная низкого давления
жидкостная высокого давления (ВЭЖХ)
2. Схема устройства для ВЭЖХ
AutosamplerOven
Column
Detector
Degasser
Pump
Reservoir
Data processor
3. Насосные системы
НАСОСНЫЕ СИСТЕМЫК насосам предъявляются следующие требования:
генерация давления до 15 МПа
химическая стойкость
обеспечение скорости потока от 0,1 до 10 мл/мин
Существуют вытеснительные и возвратно-поступательные насосы.
4. Системы ввод пробы
СИСТЕМЫ ВВОД ПРОБЫВведение объемов от 5 до 500 мкл,
петлевой дозатор
5.
Детектор: рефрактометр, УФ-детекторЭХД
рефрактометр (отклоняющий)
6. УФ-детектор
7.
В ВЭЖХ вводится фактор ёмкостиСелективность – величина, отражающая способность колонки к
разделению, т.е. избирательность:
=1 – разделения нет
то можно подбором элюента добиться
хорошего разделения
8.
9. Типы набивок в жидкостной хроматографии
А – объемно-пористые макрочастицы (40-60 мкм)В – поверхностно-пористые
С – объемно-пористые микрочастицы (5-10 мкм)
10.
11.
12.
13. Сорбенты
СОРБЕНТЫЗаполнение колонок частицами размером
менее
20мкм
проблемой.
энергия
является
Высокая
и
отдельной
поверхностная
связанный
с
ней
электростатический заряд не позволяют
проводить
заполнения
сухое
заполнение.
колонки
Для
сорбент
суспендируется в жидкости, еще лучше
использование плавающих суспензий.
14. Неподвижные фазы
НЕПОДВИЖНЫЕ ФАЗЫВ качестве неподвижных фаз могут
служить жидкости иммобилизованные
на носители.
Носитель может быть модифицирован с
помощью химической реакции, при
этом получаются химически
закрепленные фазы.
15.
16.
17. Виды ВЭЖХ
нормально-фазоваяНФ
сорбент – полярный
элюент - неполярный
обращённо-фазовая
ОФ
сорбент – неполярный
элюент - полярный
18.
Обращённо-фазовая хроматография19.
Наиболее часто используются алкильныегруппы С18, С8 – они образуют цепочную
поверхность
20.
Нормально-фазовая хроматография21.
22.
23.
24.
Ион-парный ОФ-режимДля ионных соединений характерно, что в
зависимости от рН
они могут существовать в разных формах:
молекулярные и ионные.
Ионные формы удерживаются в ОФ-режиме
хуже, чем молекулярные.
25.
26. Примеры
27.
28.
Растворенныегазы,
которые
могут
приводить
к
образованию пузырьков и мешать детектированию, а
также нерастворенные вещества должны быть удалены из
растворителей.
Существует 2 вида элюирования
изократическое
и градиентное.
29. Цель градиентного элюирования - проблемы в изократическом режиме-
Цель градиентного элюирования- проблемы в изократическом режиме
В изократическом режиме
метанолl / вода = 6 / 4
Долгое время анализа
метанол / вода = 8 / 2
Плохое разделение
(Column : ODS type)
29
30. - Решение -
- РешениеГрадиентное изменение состава подвижной фазы
95%
Концентрация
метанола в
подвижной фазе
30%
Короткое время анализа
&
Отличное разделение
30
31. ВЭЖХ ионной хроматографии для разделения ионов с использованием ионообменников
32.
В качестве универсального принципадетектирования неорганических ионов
используется измерение электропроводности