Энтеробактерии. Морфология

1. ЭНТЕРОБАКТЕРИИ

2.

• Семейство: Enterobacteriaceae
• Трибы:
Escherichia
Erwinia
Jersinia
Klebsiella
Proteus
• В семействе насчитывается более 30 родов и более 100 видов.
• Морфология.
Все представители семейства – грамотрицательные палочки, неспорообразующие,
подвижные (перетрихи) или неподвижные; некоторые виды имеют капсулу.
• Культуральные свойства.
Не требовательны к условиям культивирования. Хорошо растут на обычных
питательных средах. отличаются . Колоний бактерий, относящихся к разным родам,
отличаются по цвету при росте на дифференциально-диагностических средах:
Эндо, Левина, Плоскирева.
• Биохимические свойства.
Факультативные анаэробы, хемоорганогетеротрофы, оксидазоотрицательные, реакция
Фогес-Проскауэра отрицательная. Сбраживают сахара по пути гликолиза.
Обладают протеолитическими ферментами, восстанавливают нитраты до нитритов.
Ферментативная активность снижается по мере возрастания патогенных свойств,
что лежит в основе идентификации энтеробактерий. Биохимическая активность
используется для идентификации всех бактерий
• .

3. Шигеллы (лат. shigella) — род грамотрицательных, факультативно анаэробных бактерий, являющихся возбудителями дизентерии. 

Шигеллы (лат. shigella) — род грамотрицательных,
факультативно анаэробных бактерий, являющихся
возбудителями дизентерии.
Классификация шигелл
Род шигеллы (лат. Shigella) входит в
семейство энтеробактерии(лат. Enterobacteriaceae),
порядок энтеробактерии (лат.Enterobacteriales)
Шигеллы названы в честь японского врача и микробиолога
Киёси Шига (или Сига; 1871–1951), выделившего в 1897 году в
чистом виде бактерии, относящиеся сегодня к виду
Shigella dysenteriae.

4.

• Антигенные свойства.
• Шигеллы имеют 2 основных антигена: О- и К-.
• Соматический О-антиген – групповой,
липополисахарид клеточной стенки, термостабильный.
• Поверхностный К-антиген, типовой, термолабильный.
• По антигенной структуре шигеллы делятся на группы,
т.е. - на серовары, а серовары – на подсеровары.
Серовары обозначаются арабскими цифрами, а
подсеровары – арабскими цифрами с добавлением
строчных букв латинского алфавита.
• В соответствии со структурой О-антигена и с
некоторыми биохимическими особенностями
известных 39 серотипов шигеллы, согласно
Международной классификации, они разделены на 4
группы (А,В,С,Д).

5.

В род шигеллы входит 4 вида, соответствующие четырем
серогруппам:
шигелла дизентерии (Shigella dysenteriae), серогруппа А,
включает 12 серотипов
шигелла Флекснера (Shigella flexneri), серогруппа B — 6
серотипов
шигелла Бойда (лат. Shigella boydii), серогруппа C — 23
серотипа
шигелла Зонне (Shigella sonnei), серогруппа D — 1 серотип

6. Этиология

Шигеллы
имеют
вид
грамотрицательных
палочек
без жгутиков, с закругленными
концами размером 2–3 на 0,5–
0,7 мкм. Не образуют спор и
капсул, неподвижные.
Это
аэробы
или
факультативные
анаэробы;
оптимальные
условия
культивирования
—
температура 37°С.

7.

• Шигеллы. Морфология.
Шигеллы плохоустойчивы к воздействию физических, химических и
биологических факторов окружающей среды. В воде, почве, пищевых
продуктах, на предметах, посуде, овощах, фруктах шигеллы живут в
течение 5–14 дней.
При температуре 60 °С шигеллы гибнут через 10–20 минут, при 100 °С —
мгновенно. Прямой солнечный свет убивают шигелл в течение 30 минут.
При отсутствии солнечного света, повышенной влажности и умеренной
температуре шигеллы сохраняют жизнеспособность в почве до 3 месяцев.
В желудочном соке шигеллы могут выживать лишь несколько минут.
В пробах кала шигеллы погибают от действия кислой реакции среды и
бактерий-антагонистов через 6–10 часов. В высушенном или
замороженном кале шигеллы жизнеспособны в течение нескольких
месяцев.
Наиболее устойчивым к внешним воздействиям является вид шигелл
shigella sonnei, наименее устойчивым — shigella dysenteriae.

8.

9. Факторы патогенности шигелл

• Важнейшее биологическое свойство шигелл, обусловливающее их
патогенность, - способность внедряться в эпителиальные клетки,
размножаться в них и вызывать их гибель.
• Этот эффект может быть обнаружен с помощью
кератоконъюнктивальной пробы (введение под нижнее веко
морской свинки одной петли культуры шигелл (2-3 млрд.
бактерий) вызывает развитие серозно-гнойного
кератоконъюнктивита)
• Основные факторы патогенности шигелл можно разбить на три
группы:
• факторы, определяющие взаимодействие с эпителием
слизистой оболочки;
• факторы, обеспечивающие устойчивость к гуморальным и
клеточным механизмам защиты макроорганизма и способность
шигелл размножаться в его клетках;
• способность продуцировать токсины и токсические продукты,
которые обусловливают развитие собственно патологического
процесса.

10.

