Правила по технике безопасности при работе в микробиологической лаборатории

1. Правила по технике безопасности при работе в микробиологической лаборатории

Нельзя входить в лабораторию в верхней одежде и головном уборе, не вносить посторонние вещи.
Работа должна производиться в специальном чистом халате, волосы должны быть подобраны, не падать на плечи.
На рабочем столе не должно быть посторонних предметов (в том числе портфелей и сумок).
Нельзя оставлять без присмотра включенные горелки или спиртовки, нельзя переносить горящую спиртовку на
другое место: держать вблизи спиртовки вату, марлю, спирт и другие воспламеняющиеся жидкости.
Не оставлять открытыми чашки Петри, пробирки и колбы с посевами культур микроорганизмов.
Запрещается набирать суспензии клеток микроорганизмов пипеткой ртом; необходимо пользоваться специальными
приспособлениями, исключающими попадание микроорганизмов в рот.
До и после работы необходимо тщательно мыть и дезинфицировать поверхность стола, на котором проводилась
работа с микроорганизмами. Все инструменты, использованные при работе с живыми культурами, должны быть
обеззаражены либо обжиганием в пламени горелки, спиртовки (петли, иглы), либо погружены в дезинфицирующий
раствор (предметные и покровные стекла, пипетки, шпатели).
В лаборатории необходимо поддерживать порядок и чистоту. По окончании занятий протирать иммерсионный
объектив микроскопа мягкой тканью, накрывать микроскоп полиэтиленовым чехлом, приводить в порядок рабочее
место, мыть руки.
В лаборатории запрещается прием пищи, лишнее хождение по лаборатории..
Перед уходом из лаборатории необходимо проверять, выключены ли газ, вода, электроприборы.

2. Микроскоп и техника микроскопирования

МИКРОСКОП И ТЕХНИКА
МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

3. 1. Ознакомиться с устройством светопольного микроскопа. 2. Овладеть методами работы с ним. 3. Научиться готовить препараты

Цели и задачи
1. Ознакомиться с устройством светопольного микроскопа.
2. Овладеть методами работы с ним.
3. Научиться готовить препараты живых и фиксированных
окрашенных клеток микроорганизмов.
4. . Овладеть техникой микроскопирования препаратов живых
клеток с сухими системами объективов.
5. Овладеть техникой микроскопирования фиксированных
окрашенных клеток микроорганизмов с иммерсионными объектами
.

4. Общий вид микроскопа БИОМЕД-1

Рис.1 Общий вид микроскопа БИОМЕД-1:
1 – подложка основания; 2 - основание микроскопа с выключателем; 3 –осветитель; 4 –
конденсор Аббе; 5 – предметный столик с измерительным нониусом; 6 – держатель
препарата; 7 – объективы; 8 – револьверная головка; 9 – окуляры; 10 – адаптер
видео/фотонасадки; 11 – тринокулярная насадка; 12 – переключатель светового потока; 13
– штатив; 14 –макрометрический винт; 15 – микрометический винт; 16 – коаксиальная
ручка перемещения препарата; 17 – регулятор яркости осветителя.

5. ОБЩИЙ ВИД МИКРОСКОПА БИОМЕД - 4

6.

Микроскоп (от греческого
слова micros – малый, scopeo –
смотрю)

7.

• Разрешающая способность нормального
глаза человека – 0,2 мм
• Размеры наименьших частиц, видимых в
современных микроскопах имеют размеры
0,0002 мм

8.

9. МЕХАНИЧЕСКАЯ и ОСВЕТИТЕЛЬНАЯ ЧАСТИ

• крестообразный столик с коаксиальной
ручкой;
• Тубусодержатель;
• макрометрический
и
микрометрический винты;
• Основание
микроскопа
с
вмонтированной
электрической
лампочкой;
• Боковая
панель
основания
с
выключателем
осветителя
и
регулятором освещения препарата

10.

• крестообразный столик с помощью коаксиальной
ручки перемещает препараты в двух взаимно
перпендикулярных направлениях;
• Грубая фокусировка препарата осуществляется с
помощью макрометрического винта;
• Точная фокусировка осуществляется с помощью
микрометрического винта

11.

