Методи ізолювання речовин із біологічного матеріалу полярними розчинниками

1. ОСНОВНА ХАРАКТЕРИСТИКА І метод ізолювання РЕЧОВИН ІЗ БІОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ полярними РОЗЧИННИКАМИ

www.themegallery.com
LOGO
ОСНОВНА
ХАРАКТЕРИСТИКА І
метод ізолювання
РЕЧОВИН ІЗ
БІОЛОГІЧНОГО
МАТЕРІАЛУ полярними
РОЗЧИННИКАМИ

2. ПЛАН ЛЕКЦІЇ

LOGO
ПЛАН ЛЕКЦІЇ
1. Загальна характеристика і дія на організм
речовин, що ізолюються з біологічного матеріалу
полярними розчинниками.
2. Класифікація лікарських отрут.
3. Загальні методи ізолювання.
4. Фактори, що впливають на ступінь ізолювання
«лікарських» отрут з біологічного матеріалу.
5. Методи очищення витяжок.
6. Приватні методи ізолювання.
www.themegallery.com

3. АКТУАЛЬНІСТЬ

LOGO
АКТУАЛЬНІСТЬ
Методи ізолювання підкисленим спиртом і
підкисленою
водою
були
розроблені
насамперед для вилучення алкалоїдів.
Розробка методу ізолювання підкисленим
спиртом була великим кроком у розвитку
судової хімії.
www.themegallery.com

4. Загальна характеристика

LOGO
Загальна характеристика
До групи речовин, що ізолюються з
біологічного матеріалу
полярними розчинниками
відносяться:
1
2
лікарські речовини рослинного
походження;
синтетичні препарати.
www.themegallery.com

5. Дія на організм

LOGO
Дія на організм
Серед досліджуваних речовин виділяють :
1
анальгетики;
2
нейролептики;
3
спазмолітики;
4
анестетики;
www.themegallery.com

6. «Лікарські» отрути

LOGO
«Лікарські» отрути
«Лікарські» отрути займають перше місце
серед речовин, що мають токсикологічне значення,
по числу смертельних отруєнь, що обумовлено :
1
Доступністю препаратів;
2
передозуванням;
3
самолікуванням;
4
індивідуальною непереносимістю;
5
Поєднанням з алкоголем і іншими ліками;
6
Явищами наркоманії;
7
Суїцидами.
www.themegallery.com

7. Физико-химические свойства

LOGO
Физико-химические свойства
Переважно білі або жовтуваті
кристалічні
речовини, які характеризуються
різної розчинність
і кислотно-основними властивостями.
У полярних розчинниках добре розчинні
солі речовин основного і кислого характеру.
В органічних розчинниках розчинні
лікарські речовини, що знаходяться в
неионизированной формі.
www.themegallery.com

8. Шляхи потрапляння в організм

LOGO
Шляхи потрапляння в
організм
Парентерально
Перорально
Через дихальні шляхи
Можуть бути введені перкуторно або ректально
www.themegallery.com

9. всмоктування отрут

LOGO
всмоктування отрут
Залежить від їх фізико-хімічних
властивостей:
Речовини кислого характеру всмоктуються переважно в шлунку;
Речовини основного характеру
всмоктуються переважно в тонкому
кишечнику;
Нікотин і анабазин всмоктуються через
слизові оболонки рота і легких.
www.themegallery.com

10. розподіл отрут

LOGO
розподіл отрут
Метаболізм
отрут
протікає
переважно в печінці.
Розчинні в ліпідах речовини легко
проникають
через
мембрани
і
розподіляються в багатих ліпідами
органах і тканинах, які рясно
забезпечуються кров'ю.
Всі
отрути
накопичуються
в
селезінці, печінці, нирках.
www.themegallery.com

11. Локалізація і виведення отрут

LOGO
Локалізація і виведення отрут
Локалізація отрут залежить від характеру
отруєння:
При гострому отруєнні - в шлунку,
кишечнику, печінки, нирках;
При хронічному отруєнні - в головному і
кістковому мозку.
Виводяться
«лікарські»
отрути
в
нативному вигляді та у вигляді метаболітів
нирками, кишечником і легенями.
www.themegallery.com

12. Сучасні загальні та приватні методи ізолювання речовин з біологічного матеріалу

www.themegallery.com
Сучасні загальні та
приватні методи
ізолювання речовин з
біологічного матеріалу
LOGO

13.

