Программы SHOT (Снижение риска гемотрансфузий) 1996 - 2003

1. Проблемы определения АВО… Неужели это актуально?

1
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY
Проблемы
определения АВО…
Неужели это
актуально?
Galvani Anna,
Домашин Артем,
Колупаев Всеволод,
Попова Наталья,

2. С чего все началось… 1996 - 2003

Автоматизация
Информационные системы
Возможность
прослеживаемости и
сравнения результатов –
расчет рисков
гемотрансфузии
Постоянно действующая
Программа SHOT (Снижение
риска
гемотрансфузий)
Bio-Rad
Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

3. Программы SHOT (Снижение риска гемотрансфузий) 1996 - 2003

(Снижение риска
гемотрансфузий) 1996 2003
2003 г. Служба крови
Великобритании.
Распределение ошибок на
этапах переливания крови
(n=488) (Milkins C., 2004)
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

4. При этом…

Структура лабораторных
ошибок в ЛПУ
(Milkins C., 2004)
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY
Ошибки
АВО – 23%

5. Снижение частоты ошибок АВО (SHOT Report, 2014)

Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

6.

Ошибки при определении
группы крови, Rh
принадлежности и
проведении проб на
индивидуальную
совместимость возникают
при нарушении техники
выполнения исследования
Приказ Минздрава РФ № 363 от 25 ноября
или в случаях
2002 г. «Об утверждении Инструкции по
трудноопределимых групп
применению компонентов крови». Раздел 5
крови…
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

7. Биологические факторы неопределенного результата АВО

факторы
неопределенного
Приказ Минздрава РФ № 363 от 25 ноября 2002 г. «Об утверждении
результата АВО
Инструкции по применению компонентов крови»
Раздел 5.2. «Трудноопределяемые группы крови"
Подгруппы антигена А
Неспецифическая
агглютинация эритроцитов.
Холодовые антитела
Полиагглютинабельность
сывороток
Кровяные химеры
А также …
• Приобретенный антиген
«…Если результаты остаются неясными,
• Утеря
антигенов
образец
крови
направляют на исследование
в специализированную лабораторию…»
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

8. Неопределенные результаты АВО

Противоречие между
результатами прямой и
перекрестной реакций.
Низкая интенсивность
реакции
Наличие смешанной
агглютинационной картины
(двойная популяция).
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

9. Преимущества гелевой технологии для верификации АВО

ID-карта Diaclon ABO/D + Reverse grouping
Прямая реакция
Стнадартные эритроциты
ID-DiaCell A1,B
Обратная реакция
Высокая разрешающая
способность –
чувствительность при
выявлении:
Слабые реакции
Двойная популяция
Одни и те же простые
стандартные
процедуры для
Bio-Rad
Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

10.

ВЕРИФИКАЦИЯ
НЕОПРЕДЕЛЕННЫХ
РЕЗУЛЬТАТОВ ГРУППОВОГО
ТИПИРОВАНИЯ С ПОМОЩЬЮ
ГЕЛЕВОЙ ТЕХНОЛОГИИ
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

11. Пример 1

Чем Вам не нравится эта
картина?
• Какая дополнительная
информация необходима?
• Какие дополнительные
исследования нужно
выполнить?
Bio-Rad
Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

12. Пример 1

Результат прямой реакции – А,
обратной – АВ.
Действие: выяснить пол,
возраст, диагноз,
трансфузиологическая
история.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

13. Пример 1. Разрешение противоречий

Пациент – новорожденный,
родившийся 2 дня назад. В
этом случае это –
нормальный результат.
Результат, полученный в
перекрестной реакции до 4-х
месячного возраста не
имеет смысла. У ребенка –
группа А.
Для верификации
необходимо использовать
карту с реагентом анти-АВ
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

14. Пример 2: не все так просто…

Мужчина, 55 лет.
Гемотрансфузий не было.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

15.

Результат прямой реакции – А,
обратной – АВ (как в Примере 1).
Действие: Усилить
перекрестную реакцию в
нейтральном геле на холоду
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

16. Пример 2: верификация слабых агглютининов

нейтрал
ьный
гель
Инкубировать 30 мин. при 4 0С.
• Агглютинины А и В – это, в
основном, IgM. IgM антитела
лучше реагируют при низких
температурах.
• Обязательно включить в
тестирование эритроциты гр.
О
и автоконтроль (исключить
Bio-Rad
Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

17.

Автоконтроль – это когда в
эритроцитарную суспензию
пациента добавляют
собственные эритроциты
пациента.
При 4 0С будут проявляться
неспецифические антитела,
которые в некоторых случаях
способны реагировать даже с
собственными эритроцитами.
Результат – с очень слабыми
изоагглютининами. Возможно – это
результат иммунодефицита.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

18. Пример 3

Мужчина, 34 лет.
Гемотрансфузий не было.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

19.

