Диагностика наследственных заболеваний

1.

Диагностика наследственных заболеваний

2.

Диагностика
Диагностика наследственной
наследственной патологии
патологии является
является сложным
сложным и
и трудоемким
трудоемким
процессом.
процессом. Трудности
Трудности обусловлены
обусловлены большим
большим количеством
количеством наследственных
наследственных
болезней
болезней (их
(их около
около 3,5
3,5 тыс.),
тыс.), разнообразием
разнообразием клинической
клинической картины
картины
каждой
каждой из
из них,
них, редкой
редкой встречаемостью
встречаемостью некоторых
некоторых форм
форм и
и др.
др. А
А также
также тем,
тем,
что
что наследственные
наследственные болезни
болезни могут
могут протекать
протекать сходно
сходно сс
ненаследственными,
ненаследственными, сопутствовать
сопутствовать им.
им.
Врач
Врач общей
общей практики,
практики, как
как правило,
правило, не
не владеет
владеет всеми
всеми знаниями,
знаниями,
необходимыми
необходимыми для
для диагностики
диагностики наследственных
наследственных болезней,
болезней, поэтому
поэтому при
при
подозрении
подозрении на
на наследственную
наследственную болезнь
болезнь необходимо
необходимо направлять
направлять пациента
пациента
на
на специальное
специальное обследование.
обследование.

3.

Часто
Часто общего
общего клинического
клинического обследования
обследования достаточно
достаточно для
для диагностики
диагностики
наиболее
наиболее известных
известных наследственных
наследственных болезней,
болезней, например:
например:
Болезни Дауна
Ахондроплазия
Нейрофиброматоз
Хорея Гентингтона
Однако,
Однако, для
для полного
полного исключения
исключения ошибки
ошибки необходимо
необходимо
проведение
проведение специальных
специальных генетических
генетических методов
методов обследования.
обследования.
Поэтому
Поэтому ход
ход постановки
постановки диагноза
диагноза должен
должен быть
быть двухэтапным:
двухэтапным:
1.
1. общее
общее клиническое
клиническое обследование
обследование больного
больного в
в соответствии
соответствии сс
современными
современными требованиями,
требованиями, описанными
описанными в
в соответствующих
соответствующих руководствах;
руководствах;
2.
2. при
при подозрении
подозрении на
на конкретную
конкретную наследственную
наследственную болезнь
болезнь необходимо
необходимо
проведение
проведение специализированного
специализированного дифференциально-диагностического
дифференциально-диагностического
обследования.
обследования.

4.

При
При общем
общем клиническом
клиническом обследовании
обследовании любого
любого больного
больного постановка
постановка
диагноза
диагноза должна
должна завершиться
завершиться одним
одним из
из трёх
трёх заключений:
заключений:
1.
1. чётко
чётко поставлен
поставлен диагноз
диагноз ненаследственного
ненаследственного заболевания;
заболевания;
2.
2. чётко
чётко поставлен
поставлен диагноз
диагноз наследственной
наследственной болезни;
болезни;
3.
3. имеется
имеется подозрение,
подозрение, что
что основная
основная или
или сопутствующая
сопутствующая
болезнь
болезнь наследственная.
наследственная.
Первые
Первые две
две группы
группы заключений
заключений составляют
составляют подавляющую
подавляющую часть
часть при
при
обследовании
обследовании больных.
больных. Третья
Третья группа,
группа, как
как правило,
правило, требует
требует применения
применения
специальных,
специальных, дополнительных
дополнительных методов
методов обследования
обследования (параклинических,
(параклинических,
лабораторно-генетических).
лабораторно-генетических).

5.

В клинической генетике для диагностики различных форм
наследственной патологи применяются: клинико-генеалогический
метод, специальные и дополнительные (лабораторные,
инструментальные) методы исследования.
Среди специальных методов диагностики выделяют:
Цитогенетический
Цитогенетический
(кареотипирование)
(кареотипирование)
Биохимический
Биохимический
Молекулярно-генетический
Молекулярно-генетический

6.