LOGO
метод ізолювання
ЗАГАЛЬНІ МЕТОДИ
Водою, підкисленою кислотою
оксалатній (метод О.О. Васильєвої в
модифікації М.Д.Швайковой)
етанолом,
підкисленим кислотою
оксалатній
(Метод Стаса - Отто)
амфіфільних
розчинниками
(Метод В.А. Карташова
і метод Сшедзінского)
ПРИВАТНІ МЕТОДИ
Водою, підкисленою кислотою сульфатної
(Метод В.П. Крамаренко)
- Для алкалоїдів
Водою, підкисленою кислотою сульфатної
(метод В.І. Попової) - для барбітуратів
Водою, підлуженою натрій
гідроксидом (метод П.Валова)
- Для барбітуратів
Етанолом, підкисленим кислотою
оксалатній (метод Є.М. Саломатина)
- Для похіднихфенотіазину
Ацетонітрилом,
підкисленим HCl (метод Є.М. Саломатина) –
для похіднихфенотіазину
Водою, підкисленою кислотою
оксалатній з подальшим гідролізом
(Метод Б.М. Ізотова)
- Для похідних 1,4-бензодіазепіну
www.themegallery.com

14. Класифікація «лікарських» отрут при ізолювання загальними методами

Класифікація
«лікарських» отрут при
LOGO
ізолювання загальними методами
1.Речовини не утворюють стійких
солей з кислотами - екстрагуються
органічним розчинником з кислою
водного
середовища
(кисла
Хлороформний витяжка):
2.кислого характеру;
3.нейтрального характеру;
4.слабоосновних характеру;
5.частково середньої основності.
www.themegallery.com

15.

Класифікація
«лікарських» отрут при
LOGO
ізолювання загальними методами
2. Речовини основного характеру, які
екстрагуються органічним розчинником з
лужної водного середовища (лужна
Хлороформний витяжка) - алкалоїди та
синтетичні
препарати
похідні
фенотіазину,1,4-бенздіазепіну,піразолону,
ПАБК.
www.themegallery.com

16. ЕТАПИ ізольованість «ЛІКАРСЬКИХ» ОТРУТ З БІОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ

LOGO
ЕТАПИ ізольованість «ЛІКАРСЬКИХ» ОТРУТ З
БІОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ
підготовка зразка
до дослідження
взяття навішування
зразка
2-3
кратна екстракція
полярним
розчинником
екстракція отрут
з кислих водних розчинів
органічними
розчинниками
екстракція отрут
з лужних водних
розчинів органічними
розчинниками
Частка первинних
витяжок
Речовини кислотного
характеру
Речовини основного
характеру
www.themegallery.com

17. Етапи ізолювання отрут екстракцією полярними розчинниками

LOGO
Етапи ізолювання отрут екстракцією
полярними розчинниками
1. Підготовка зразка до дослідження: подрібнення
органів трупа.
2. Взяття навішування (1-100г в залежності від
вмісту речовини і чутливості методу).
3. 2-3 разова екстракція отрути підкисленим
(подщелоченного) розчинником.
4. Об'єднання
витягів,
проціджування
і
центрифугування екстракту.
5. Екстракція отрут з кислою водної фази
органічними розчинниками - отримання «кислого»
хлороформного витягу.
6. Екстракція отрут з лужної водної фази
органічними розчинниками - отримання «лужного»
хлороформного витягу.
www.themegallery.com

18. Ізольованість РЕЧОВИН кислих, нейтральних і слабоосновних ХАРАКТЕРУ

LOGO Ізольованість РЕЧОВИН кислих, нейтральних і
слабоосновних ХАРАКТЕРУ
2-3 кратне наполягання
зразка з полярними
розчинниками
при рН = 2 ... 3
підготовка зразка
до дослідження
очищення первинних
витяжок
(Центрифугування)
подщелачивание кислому
водної витяжки 25% -ним
NH4OH Дорн = 9 ... 10
екстрагування
домішок хлороформом
(2-3 рази)
підкислення лужної
водної витяжки
кислотою оксалатній
До рН = 2 ... 3
екстрагування
досліджуваних речовин
хлороформом (3-4 рази)
об'єднання
хлороформних
витяжок
НА ДОСЛІДЖЕННЯ
www.themegallery.com

