Similar presentations:
Эволюционная иммунология. Защитные системы прокариот
1. Эволюционная иммунология лекция 2 «Защитные системы прокариот»
Е.С. Шилов19 февраля 2018 г.
2. Зачем вообще изучать защитные системы микробов?
«We observed a significant decrease in the ability of the cas9 mutant toadhere to, invade and replicate in human epithelial cells, leading to an
overall defect in survival, indicating that Cas9 plays an important role in
N. meningitidis pathogenesis. Additionally, a recent study identified
Campylobacter jejuni Cas9 as critical for interactions with host cells23.
Bioinformatic analysis predicted that N. meningitidis, C. Jejuni and other
pathogens may encode a scaRNA, which is critical for Cas9 targeting of
endogenous mRNA. Together, these results clearly show that Cas9
controls virulence traits of several bacteria.»
3. Фаги регулируют микробиоту кишечника
4. Фаги как маркер (или причина) дисбиоза
5.
Система CRISPR (clustered regularly interspaced shortpalindromic repeats) – Cas (Cass)
6.
Система CRISPR-Cas защищаетбактерий от бактериофагов
2. Со всего, что находится в CRISPR,
синтезируются специальные РНК,
постоянно
проверяющие,
не
комплементарны ли они какойнибудь ДНК, попавшей в бактерию.
1. ДНК бактериофага нарезается
специальными Cas-белками бактерии на маленькие фрагменты.
Они добавляются в определенный участок генома бактерии,
который называется CRISPR.
Если бактерия не погибает, то
она таким образом «запоминает»
часть генома вируса.
3. Если совпадение найдено, значит в
бактерию попала ДНК такого же вируса,
как и раньше. Его «вспоминают» и
уничтожают другие Cas-белки.
7. Характеристики системы CRISPR
• Присуща практически всем археям и половине бактерий• CRISPR-кассета состоит из одинаковых повторов и
различающихся спейсеров, причём повторы не являются
консервативными, однако часто начинаются на 5`-GTTTC и
заканчиваются на GAAAC-3`
• По соседству с CRISPR-кассетой находится оперон casгенов
• Среди продуктов cas-генов выделяются 6 основных и
множество вспомогательных белков (RAMP)
• В одном геноме может быть до 18 CRISPR-кассет
• В одной CRISPR-кассете может быть до 375 спейсеров
• Повторы варьируют в размере в диапазоне 23 – 47 п.н.,
спейсеры – 21 – 72 п.н.
8.
Предполагалось, что CRISPR-Cas действует посхожему с РНК-интерференцией механизму…
… и она действительно может быть направлена против РНК, однако
основной ее мишенью является двунитевая ДНК
9. Принципиальная структура CRISPR
10. Открытие CRISPR
Yoshizumi IshinoIshino, Y., et al. (1987). Nucleotide sequence of
the iap gene, responsible for alkaline phosphatase
isozyme conversion in Escherichia coli, and
identification of the gene product. J. Bacteriol.
169, 5429–5433.
Francisco Mojica
Mojica, F.J.M et al. (1993). Transcription at
different salinities of Haloferax mediterranei
sequences adjacent to partially modified PstI
sites. Mol. Microbiol. 9, 613–621.
11. Принцип сполиготипирования
12. История открытия функции CRISPR
DANISCOРодольф
Баррангу
Филипп
Хорват
13. Разнообразие спейсеров и приобретение новых
РАМ – нуклеотидный мотив,который позволяет использовать часть чужеродной ДНК в
качестве пригодной для
создания нового спейсера
14. Примеры некоторых proto-spacer adjacent motifs (РАМ)
15. Cas-белки и их функции
16. Классификация систем на основе CRISPR
Евгений КунинКира Макарова
17. Классификация вариантов CISPR-Cas
18. Новая классификация CISPR-Cas (2015 г.)
19.
20. Cascade Csm
21. Процессинг РНК в системе CRISPR I типа
22. Процессинг РНК в системе CRISPR II типа
23.
Система II типаСистема I типа
24. Почему нет атаки на саму CRISPR-кассету?
Критическим являетсястрогое Уотсон-Криковское
связывание -2 – -4
нуклеотида к 5`-концу от
спейсера. Если оно есть,
значит «ДНК-мишень» - своя,
и расщеплять её нельзя
25. Атака ДНК-мишени возможна и в случае неполного соответствия спейсера и протоспейсера.
Критическим является связывание 5`-конца спейсера26. Распространенность CRISPR-Cas
27. Эволюция систем CRISPR-Cas
28. Применение Cas9 для редактирования генома
Jennifer DoudnaEmmanuelle
Charpentier
Feng Zhang
29. Редактирование геномов эукариот при помощи CRISPR-Cas9
30. Химерная РНК, совмещающая элементы crРНК и tracrРНК
Martin Jinek31. Белок Cas9 и химерная tracr-crРНК способны эффективно редактировать любые геномы
32. CRISPR – история открытия (резюме)
33.
34. Где уже применили Cas9?
Cas92185
1529
739
329
1
1
1
3
3
85
35.
36. «Ножницы для генома» не гарантируют его адекватное сшивание после разрезания
37. Трансгенные мыши, получаемые с использованием Cas9
Masahito Ikawa38. MCR – mutagenic chain reaction
39. Этическая сторона вопроса
40. Cpf1 – альтернатива Cas9
ОсобенностьCas9
Cpf1
Гидовые РНК
Нужны 2 РНК (crRNA +
tracrRNA) или 1 gRNA
Одна crRNA
Разрез имеет…
Тупые концы
Липкие концы
Сайт разрезание
До сайта узнавания
После сайта узнавания
РАМ
G-богатый PAM
T-богатый PAM
Лучше работает в…
Быстро делящихся клетках
Не делящихся клетках
41. Анти-CRISPR системы
42. Механизмы работ анти-CRISPR систем
43. CRISPR-Cas может быть направлена и против фагов с РНК-геномом (VI тип)
Leptotrichiashahii
44. Успешная кооперация защитных систем
45. Отсутствие кооперации защитных систем
46. Судьба древних прокариотических защитных систем и происхождение эукариот
47.
• Следующая лекция 26 февраля – обиммунитете растений, грибов и протистов