Кариотипирование,
Кариотипирование, или
или цитогенетическое
цитогенетическое исследование позволяет
исследование позволяет выявить
выявить
отклонения
в
структуре
и
числе
хромосом,
которые
могут
стать
причиной
отклонения в структуре и числе хромосом, которые могут стать причиной
бесплодия, другой
бесплодия, другой наследственной
наследственной болезни
болезни и
и рождения
рождения больного
больного ребенка.
ребенка.
Кариотип
Кариотип человека
человека состоит
состоит из
из 46
46 хромосом
хромосом –– 22
22 пары
пары аутосом
аутосом и
и две
две
половые
половые хромосомы.
хромосомы. У
У женщины
женщины это
это две
две X
X хромосомы
хромосомы (кариотип:
(кариотип: 46,
46, ХХ),
ХХ),
а
у
мужчин
одна
Х
хромосома,
а
другая
–
Y
(кариотип:
46,
ХY).
а у мужчин одна Х хромосома, а другая – Y (кариотип: 46, ХY).
46,XX (кариотип женщины)
46,XY (кариотип мужчины)
 В
 В каждой
каждой хромосоме
хромосоме находятся
находятся гены,
гены, ответственные
ответственные за
за
наследственность. Кариотипирование
наследственность. Кариотипирование позволяет
позволяет обнаружить
обнаружить
наследственные
наследственные заболевания,
заболевания, связанные
связанные сс изменением
изменением количества
количества
хромосом,
их
формы,
дефектом
отдельных
генов.
хромосом, их формы, дефектом отдельных генов.

7.

 К
 К таким
таким болезням
болезням относятся
относятся синдромы
синдромы Патау
Патау и
и Эдвардса;
Эдвардса; синдром
синдром
«кошачьего
«кошачьего крика», разнообразные
крика», разнообразные ферментопатии
ферментопатии (болезни
(болезни обмена
обмена
веществ)
веществ) и
и многие
многие другие.
другие.
Синдром
Синдром Патау
Патау
Описан в 1961 г.
Клинические
Клинические признаки:
признаки:
микроцефалия
расщепление губы и нёба
полидактилия
узкая глазная щель
пороки внутренних органов
эпикант
гипоплазия наружных половых органов
Популяционная частота
– 1 : 7 500
Тип
Тип наследования
наследования::
тирисомия 13

8.

Синдром
Синдром Эдвардса
Эдвардса
Клинические
Клинические признаки:
признаки:
задержка прентального развития
полидактилия
расщелина губы
спинномозговая грыжа
сращение или кисты почек
Популяционная частота
– 1 : 5000
множественные пороки развития черепа,
сердца, половой и пищеварительной
системы
Тип
Тип наследования
наследования::
тирисомия 18

9.

Синдром
Синдром кошачьего
кошачьего крика
крика
Клинические
Клинические признаки:
признаки:
необычный плач, напоминающий кошачье
мяуканье
микроцефалия
антимонголоидный разрез глаз
умственная отсталость
лунопообразное лицо
эпикант
гипертелоризм
аномалия внутренних органов
Популяционная частота
Тип
Тип наследования
наследования::
– 1 : 45 000
моносомия 5 р (выпадение – делеция
короткого плеча 5-ой хромосомы)

10.

Существует
Существует два
два основных
основных типа
типа этого
этого исследования:
исследования:
изучение хромосом клеток крови
пациентов
пренатальное кариотипирование, то есть
исследование хромосом плода.
Известно
Известно много
много заболеваний,
заболеваний, причина
причина
которых
которых -- нарушение
нарушение количества
количества и/или
и/или
строения
строения хромосом,
хромосом, например:
например:
нарушения менструального цикла
выкидыши, бесплодие
уродства, умственная отсталость
нарушения иммунитета и сердечной
деятельности
Спектральное кариотипирование

11.

Существуют
Существуют международные
международные стандарты,
стандарты, рекомендующие
рекомендующие
исследование
исследование хромосом
хромосом в
в следующих
следующих случаях:
случаях:
• наличие
наличие хромосомной
хромосомной патологии
патологии в
в семье
семье или
или уу родственников
родственников
• привычное
привычное невынашивание
невынашивание беременности
беременности
• возраст
возраст беременной
беременной женщины
женщины более
более 35
35 лет
лет (1
(1 случай
случай из
из 30
30 родов
родов -- сс
генетической
генетической патологией)
патологией)
• оценка
оценка мутагенных
мутагенных воздействий
воздействий (радиационных,
(радиационных, химических
химических и
и др.)
др.)
Пренатальная
Пренатальная генетическая
генетическая
диагностика
диагностика позволяет
позволяет уверенно
уверенно
определять
определять хромосомную
хромосомную
патологию
патологию плода
плода уже
уже на
на ранних
ранних
сроках
сроках беременности,
беременности, а
а также
также
определить
определить пол
пол будущего
будущего ребенка
ребенка
уже
уже на
на самых
самых ранних
ранних сроках
сроках
беременности.
беременности.