Результат прямой реакции –
АВ, перекрестной - О (НО
слабая реакция анти-А
агглютининов). Действие:
исключить неспецифическую
активность антител,
повторив перекрестную
реакцию со стандартными
эритроцитами А1, В, О при
комнатной температуре (20 0С) и
при 37°C
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

20. Пример 3: неожиданные антитела

Объяснение: группа АВ,
пациент имеет анти-Н
антитела, реагирующие при
комнатной температуре.
Количество эпитопов антигена Н
на стандартных эритроцитах:
О>B>A>AB
При комнатной температуре
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY
положительная
реакция со всеми

21. Пример 4: Неожиданные антитела

Женщина. 5 беременность.
У 3-го и 4-го ребенка желтуха
новорожденных.
В предыдущих тестах женщина
определялась как A Rh(D)
положительная.
Bio-Rad Laboratories
Наши действия?
IMMUNOHEMATOLOGY

22. Пример 4

Лишние анти-А агглютинины.
Действие: исключить
неспецифическую
активность антител,
повторив перекрестную
реакцию со стандартными
эритроцитами А1, В, О при
комнатной температуре (20 0С) и
при 37°C
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

23. Пример 4: Аллоантитела !!

Реакции становятся
сильнее при 37◦С.
• Осложнения 3-4
беременностей
Наличие аллоантител(?),
реагирующих при 20◦С и при 37◦С.
Аллоантитела нуждаются в
идентификации
(приказ № 183н)
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

24. Пример 4: необходим подбор донора

У женщины не только анти-D, но
и анти-с антитела. Эти
антитела достаточно
сильные, они могут
реагировать при комнатной
температуре.
Фенотип донора должен быть
CCD.ee. Кровь донора должна
быть совметима с кровью
Bio-Rad
Laboratories
реципиента
в НАГТ при 37°C.
IMMUNOHEMATOLOGY

25.

Если бы мы не провели
расследование, то
переливали бы кровь группы
О, но она должна получить сотрицательную кровь!! Если
плод с-положительный –
высокий риск патологии.
Беременность должна
проходить под клиническим
наблюдением.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

26. Пример 5 : Неожиданные антитела

Пациент – женщина 20 лет,
первая беременность.
Переливаний крови не было
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

27.

Как всегда наше действие:
повторить обратную реакцию,
используя
карту NaCl/Enzyme (нейтральный
гель) при комнатной Т и при
37С. Важно включить
стандартные эритроциты О и
автоконтроль в постановку,
инкубировать 15 мин.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

28. Пример 5: холодовые аутоантитела

При 37°C
Только реакция с эритроцитами В
(остальное – холодовая
активность)
При комн. температуре:
Положительный автоконтроль –
аутоантитела
• прореагировали
все эритроциты
Bio-Rad
Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY
– анти-I антитела (?)

29.

Антиген I присутствует на
всех эритроцитах взрослых
людей, включая стандартные
эритроциты А1 – В – О
(донорские). Анти-I - основные
холодовые антитела
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

30. Пример 5 : верификация анти-I антител

20
°C
Эритро
циты
новоро
жденного
Проверка: отрицательная
реакция с эритроцитами
новорожденного или
пуповинной крови
Анти-I не имеют клинического
значения, но, как мы видели выше,
необходимо их
дифференцировать
от
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

31. Пример 6 : Неожиданные антитела

Пациент – девушка 16 лет, не
была реципиентом, не было
беременности.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

32.

Результат выглядит также
как в 2-х предыдущих
примерах. Результат прямой
реакции – АВ, обратной – В.
Как всегда наше действие:
повторить обратную реакцию,
используя карту NaCl/Enzyme
(нейтральный гель) при
комнатной Т и при 37С. Важно
включить стандартные
эритроциты О и автоконтроль
в постановку, инкубировать 15
мин.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

33. Пример 5: подозрение на подгруппу

При комн. температуре:
При 37°C
Только реакция с эритроцитами
А1
Антительная активность
исчезает
Подозрение на подгруппу А2
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

34.

1)
2)
3)
Необходимы
дополнительные
исследования: Повторить
обратную реакцию при Ткомн,
используя А2 ст. эритроциты.
Протестировать
эритроциты пациента с
анти-А1 и анти-Н
Иногда идентификация
антител на Nacl/Enz картах при
комн. температуре
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

35. Пример 5: верификация подгруппы

Обратная реакция в
нейтральном геле, при комн.
температуре, с
использованием А2 ст.
эритроцитов положительная.
2. Нет реакции с анти-А1
Bio-Rad Laboratories
3. Нет реакции с анти-Н
1.
IMMUNOHEMATOLOGY

36.