19. Особливості ізолювання в залежності від використовуваного екстрагента

LOGO Особливості ізолювання в залежності від
використовуваного екстрагента
1. При використанні етанолу передбачено
осадження білків.
2. При
використанні
ацетонітрилу
передбачено висолювання отрут.
3. При використанні ацетону домішки
екстрагуються гексаном після додавання
HCl.
4. «Лікарські»
отрути
екстрагуються
хлороформом або ефіром у присутності
висалівателя.
www.themegallery.com

20. види екстракції

LOGO
види екстракції
1
В системі тверде тіло-рідина
(З трупного матеріалу);
2
В системі рідина-рідина
(З витяжки в орг. Розчинник).
www.themegallery.com

21. Фактори, що впливають на ефективність ізолювання

LOGO
Фактори, що впливають на
ефективність ізолювання
Проникнення екстрагента в клітини і тканини трупного матеріалу
Розчинення йоду і домішок в екстрагенті або взаємодія з екстрагентом
Перенесення розчинених отрути і домішок через оболонки клітин
в міжклітинний простір
Змішування витягнутих з клітин речовин
з основою масою екстрагента
www.themegallery.com

22.

Природа рідин використаних для
ізолювання отрут
www.themegallery.com
LOGO
Обумовлює їх здатність :
1
Проникати в тканини і клітини біоматеріалу.
2
Розчиняти отруйні речовини,
їх метаболіти і солі.
3
Розчиняти якомога менші
кількості домішок.

23. ФАКТОРИ, ЩО ВПЛИВАЮТЬ НА РІВЕНЬ ізольованість «ЛІКАРСЬКИХ» ОТРУТ З БІОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ

LOGO
ФАКТОРИ, ЩО ВПЛИВАЮТЬ НА РІВЕНЬ
ізольованість «ЛІКАРСЬКИХ» ОТРУТ З
БІОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ
Ступінь подрібнення БІОЛОГІЧНОГО МАТЕРІАЛУ
рН середовища
ПРИРОДА І ВЛАСТИВОСТІ РЕЧОВИН, яка ізолює,
І РЕЧОВИН, ЯКІ ВИКОРИСТОВУЮТЬСЯ Для ізолювання
ПРИРОДА КИСЛОТИ, ЯКА ВИКОРИСТОВУЄТЬСЯ ДЛЯ підкислення
Температура, співвідношення обсягів фаз,
кількість екстракцій
www.themegallery.com

24.

Вплив ступеня
подрібнення
www.themegallery.com
LOGO
1
При використанні ножиць утворюються
частинки біоматеріалу розміром 0,3-0,5см
2
Застосування м'ясорубки утворюються
частинки розміром 0,1-0,05 см
3
За допомогою гомогенізатора отримують
Біоматеріал з розміром частинок близько 0,01 см

25.

оптимальне значення рН
www.themegallery.com
LOGO
Обумовлено
ізоелектричної
точкою білка.
Однак при цьому збільшується
кількість білкових домішок, що
обумовлено підвищенням гідратації
молекул
білків,
пептидів,
амінокислот,
пігментів
і
поліпшенням їх розчинності в воді.

26.

Природа рідин,
використовуваних для
ізолювання отрут
www.themegallery.com
LOGO
За здатністю змішуватися з водою і
ліпідами тканин і органів розчинники
поділяють на:
Гідрофільні-високополярние
розчинники.
Ліпофільні-малополярние
розчинники.
Амфіфільних-метанол,ацетон,
ацетонітрил, етанол.

27.

Природа кислоти,
використовуваної при підкисленні
екстрагента
www.themegallery.com
LOGO
Впливає на ступінь ізолювання
алкалоїдів і синтетичних ліків
основного
характеру.
Це
обумовлено різною розчинністю
солей азотистих основ з різними
кислотами.

28.

Іонна сила розчинів
www.themegallery.com
LOGO
I=∑ci∙zi
Залежить від концентрації електролітів в
цих розчинах - ефект висолювання.