12.

Биохимические
Биохимические методы
методы
Биохимические
Биохимические методы
методы основаны
основаны на
на исследовании
исследовании биохимических
биохимических
процессов,
процессов, протекающих
протекающих в
в организме,
организме, называемых
называемых метаболизмом
метаболизмом (обмен
(обмен
веществ).
веществ). Известно
Известно много
много наследственных
наследственных болезней,
болезней, связанных
связанных сс нарушением
нарушением
метаболизма
метаболизма (врожденных
(врожденных нарушений),
нарушений), среди
среди которых
которых —
— альбинизм.
альбинизм.
Эти
Эти методы
методы помогают
помогают обнаружить
обнаружить целый
целый ряд
ряд заболеваний
заболеваний сс нарушениями
нарушениями
обмела
обмела веществ
веществ (энзимопатии).
(энзимопатии). Исследованию
Исследованию подлежат
подлежат кровь,
кровь, моча,
моча,
ликвор,
ликвор, пунктаты
пунктаты костного
костного мозга,
мозга, амниотическая
амниотическая жидкость,
жидкость, сперма,
сперма,
пот,
пот, волосы,
волосы, ногти,
ногти, кал
кал и
и др.
др.

13.

На
На первом
первом этапе
этапе обследования
обследования (экспресс-диагностика)
(экспресс-диагностика) применяются
применяются
методы
методы массового
массового биохимического скрининга:
биохимического скрининга: пробы
пробы Феллинга
Феллинга (на
(на
фенилкетонурию),
фенилкетонурию), Альтгаузена
Альтгаузена (гликогенозы),
(гликогенозы), Бенедикта
Бенедикта
(галактоземия,
(галактоземия, фруктоземия),
фруктоземия), проба
проба на
на гипераминоацидурию,
гипераминоацидурию,
микробиологический
микробиологический тест
тест Гатри
Гатри (ФКУ
(ФКУ и
и др.
др. аминоацидопатии).
аминоацидопатии).
Разработаны
Разработаны простые
простые качественные
качественные биохимические
биохимические тесты
тесты для
для эксперссэксперссдиагностики
диагностики гипотиреоза,
гипотиреоза, муковисцидоза,
муковисцидоза, для
для выявления
выявления нарушений
нарушений
обмена
обмена билирубина,
билирубина, болезни
болезни Тея-Сакса,
Тея-Сакса, гепатолентикулярной
гепатолентикулярной
дегенерации,
дегенерации, АГС.
АГС. Эти
Эти пробы
пробы достаточно
достаточно просты
просты и
и используют
используют легко
легко
доступный
доступный биологический
биологический материал
материал (кровь,
(кровь, моча).
моча).

14.

Фенилкетонурия
Фенилкетонурия
Гликогенозы
Гликогенозы
Галактоземия
Галактоземия

15.

На
На втором
втором этапе
этапе (уточняющая
(уточняющая диагностика)
диагностика) применяют
применяют молекулярномолекулярноцитогенетические,
цитогенетические, молекулярно-биологические
молекулярно-биологические методы,
методы, более
более
сложные
сложные методы
методы аналитической
аналитической биохимии:
биохимии:
-- исследование
исследование метаболического
метаболического пути
пути (количественное
(количественное
определение
определение метаболитов,
метаболитов, их
их кинетики
кинетики и
и накопления);
накопления);
-- прямое
прямое измерение
измерение концентрации
концентрации (иммунохимические
(иммунохимические методы),
методы),
активности
активности (энзимодиагностика),
(энзимодиагностика), физико-химических
физико-химических и
и
кинетических
кинетических параметров
параметров мутантных
мутантных белков;
белков;
-- исследование
исследование мутантных
мутантных белков
белков сс помощью
помощью нагрузочных
нагрузочных проб
проб
мечеными
мечеными субстратами
субстратами и
и гибридизации
гибридизации соматических
соматических клеток;
клеток;
-- исследование
исследование структуры
структуры мутантного
мутантного гена
гена методами
методами
рестрикционного
рестрикционного анализа.
анализа.