Это группа А2 (На картах антиА1 и анти-Н внесены
стандартные эритроциты А1 и
А2 в качестве контролей )
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

37.

ЕЩЕ РАЗ О ЗНАЧЕНИИ
ИНФОРМАЦИИ О ПАЦИЕНТЕ…
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

38. Пример 6. «Аллергия на холод»

Это – пациент с нарушениями
циркуляции. Он жалуется в
зимний период на высокую
утомляемость и иногда
отмечает красный цвет мочи,
также считает, что летом,
когда погода теплее,
чувствует себя лучше.
Переливаний крови не было.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

39.

При анализе крови выявлено:
Перекрестная реакция как
кажется определяет группу О,
результаты прямой реакции
недействительны, так как в
контрольной пробирке (ctl)
положительный результат.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

40. Пример 6. Положительный контроль

Положительный контроль промыть эритроциты как
минимум три раза
физиологическим
раствором (NaCl). Повторили
тест – результат не
изменился
• Промыть клетки снова,
используя
физиологический раствор,
прогретый до 37°C. Все
реагенты также необходимо
выдержать при 37°C в течение,
как минимум, 30 минут.
Bio-Rad Laboratories
• Выполнить стандартные
IMMUNOHEMATOLOGY

41. Пример 6: после промывки

Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

42.

Контроль теперь
отрицательный: результаты
прямой реакции можно
интерпретировать как
группу О. Результаты
перекрестной реакции при
20°C демонстрируют, что
плазма реагирует с
эритроцитами группы О и
клетками самого пациента в
автоконтроле; при 37°C
перекрестные реакции ясно
демонстрируют группу О.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

43. Холодовые антитела

Активные при низкой
температуре IgM антитела,
начинают присоединяться к
мембранам эритроцитов при
переохлаждении.
• Когда температура крови
снижается приблизительно
до 34 °C (при низких
температурах в области
пальцев на руках и ногах,
ушей и т.д), холодовые IgM
антитела активны.
• Когда кровь прогревается
обратно до 37 °С, антитела не
Bio-Rad Laboratories
диссоциируют из антиген
IMMUNOHEMATOLOGY

44. Пример 6: активность комплемента

ПАГТ у этого пациента будет
демонстрировать
положительный результат,
связанный с активностью
комплимента в норме .
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

45. Пример 7 : утрата антигена

Утрачен А антиген при
лейкемии
Некоторые пациенты с лейкемией
могут не экспрессировать антиегны
АВО. Иногда это происходит до того
как клинический диагноз лейкемии
бул поставлен.
• Также это явление наблюдается у
очень пожилых людей без диагноза
лейкемия.
• Некоторые
люди имеют такой слабый
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY
вариант антигена А, что он не

46. Пример 8: Химера

Мужчина, 24 года. Дорожнотранспортное происшествие
за два дня до анализа.
Пациенту сразу была проведена
трансфузия 3 доз ОRh(D)- крови,
предварительно исследованной на
совместимость. Группа крови
пациента ARh(D)+
Гелевая технология позволяет
наблюдать
двойную популяцию, если
Bio-Rad
Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY
минорная популяция составляет

47.

Причины появления химеры:
Мы можем также наблюдать
двойнную популяцию у
пациентов с лейкемией, когда
часть эритроцитов теряет
свои антигены.
Группа крови А3, когда
антиген экспрессируется не
на всех эритроцитах
Фето-фетальная и фетоматеринская трансфузия
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

48. Рукводство, созданное на основе расчета риска

Guidelines for pre-transfusion
compatibility procedures in
blood transfusion laboratories
British Committee for Standards
in Haematology, 2014
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

49. Действия при верификации АВО (1)

Выполнить проверку на
наличие ошибок записи /
технических ошибок,
контроля качества
реагентов
Повторить тест.
Несоответствие результатов
может быть следствием ошибки
дозирования образцов и
реагентов.
Слабая реакция должна
проверяться в первую очередь,
так как она, как правило,
сомнительна.
Проверить возраст
пациента.
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY

50. Действия при верификации АВО (2)

Определить какая из реакций
явилась причиной
несоответствия прямая или
перекрестная (чаще). Все
антительные реакции
потенциально влияют на
результат пробы на
совместимость
Ложно отрицательные результаты
перекрестной реакции проверить в
нейтральном геле с использованием
стандартных эритроцитов и
автоконтроля при комнатной
температуре и при 4 °С для усиления
активности агглютининов.
При появлении неожиданных антител
проверить результаты антительного
теста в нейтральном геле с
Bio-Radиспользованием
Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY
стандартных
эритроцитов при комнатной температуре

51.

Благодарю за
внимание !!!
Bio-Rad Laboratories
IMMUNOHEMATOLOGY