29.

МЕТОДИ ОЧИСТКИ витяжок
«ЛІКАРСЬКИХ» ОТРУТ ВІД ДОМІШОК
www.themegallery.com
LOGO
ОЧИЩЕННЯ
ВІД МІКРОІ МАКРОчастки
проціджування,
відстоювання,
фільтрування,
центрифугування

30.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Фільтрування
дозволяє
очистити
витяжки
від
механічних домішок.
Недоліки - адсорбція отрути
на фільтрі, діаметр пір.
Усувається
центрифугуванням.

31.

МЕТОДИ ОЧИСТКИ витяжок
ВІД ДОМІШОК
www.themegallery.com
LOGO
осадження білків
рідинна
екстракція
СУБЛІМАЦІЯ І
дистиляції
ОЧИЩЕННЯ
від розчинення
РЕЧОВИН
твердофазна
екстракція
хроматографічні
методи
ДІАЛІЗ

32.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Для
осадження
білків
використовують
нагрівання,
висолювання, зміна рН середовища.
При підвищенні температури понад
400С
відбувається
денатурація
і
знижується розчинність білків.
При
підвищенні
концентрації
електролітів знижується розчинність
білків.

33.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Зміна рН призводить до зникнення
сумарного заряду, при цьому виявляється
відсутність електростатичного
відштовхування молекул білків, що
підсилює утворення осаду. Зміна рН
призводить до зникнення сумарного
заряду, при цьому виявляється відсутність
електростатичного відштовхування
молекул білків, що підсилює утворення
осаду.

34.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Схема екстракційної очистки отрут основного
характеру
H3CO
H3CO
H
O
OH
O
N-CH3
HO
Кодеін-основа
N-CH3
HO
Кодеіна г/х сіль
H

35.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Схема екстракційної очистки отрут кислого
характеру
O
O
N
NH
OH
C 2H 5
C 2H 5
ONa
O
C 2H 5
NH
O
Барбітал-амидна
форма
H
C 2H 5
NH
O
Барбітал натрію
імідольна форма

36.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
В основі ТШХ - методу лежить
розподіл отрути між рідкої і
твердої фазою, нанесеною на
тверду підкладку.
Вибирають системи, в яких
домішки залишаються на старті
або рухаються разом з фронтом
розчинника

37.

Методи очищення витяжок
LOGO
В основі електрофорезу на
папері
лежить
розподіл
речовин на папері, вміщеній в
електроліт
під
дією
електричного
поля.
Іони
досліджуваної
суміші
рухаються
до
електроду
протилежного знака.

38.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Очищення екстрактів за
допомогою
гельхроматографії заснована на
різному поведінці молекул по
відношенню до порам гелю.

39.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Дистиляція з водяною
парою і метод сублімації
засновані на летючості
окремих
представників
досліджуваної
групи
отрут.

40.

www.themegallery.com
Методи очищення витяжок
LOGO
Метод діалізу заснований на
застосуванні
напівпроникних
мембран, через пори яких здатні
проникати
іони,
невеликі
молекули, а великі молекули
залишаються по іншу сторону.

41.

LOGOОсновні етапи ізолювання ОТРУТ ВОДОЮ, Підкисленою
КИСЛОТОЮ оксалатовою (МЕТОД О.О. ВАСИЛЬЄВОЇ)
подрібнення біологічного
матеріалу, наполягання з водою,
підкисленою кислотою
оксалатній (2 рази) при рН = 2,0 ... 3,0
центрифугування
з об'єднанням водної
витяжки
екстракція хлороформом
3-4 рази
водна витяжка
проціджування
«Кисла» Хлороформна
витяжка
підлужування до рН = 9…10 25 %-ным NH4ОН
«КХВ»
НА ДОСЛІДЖЕННЯ
екстракція хлороформом 3-4 раза
«ЩХВ»
«Лужна »Хлороформний витяжка
www.themegallery.com
НА ДОСЛІДЖЕННЯ

42.