16.

Показания
Показания для
для биохимического
биохимического исследования:
исследования:
1)
1) умственная
умственная отсталость,
отсталость, психические
психические нарушения;
нарушения;
2)
2) нарушение
нарушение физического
физического развития
развития -- аномальный
аномальный рост
рост и
и
строение
строение волос
волос или
или ногтей;
ногтей;
3)
3) неправильный
неправильный рост
рост сс искривлением
искривлением костей
костей туловища
туловища и
и
конечностей,
конечностей, чрезмерное
чрезмерное отложение
отложение жира,
жира, гипотрофия
гипотрофия или
или
кахексия,
кахексия, тугоподвижность
тугоподвижность или
или разболтанность
разболтанность суставов;
суставов;
4)
4) плохое
плохое зрение
зрение или
или полная
полная слепота,
слепота, тугоухость
тугоухость или
или глухота;
глухота;
5)
5) судороги,
судороги, мышечная
мышечная гипотония,
гипотония, гипергипер- и
и гипопигментация,
гипопигментация,
фото-чувствительность,
фото-чувствительность, желтуха;
желтуха;
6)
6) непереносимость
непереносимость отдельных
отдельных пищевых
пищевых продуктов
продуктов и
и лекарственных
лекарственных
препаратов,
препаратов, нарушение
нарушение пищеварения,
пищеварения, частая
частая рвота,
рвота, диарея,
диарея, жидкий
жидкий
стул,
стул, гепатогепато- и
и спленомегалия;
спленомегалия;
7)
7) почечно-каменная
почечно-каменная болезнь,
болезнь, холестаз;
холестаз;
8)
8) гемолитические
гемолитические анемии
анемии и
и др.
др. состояния.
состояния.

17.

Молекулярно-генетические
Молекулярно-генетические методы
методы
Знание
Знание структуры
структуры и
и функции
функции генов,
генов, основных
основных видов
видов изменчивости,
изменчивости,
знакомство
знакомство сс наследственными
наследственными болезнями
болезнями позволяет
позволяет перейти
перейти к
к анализу
анализу
молекулярно-генетических
молекулярно-генетических методов.
методов. Методы
Методы молекулярной
молекулярной генетики
генетики
направлены
направлены на
на изучение
изучение молекулы
молекулы ДНК
ДНК как
как в
в норме,
норме, так
так и
и при
при ее
ее
повреждении,
повреждении, а
а также
также на
на «манипуляции»
«манипуляции» сс молекулами
молекулами ДНК
ДНК и
и РНК.
РНК.
Использование
Использование молекулярно-генетических
молекулярно-генетических методов
методов требует
требует знания
знания
основных
основных этапов
этапов получения
получения определенных
определенных последовательностей
последовательностей
(фрагментов)
(фрагментов) ДНК
ДНК

18.

Этапы
Этапы получения
получения последовательностей
последовательностей нуклеотидов
нуклеотидов ДНК:
ДНК:
Получение образцов ДНК:
—
— выделение
выделение всей
всей (геномной)
(геномной) ДНК
ДНК из
из клеток
клеток (лимфоцитов,
(лимфоцитов, фибробластов,
фибробластов,
амниотических
амниотических клеток,
клеток, клеток
клеток хориона);
хориона);
лимфоциты
фибробласты
амниотические
клетки
клетки хориона
—
— рестрикция
рестрикция ДНК
ДНК —
— получение
получение отдельных
отдельных фрагментов
фрагментов ДНК
ДНК (использование
(использование рестриктаз,
рестриктаз,
которые
которые разрывают
разрывают ДНК
ДНК по
по строго
строго определенным
определенным последовательностям
последовательностям нуклеотидов
нуклеотидов из
из 446
пар
оснований
—
сайтах
рестрикции).
6 пар оснований — сайтах рестрикции).

19.

