chemistrySimilar presentations:
Практическое занятие по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований. «Химия углеводов»
1. Практическое занятие по основам биохимии с методами клинико-биохимических исследований
Практическое занятиепо основам биохимии с
методами клиникобиохимических исследований
«ХИМИЯ УГЛЕВОДОВ»
2. ОБНАРУЖЕНИЕ УГЛЕВОДОВ
Качественные реакции на углеводы позволяютопределить их присутствие в различных
биологических
жидкостях
и
провести
дифференциацию моно-, ди- и полисахаридов.
В клинической лабораторной практике этими
реакциями пользуются для обнаружения в моче
лактозы, мальтозы и пентоз, что имеет
диагностическое значение.
3. Реакция №1 «Проба Биаля (обнаружение пентоз)»
Принцип:пентозы
с
орцином
и
треххлористым железом в кислой среде
образуют при нагревании соединение желтозеленого цвета.
4.
Реактивы :• 1) орцин (5-метилорцин);
• 2) концентрированная хлористоводородная кислота;
3) треххлористое железо FeCI3 x 6H2O, 10%
раствор;
• 4) реактив Биаля (1 г орцина растворяют в 500 мл
хлористоводородной кислоты и добавляют 1 мл
10% раствора треххлористого железа);
• 5) моча;
5. Берут пробирку, подписывают и наливают 5 мл реактива Биаля
6. Добавляют 1 мл мочи
7. Пробирку нагревают до кипения
8. При положительной реакции появляется желто-зеленое окрашивание. В моче здорового человека пентозы не обнаруживаются
(отрицательный результат)9. Реакция №2 «Проба Велька (обнаружение лактозы и мальтозы)»
Принцип: лактоза и мальтоза с аммиаком вщелочной среде образуют при нагревании
окрашенные соединения.
10.
Реактивы :• 1) аммиак водный, концентрированный;
• 2) гидроокись калия, 20% раствор;
• 3) 1% раствор лактозы;
• 4) 1% раствор мальтозы;
• 5) моча.
11. Берут три пробирки и номеруют
12. В 1-ю пробирку добавляют 5 мл мочи
13. Во 2-ю пробирку добавляют 5 мл раствора лактозы (1% раствор)
14. В 3-ю пробирку добавляют 5 мл раствора мальтозы (1% раствор)
15. Во все три пробирки прибавляют 2,5 мл раствора аммиака
16. Затем во все 3 пробирки добавляем 200 мкл (0,2 мл) раствора КОН (20% раствор)
17. Пробирки нагревают на водяной бани 30 минут при 600С
18. При наличие лактозы появляется коричневая окраска (пробирка №2)
19. При наличие мальтозы появляется красная окраска (пробирка №3)
20. В моче здорового человека мальтоза и лактоза не обнаруживается (пробирка №1)
21. Реакция №3 «Проба Селиванова (обнаружение фруктозы»
Принцип: принагревании фруктозы с
резорцином в кислой среде
образуются соединения,
окрашенные в красный цвет.
22.
Реактивы :• 1) HCl, 1 моль/л;
• 2) резорцин (5 г в 1 моль/л раствора HCl);
• 3) моча;
• 4) 1% раствор фруктозы.
23. Берут 2 пробирки, номеруют
24. В 1-ю пробирку вносят 2 мл мочи
25. Во 2-ю пробирку вносят 2 мл раствора фруктозы (1% раствор)
26. После чего в каждую пробирку приливают по 1 мл раствора резорцина
27. Пробирки нагревают до закипания
28. При положительной пробе развивается интенсивное красное окрашивание (пробирка №2)
29. В норме окраска не появляется (пробирка №1)
30.
Оценку пробы проводят в момент закипания, таккак при длительном кипячении окраска может
появиться при наличии глюкозы (при
небольшой концентрации глюкозы образуется
красно-бурый осадок). Пищевая нагрузка медом
и фруктами может дать положительную пробу.
31. Реакция №4 «Обнаружение крахмала»
Принцип: крахмалс йодом образует
окрашенное соединение синего
цвета.
32.
Реактивы :• 1) 1% раствор крахмала;
• 2) йод, 1% раствор в 2% растворе йодида калия.
33. Берут пробирку и подписывают её
34. Добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)
35. Затем добавляют 1-2 капли раствора йода
36. При положительной реакции на йод появляется ярко-синее окрашивание
37. СВОЙСТВА УГЛЕВОДОВ
Моносахариды и некоторыедисахариды, имеющие свободную
карбонильную группу, обладают
способностью восстанавливать в щелочной
среде металлы из окислов в закисные формы
или свободное состояние. Этим свойством
пользуются в практике для обнаружения
глюкозы в крови и моче.
38. Реакция №5 «Реакция Троммера»
Принцип: глюкоза в щелочной средевосстанавливает окись меди в закись, при этом сама
окисляется до глюконовой кислоты.
39.
Реактивы :• 1) глюкоза, 1% раствор;
• 2) мальтоза, 1% раствор;
• 3) сахароза, 1% раствор;
• 4) крахмал, 1% раствор;
• 5) гидроокись натрия, 10% раствор;
• 6) сульфат меди, 5% раствор.
40. Берут 4 пробирки и номеруют
41. В 1-ю пробирку добавляют 10 капель раствора глюкозы (1% раствор)
42. Во 2-ю пробирку добавляют 10 капель раствора мальтозы (1% раствор)
43. В 3ю пробирку добавляют 10 капель раствора сахарозы (1% раствор)
44. В 4-ю пробирку добавляют 10 капель раствора крахмала (1% раствор)
45. После чего в каждую пробирку добавляют по 10 капель гидроокиси натрия (NaOH 10% раствор)
46. Затем в каждую пробирку добавляют по 2 капли сульфата меди (CuSO4 5% раствор)
47. Каждую пробирку осторожно нагревают до кипения
48. В пробирках с глюкозой (пробирка №1) и мальтозой (пробирка№2), где проба положительная выпадает осадок кирпично-красного цвета
(закись меди)49. В пробирках с сахарозой (пробирка №3) и крахмалом (пробирка№4) реакция отрицательная (изменения цвета не происходит)
50. Реакция №6 «Реакция Ниландера»
Принцип: Глюкоза, окисляясь, восстанавливаетвисмут до гидрата закиси или свободного состояния.
51.
Реактивы :• 1) глюкоза, 1% раствор;
• 2) мальтоза, 1% раствор;
• 3) сахароза, 1% раствор;
• 4) крахмал, 1% раствор;
• 5) реактив Ниландера (в фарфоровой ступке
смешивают 2 г нитрата висмута и 4 г сигнетовой
соли. При тщательном растирании добавляют
небольшими пропорциями 10 мл 10% раствора
гидроокиси натрия. Фильтруют, хранят в склянке
тёмного стекла на холоде).