LOGO
Основні етапи ізолювання отрут етанолом,
підкисленим кислотою оксалатній (метод
Стаса-Отто)
Подрібнення біологічного матеріалу,
наполягання з етанолом, підкисленим
кислотою оксалатній (3 раза) рН = 2,0…3,0
Випарювання об'єднаних спиртових витяжок
Осадження білкових речовин етанолом
фільтрування витяжки
Повторне випарювання і осадження білкових речовин
Фільтрування та розведення витяжки водою (рН = 2…3)
Екстракція отрут хлороформом(3-4 раза)
«КХВ»
Подщелачивание водного розчину до рН = 9…10
Екстракція отрут хлороформом(3-4 раза)
www.themegallery.com
«ЩХВ»

43.

Основні етапи ізолювання барбітуратів водою, підкислено
LOGO
КИСЛОТОЮ оксалатовою (МЕТОД М.Д. ШВАЙКОВОЙ)
Подрібнення 100 г біологічного
матеріалу, наполягання з водою (200 мл),
підкисленою кислотою
оксалатній (2 години) при рН = 2,0
екстракція хлороформом
3 рази (по 20, 15 и 15 мл)
центрифугування
проціджування
Хлороформна витяжка(3 в 1, 50 мл)
піждужування 25 мл 0,1 н р-ром NaOH
Хлороформну витяжку промивають 1,5 мл води 2 рази, воду приєднують
до лужного водного вилучення
«Лужна »водна витяжка окислюється
до рН = 2, барбітурати екстрагується хлороформом
«КХВ»
www.themegallery.com
НА ИССЛЕДОВАНИЕ

44.

LOGO
Основні етапи ізолювання
Барбітурати за МЕТОДОМ П.Іванова
Екстракція біологічного матеріалу водним розчином натрію
гідроксиду
центрифугування
Звільнення центрифугата від білків (подкисляют кислотою
сульфатної до рН = 2, додають розчин натрій вольфрамату,
кип'ятять і центрифугують
проціджування центрифугата
Екстракція кислого центрифугата ефіром
Екстракція водою після подщелачивания
Екстракція ефіром після підкислення водного витягу до рН =www.themegallery.com
2

45.

LOGO
Основні етапи ізолювання
Барбітурати за МЕТОДОМ В.І. ПОПОВІЙ
Наполягання біологічного матеріалу з водою,
підкисленою до рН = 2.3 кислотою сульфатної (тричі)
Проціджування і центрифугування витяжки
Очищення центрифугата методом гель-хроматографії
(Сефадексе G-25)
Екстракційне концентрування за допомогою хлороформу
Випарювання хлороформно витяжки
www.themegallery.com

46.

LOGO
Основні етапи ізолювання
Барбітуратів методом Єви Вантаж-Харді
Подрібнення біологічного матеріалу, розтирання з HCl (NH4) 2SO4
наполягання з етанол: хлороформ 1:1
фільтрування витяжки
Разделение фильтрата и удаление воды
Отгонка спирта и хлороформа под вакуумом
Поділ фільтрату і видалення води
4-х кратна екстракція хлороформом
www.themegallery.com

47.

LOGO
Ізольованість АЛКАЛОЇДІВ
МЕТОДОМ В.П. КРАМАРЕНКО
ОБ'ЄКТИ
ДОСЛІДЖЕННЯ
підготовка об'єкта
до дослідження(50-100 г)
Очистка первичных вытяжек
(центрифугирован підготовка об'єкта
до дослідження ие)
центрифугування
Подщелачивание «кислої»
водної витяжки розчином
NaOH до рН = 8,5…9,0
об'єднання
хлороформних
витяжок
Мозок, печінка, нирки,
шлунок і кишечник з вмістом,
промивні води, легкі, сеча
2-3 - кратне наполягання
об'єкта з 0,2 М
розчином H2SO4при рН = 2,5
Очищення «висолюванням»
домішок безводних(NH4)2SO4
2-разова екстракція
діетиловим ефіром
екстрагування речовин
з «лужної» витяжки
хлороформом (3-4 рази)
ДОСЛІДЖЕННЯ
www.themegallery.com
АЛКАЛОЇДІВ

48.