Амплификация — накопление (умножение, клонирование) одинаковых
фрагментов ДНК:
—
— использование
использование классических
классических трудоемких
трудоемких методов:
методов:
создание
создание рекомбинантных
рекомбинантных плазмид
плазмид
введение
введение их
их в
в бактериальную
бактериальную клетку
клетку
размножение
размножение клеток
клеток
выделение
выделение заданных
заданных фрагментов
фрагментов ДНК;
ДНК;
—
— использование
использование полимеразной
полимеразной цепной
цепной реакции:
реакции:
разделение
разделение двухцепочечной
двухцепочечной ДНК
ДНК на
на одноцепочечную
одноцепочечную
присоединение
присоединение праймеров
праймеров (затравка)
(затравка) к
к одноцепочечным
одноцепочечным
молекулам
молекулам ДНК
ДНК (по
(по принципу
принципу комплементарности)
комплементарности)
синтез
синтез многочисленных
многочисленных попо- линуклеотидных
линуклеотидных цепей
цепей на
на одноцепочечных
одноцепочечных
молекулах
молекулах в
в границах
границах присоединения
присоединения праймеров
праймеров

20.

Электрофорез фрагментов ДНК
— разделение
— разделение фрагментов
фрагментов по
по молекулярной
молекулярной массе
массе и
и электрическому
электрическому
заряду
заряду на
на поверхности
поверхности агарозного
агарозного геля.
геля. Каждый
Каждый фрагмент
фрагмент имеет
имеет
определенные
определенные размеры
размеры и
и занимает
занимает в
в геле
геле определенное
определенное место
место в
в виде
виде
дискретной
дискретной полосы.
полосы.

21.

Идентификация конкретных фрагментов ДНК с
помощью блот-гибридизации по Саузерну
Фрагменты
Фрагменты ДНК
ДНК переносятся
переносятся на
на
специальные
специальные фильтры,
фильтры, где
где проводится
проводится
их
их гибридизация
гибридизация сс радиоактивными
радиоактивными
синтетическими
синтетическими зондами
зондами или
или
клонированными
клонированными фрагментами
фрагментами ДНК.
ДНК.
Зонд
Зонд выявляет
выявляет необходимый
необходимый фрагмент
фрагмент
ДНК
ДНК путем
путем связывания
связывания сс
комплементарными
комплементарными ему
ему нуклеотидными
нуклеотидными
последовательностями
последовательностями фрагмента.
фрагмента.
Изменение
Изменение положения
положения и
и длины
длины
фрагмента
фрагмента по
по сравнению
сравнению сс контролем
контролем
(зондом),
(зондом), исчезновение
исчезновение или
или появление
появление
нового
нового фрагмента
фрагмента свидетельствует
свидетельствует о
о
перестройках
перестройках последовательности
последовательности
нуклеотидов
нуклеотидов в
в исследуемом
исследуемом гене.
гене.

22.

Базируясь на технологии получения нуклеотидных последовательностей
ДНК, можно выделить следующие методы молекулярной генетики.
1.
1. Метод
Метод секвенирования
секвенирования —
— определение
определение нуклеотидной
нуклеотидной последовательности
последовательности ДНК.
ДНК.
Таким
Таким методом
методом полностью
полностью определена
определена последовательность
последовательность нуклеотидов
нуклеотидов генов
генов
глобина,
глобина, некоторых
некоторых гормонов
гормонов (инсулина,
(инсулина, гормона
гормона роста,
роста, пролактина
пролактина и
и др.).
др.).
2.
2. Метод
Метод полимеразной
полимеразной цепной
цепной реакции
реакции (используется
(используется для
для увеличения
увеличения числа
числа
фрагментов
фрагментов ДНК).
ДНК).
3.
3. Метод
Метод получения
получения праймеров,
праймеров, соответствующих
соответствующих известным
известным генам.
генам.
4.
4. Метод
Метод гибридизации
гибридизации нуклеиновых
нуклеиновых кислот.
кислот.
5.
5. Метод
Метод клонирования
клонирования ДНК.
ДНК.
6.
6. Метод
Метод получения
получения рекомбинантных
рекомбинантных молекул
молекул ДНК.
ДНК.
7.
7. Метод
Метод получения
получения белков
белков сс помощью
помощью рекомбинантных
рекомбинантных молекул
молекул ДНК.
ДНК.
8.
8. Создание
Создание библиотеки
библиотеки генов
генов —
— полного
полного набора
набора (коллекции)
(коллекции) клонированных
клонированных
фрагментов
фрагментов ДНК,
ДНК, полученных
полученных в
в результате
результате рестрикции
рестрикции тотальной
тотальной ДНК.
ДНК.