ПРАВИЛА РАБОТЫ С МИКРОВИНТОМ
Полных оборотов микровинтом делать
нельзя.
Вначале
необходима
грубая
настройка. Разрешается поворачивать
микровинт в ту или иную сторону не более
2…4х делений (не более пол-оборота).

12.

Оптическая часть микроскопа
• конденсор системы Аббе
с ирисовой диафрагмой;
• объективы;
• окуляры

13.

Назначение конденсора
• Конденсор (от лат. condenso - уплотняю, сгущаю)
собирает лучи, идущие от источника через
диафрагму, и направляет их на объект.
• С помощью винта конденсора, опуская его или
поднимая,
регулируют
степень
освещения
препарата.

14.

Правила работы с конденсором
• При работе с большими увеличениями
микроскопа
конденсор
должен
находиться в верхнем положении.
• При работе с малыми увеличениями
микроскопа конденсор опускают вниз.

15.

Объективы
• Объектив (греч. objectum – предмет исследования)
многолинзовая короткофокусная система, от качества которой
зависит в основном изображение объекта;
• Фронтальная линза - наружная, обращенная плоской
стороной к препарату, обеспечивает увеличение объектива; оно
обозначено на оправе объектива.
• Микроскоп
БИОМЕД – 4
оснащен объективами,
увеличивающими в 4, 10,40 и 100 раз (х4,х10,х40,х100);

16.

СУХИЕ СИСТЕМЫ
ОБЪЕКТИВОВ
«БИОМЕД-1»
• Между фронтальной линзой и
препаратом находится слой
воздуха
• х4
• х10
• х40

17.

Иммерсионный
объектив микроскопа
«Биомед-4»
• Между фронтальной линзой и препаратом –
находится капля иммерсионного масла,
показатель преломления которого близок к
показателю преломления стекла 1,515 и 1,52
соответственно.
• х100

18. Аберрации линз

Хроматическая аберрация возникает при прохождении через линзу
пучка лучей
различной длиной волны. Преломляясь по-разному, лучи пересекаются не в одной
точке. Сине-фиолетовые лучи с короткой длиной волны преломляются сильнее, чем
красные с большей длиной волны. Вследствие этого у бесцветного объекта
появляется окраска.
Сферическая аберрация - связана со свойством линз неравномерно преломлять
периферические и центральные луч. Первые обычно преломляются в большей
степени, чем вторые, поэтому пересекаются на более близком расстоянии к линзе. В
результате изображение точки приобретает вид расплывчатого пятна.

19.

Типы объективов
АХРОМАТЫ –устраняют сферическую
аберрацию и частично хроматическую, дают
изображение наиболее четкое в центре поля зрения. Края
поля зрения при использовании ахроматов бывают
окрашены в разные цвета спектра. Ахроматы широко
распространены вследствие своей простоты и
дешевизны.
АПОХРОМАТЫ - устраняют хроматическую
аберрацию почти в 10 раз, по сравнению с ахроматами.
дают возможность устранить окрашивание объекта и
получить одинаково четкое изображение по всему полю
зрения.

20.

Оптические данные объективов микроскопа
«Биомед-4»
Система
Собственное
увеличение
Числовая
апертура
Фокусное
расстояние,
мм
Свободное
рабочее расстояние, мм
Сухая
4х
0,10
21,61
10,20
Сухая
10х
0,20
15,50
6,20
Сухая
Масляная
иммерсия
40х
0,65
4,35
0,40
100х
1,25
1.35
0,12

21.

Влияние иммерсионного масла на ход лучей в
микроскопе
1 - объектив; 2 — предметное стекло; 3 —
объект; 4— иммерсионное масло; 5— лучи
света; 6 — фронтальная линза объектива

22. ОКУЛЯРЫ

23. ОСНОВНЫЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ МИКРОСКОПА

• общее увеличение
• разрешающая способность

24.

Общее увеличение микроскопа
• произведение увеличения
объектива на увеличение окуляра

25.

Разрешающая способность микроскопа
• Четкость
получаемого
изображения
характеризуется
разрешающей способностью микроскопа, т.е. той наименьшей
величиной объектов и их деталей, которые можно увидеть с помощью
этого прибора.