LOGO
Основні етапи ізолювання Похіднихфенотіазину
МЕТОДОМ Е.М.САЛОМАТІНА
(МОДИФІКАЦІЯ МЕТОДУ СШЕДЗІНСКІ)
Наполягання біологічного матеріалу, підкисленого кислотою хлоридною,
з ацетонітрилом (тричі) при струшуванні
Фільтрування ацетонітріловой витяжки в водний розчин натрію сульфату
Екстракція отриманого розчину ефіром після підкислення розчином
кислоти хлорної до рН = 3
Екстракція водно-ацетонітрил ної витяжки ефіром після вилуговування
розчином натрій гідроксиду до рН = 13
Екстракція ефірної витяжки розчином 1 моль / л сульфатної кислоти
www.themegallery.com

49.

LOGO
Основні етапи ізолювання похідних
Фенотіазином МЕТОДОМ Е.М. Саломатін
(МОДИФІКАЦІЯ МЕТОДУ СТАСА-ОТТО)
Настоювання біологічного матеріалу зі спиртом,
підкисленим кислотою оксалатній(рН = 2…3)
Випарювання спиртових витяжок на водяній бані
Осадження домішок 96% спиртом
Упарювання спиртової витяжки
Розчинення осаду у воді при нагріванні та фільтруванні
Підкислення водного розчину до рН = 2…3
екстракція ефіром
Поідлужування водної витяжки до рН = 13
екстракція ефіром
Реекстракції 0,5% -ним розчином кислоти сульфатної
www.themegallery.com

50.

LOGO
Методи очищення від домішок
№
п/п
Група
ізольованих
отрут
методи ізолювання
Методи очищення від
домішок, що входять до
складу методу
1
2
3
4
1
«лікарські
отрути»
Водою, підкисленою
щавлевою кислотою
(метод А.А. Васильєвої)
проціджування;
центрифугування
2
«лікарські
отрути»
Спиртом, підкисленим
щавлевою кислотою
(метод Стаса-Отто)
Упарювання витяжки до
густоти сиропу;
Осадження білків спиртом;
фільтрування.
3
«лікарські
отрути»
Ацетоном (метод В.А.
Карташова)
центрифугування;
фільтрування;
Екстракція домішок
гексаном (pH 2 – 3)
www.themegallery.com

51.

LOGO
1
Методи очищення від домішок
2
3
4
4
алкалоїди
Водою, підкисленою
сірчаною кислотою (метод
В.Ф. Крамаренко)
проціджування;
центрифугування;
Висолювання домішок за
допомогою (NH4)2SO4;
Екстракція домішок ефіром (pH
2 – 2,5)
5
Похідні
барбітурової
кислоти
Водою, підлуженою
гідроксидом натрію (метод
Павлова)
Процеживание;
Центрифугирование;
Осаждение белков
вольфраматом натрия;
Экстракция примесей эфиром
(pH 2)
Водою, підкисленою
сірчаною кислотою (метод
В.І.Поповой)
проціджування;
центрифугування;
Гель-хроматографія
www.themegallery.com

52.

LOGO
1
6
Методи очищення від домішок
2
похідні
фенотіазину
3
4
Спиртом, підкисленим
щавлевою кислотою
(модифікація методу СтасаОтто по Е.М.Саломатіну)
Упарювання витяжки до
густоти сиропу;
Осадження білків
спиртом;
фільтрування;
Екстракція домішок
ефіром(pH 2 – 3)
Ацетонітрилом, підкисленим
хлористоводневою кислотою
(модифікація методу
Сшедзінского по
Е.М.Саломатіну)
фільтрування;
Висолювання домішок за
допомогою Na2SO4;
Екстракція домішок
ефіром (pH 2 – 3)
www.themegallery.com

53.

LOGO
Методи очищення від домішок
1
7
2
Похідні 1,4бензодіазепіну
3
4
Ізолювання метаболітів
похідних 1,4бенздіазеніна (метод
Б.Н.ІзотоваІзолірованіе
метаболітів похідних
1,4-бенздіазеніна (метод
Б.Н.Ізотова)
Деструкція тканин
органів при проведенні
кислотного гідролізу;
центрифугування;
фільтрування.
www.themegallery.com

54. ВИСНОВКИ

LOGO
ВИСНОВКИ
Розглянуто сучасні загальні та приватні
методи ізолювання речовин з
біологічного матеріалу
www.themegallery.com

55.

www.themegallery.com
LOGO