23.

Методы молекулярной генетики позволяют:
• идентифицировать
идентифицировать мутации
мутации в
в гене.
гене. Примером
Примером выявления
выявления мутантного
мутантного гена
гена является
является
диагностика
диагностика серповидно-клеточной
серповидно-клеточной анемии
анемии в
в эмбриональном
эмбриональном периоде.
периоде. Фрагменты
Фрагменты ДНК,
ДНК,
полученные
полученные при
при действии
действии рестриктаз
рестриктаз уу здорового
здорового и
и больного,
больного, сравниваются
сравниваются сс помощью
помощью
метода
метода гибридизации
гибридизации по
по Саузерну,
Саузерну, при
при этом
этом в
в качестве
качестве зонда
зонда используется
используется
радиоактивно
радиоактивно меченая
меченая ДНК
ДНК гена
гена Р-глобина;
Р-глобина;
• диагностировать
диагностировать моногенное
моногенное наследственное
наследственное заболевание
заболевание путем
путем определения
определения
нуклеотидной
нуклеотидной последовательности
последовательности генов
генов (гемофилия,
(гемофилия, гемоглобинопатия)
гемоглобинопатия) и
и выявления
выявления
мутантных
мутантных генов
генов (фенилкетонурия,
(фенилкетонурия, муковисцидоз);
муковисцидоз);
• осуществлять
осуществлять генетический
генетический анализ
анализ полиморфизма
полиморфизма ДНК
ДНК родителей
родителей и
и детей;
детей;
• определять
определять индивидуальную
индивидуальную изменчивость
изменчивость ДНК
ДНК человека
человека по
по вариабельным
вариабельным точкам
точкам
ДНК,
ДНК, молекулярный
молекулярный анализ
анализ которых
которых позволяет
позволяет проводить
проводить идентификацию
идентификацию личности
личности
человека);
человека);
• выделять
выделять и
и синтезировать
синтезировать гены
гены (выделение,
(выделение, синтез
синтез и
и клонирование
клонирование генов
генов является
является
одним
из
этапов
генной
инженерии).
одним из этапов генной инженерии).

24.

Использование
Использование описанных
описанных методов
методов в
в генетике
генетике и
и медицине
медицине позволяет
позволяет
вовремя
вовремя определить
определить те
те или
или иные
иные нарушения,
нарушения, происходящие
происходящие в
в организме
организме
на
на клеточном
клеточном уровне.
уровне. Так,
Так, анализ
анализ крови
крови позволяет
позволяет определить
определить такие
такие
генетические
генетические аномалии,
аномалии, как
как болезнь
болезнь Тея-Сакса,
Тея-Сакса, серповидноклеточная
серповидноклеточная
анемия,
анемия, гемофилия,
гемофилия, кистозный
кистозный фиброз,
фиброз, вызываемые
вызываемые теми
теми или
или иными
иными
генными
генными нарушениями
нарушениями (мутациями).
(мутациями).

25.

Другие генетические аномалии обусловливаются не наличием
мутационных генов, а нарушением поведения хромосом во время
мейоза (синдром Дауна), а именно: нерасхождение 21-й или 22-й пары
хромосом при мейозе. Индивидуумов с такой болезнью отличает ряд
характерных признаков: умственная отсталость, наличие кожной
складки у угла глаз, коренастое телосложение и жизнерадостность.
В настоящее время генетика и медицина располагают методикой,
позволяющей обнаруживать аномальное число хромосом у плода на 16й неделе беременности. Для этого берут пробу околоплодной жидкости
путем пункции плодного пузыря, исследуют ее клетки и определяют,
нет ли в них хромосомных аномалий.

26.

Недавно
Недавно ряду
ряду исследователей
исследователей удалось
удалось добиться
добиться снижения
снижения
частоты
частоты некоторых
некоторых наследственных
наследственных заболеваний
заболеваний уу лабораторных
лабораторных
животных.
животных. Это
Это позволяет
позволяет надеяться,
надеяться, что
что со
со временем
временем можно
можно
будет
будет обнаруживать
обнаруживать и
и лечить
лечить некоторые
некоторые генетические
генетические болезни
болезни
человека
человека еще
еще на
на стадии
стадии плода.
плода.

27.

Спасибо за внимание