26. Числовая апертура

Для условий работы наших микроскопов величина постоянна, так как объекты исследуются при
обычном свете ( =0,55мкм). Следовательно, предел разрешающей способности зависит исключительно
от возможности повышения числовой апертуры. Числовая апертура («охват» линзы) объектива
характеризует его светособирательную способность и определяется по формуле:
A 1=n•sin l/2 ,
где - отверстный угол, образуемый крайними лучами, попадающими в объектив (рис. 4);
n - показатель
преломления
среды,
находящейся
между
фронтальной
линзой объектива и
рассматриваемым предметом.
Разрешающая способность микроскопа - величина, обратная разрешающему расстоянию (d).
Чем меньше абсолютная величина d, тем выше разрешающая способность микроскопа, тем меньше
величины объект можно увидеть. Световой микроскоп при освещении видимым светом имеет
разрешающую способность около 0,2мкм.

27. Правила работы с сухими системами объективов

Приготовленный препарат помещают и закрепляют с помощью держателя (6) на предметном
столике. Сначала препарат рассматривают с объективом 10х, а затем переходят к большим
увеличениям. Необходимо помнить, что чем меньше увеличение объектива, тем больше при
установке препарата на фокус будет свободное рабочее расстояние (расстояние между
объективом и препаратом). С помощью сухого объектива с увеличением 10х просматривают
несколько полей зрения. Передвигают предметный столик с помощью ручки перемещения
препарата (16). Нужный для исследования участок препарата устанавливают точно в центре
поля зрения. Вращением револьвера переводят объектив с увеличением 40х. Наблюдая сбоку,
макрометрическим винтом поднимают предметный столик почти до соприкосновения с
препаратом (не касаясь его). Затем, смотря в окуляр, тем же винтом очень медленно опускают
столик до появления изображения изучаемых объектов. После этого вращением
микрометрического винта в ту или другую сторону (но не более чем на 2…4 деления)
производят его точную фокусировку. Если при повороте микровинта на 2…4 деления (полоборота) в ту или иную сторону изображение не найдено, снова возвращаются к поиску
изображения с использованием макрометрического винта, а затем переходят к работе с
микрометрическим винтом. При смене объективов необходимо регулировать степень
освещения препарата с помощью конденсора. Так, при просмотре препарата с объективом 10х
конденсор опускают, а при переходе на объектив 40х конденсор несколько поднимают.

28. Правила работы с иммерсионной системой

На фиксированный и окрашенный препарат наносят каплю иммерсионного масла. С
помощью держателя препарата (6) закрепляют препарат на предметном столике.
Поворачивают револьвер и устанавливают по центральной оптической оси иммерсионный
объектив с увеличением 100х. Конденсор поднимают вверх до упора. Ирисовую диафрагму
конденсора открывают полностью. Глядя сбоку, предметный столик с помощью
макрометрического винта поднимают до погружения объектива в масло, почти до
соприкосновения его фронтальной линзы с предметным стеклом препарата. Это нужно
проводить очень осторожно, чтобы фронтальная линза объектива не получила повреждения.
Смотрят в окуляр, очень медленно вращают макрометрический винт от себя и, не отрывая
объектив от масла, опускают тубус до появления грубого изображения. При этом следует
помнить, что свободное рабочее расстояние в иммерсионном объективе равно 0,09…0,10 мм.
Затем точную фокусировку производят микрометрическим винтом. Рассматривают в
препарате несколько полей зрения, передвигая столик с помощью ручки перемещения
препарата (16).
По окончании работы с иммерсионным объективом опускают предметный столик, снимают
препарат и осторожно протирают фронтальную линзу объектива сначала сухой мягкой
хлопчатобумажной салфеткой, затем той же салфеткой, смоченной капелькой спирта.
Оставлять масло на поверхности линзы нельзя, так как оно способствует оседанию пыли,
высыхает и со временем может привести к повреждению оптики микроскопа. Препарат
освобождают от масла сначала кусочком фильтровальной бумаги, затем обрабатывают стекло
спиртом.