• Факторы патогенности.
• 1. Токсины:
• - эндотоксин – липополисахаридопротеиновый комплекс,
который действует на нервную и сосудистую системы
организма человека;
• - экзотоксин (токсин Шига) обладает цитотоксическим
(нарушает синтез белка на рибосомах); энтеротоксическим;
нейротоксическим действием.
• 2. Ферменты агрессии: гиалуронидаза; фибринолизин;
муциназа; плазмокоагулаза; нейраминидаза.
• 3. Структурные и биохимические компоненты клеток:
микрокапсула; пили; белки наружной мембраны, способные
связываться с рецепторами эпителиальных клеток и побуждать
их к «индуцированному эндоцитозу».
• Гены, кодирующие вирулентность, располагаются в
хромосомах и в плазмидах: гены, кодирующие свойство
прикрепляться к клеткам эпителия; гены, обеспечивающие
поражение клеточных мембран. В том случае, когда гены,
определяющие способность проникать внутрь клеток,
находятся на плазмидах, они могут легко передаваться ЭПКП.

11.

Дизентерия – антропонозная инфекция:
источником являются больные люди и
носители.
Механизм передачи инфекций – фекальнооральный.
Пути передачи могут быть различные – при
дизентерии Зонне преобладает пищевой
путь, при дизентерии Флекснера – водный,
для дизентерии Григорьева-Шига
характерен контактно-бытовой путь.

12.

Болеют люди всех возрастов, но наиболее
подвержены дизентерии дети от 1 года до 3
лет. Количество больных увеличивается в
июле – сентябре.

13. Шигеллы — возбудители дизентерии

• Все виды шигелл могут являться возбудителями
инфекционного
заболевания
—
бактериальной
дизентерии
(называемой
также
шигеллезом),
протекающего
с
явлениями
интоксикации
и
преимущественным
поражением
дистального
отдела толстой кишки. Наиболее благоприятные условия
для
развития
шигелл
—
в
поперечной
ободочной
и
нисходящей
ободочной
кишках.
Заражение
происходит
фекально-оральным
или
контактно-бытовым путем, через воду и пищевые
продукты. Переносчиками шигеллеза могут быть мухи и
тараканы. В зависимости от возраста и физического
состояния человека даже десяти бактериальных клеток
может
быть
достаточно
для
инфицирования.

14.

15. Клиническая картина

Инкубационный период длится от 1 до 5
дней. Заболевание начинается остро с
повышения температуры тела до 38-39ºС,
появляются боль в животе, понос. В стуле
обнаруживают примесь крови, слизь

16.

Шигеллез характеризуется постоянными тупыми болями по
всему животу, которые позже становятся острыми
схваткообразными, локализованными в нижней части живота,
чаще слева или над лобком.
Во время акта дефекации тянущие боли в области прямой
кишки, отдающие в крестец.
Первоначально частые дефекации — до 10–25 в сутки, в
основном из слизи с включениями крови, а в более поздний
период и примеси гноя. Часты ложные позывы на дефекацию
— тенезмы.
Симптомы могут включать диарею, лихорадку, тошноту, рвоту,
скопление газов и запор. Стул может содержать кровь, слизь или гной.
Симптомы могут проявиться через неделю после заражения, но чаще
всего начинаются через 2—4 дня после потребления зараженной
пищи. Обычно это продолжается несколько дней, но может и
затянуться на недели. Последствием инфицирования шигеллами
может быть синдром Рейтера

17. Микробиологическая диагностика

В
качестве исследуемого материала берут
испражнения больного.
Основой
диагностики
является
бактериологический метод, позволяющий
идентифицировать возбудителя, определить
его чувствительность к антибиотикам.
При затяжном течении дизентерии можно
использовать
как
вспомогательный
серологический метод, заключающийся в
постановке РА, РНГА (по нарастанию титра
антител при повторной постановке реакции
можно подтвердить диагноз).

18. Культивирование

Нетребовательны к питательным средам
На плотных средах образуют мелкие прозрачные колонии, в
жидких средах – диффузное помутнение.
В качестве среды обогащения для культивирования шигелл
чаще всего используют селенитовый бульон

19.

• Шигеллы - факультативные анаэробы,
температурный оптимум для роста 37 °С, при
температуре выше 45 °С не растут, оптимальная рН
среды 6,7-7,2.
• Колонии на плотных средах - круглые, выпуклые,
полупрозрачные, в случае диссоциации образуются
шероховатые колонии R-формы.( среда Плоскирева
для получения изолированных колоний)
• Рост на МПБ в виде равномерного помутнения,
шероховатые формы образуют осадок.
• Свежевыделенные культуры шигелл Зонне обычно
образуют колонии двух типов: мелкие круглые
выпуклые

20.

Шигеллы в микроскопическом препарате стула больного
бактериальной дизентерией

21. Ферментативная активность

Шигеллы обладают меньшей ферментативной
активностью, чем другие энтеробактерий.
Углеводы они сбраживают с образованием
кислоты.
Важным
признаком,
позволяющим
дифференцировать
шигеллы,
является
их
отношение к манниту: S. dysenteriae не
ферментируют маннит, представители групп В, С,
D маннитпозитивны.
Наиболее биохимически активны S. sonnei, которые
медленно (в течение 2 сут.) могут сбраживать
лактозу.

22.

.
Подгруппа
А
Sh. dysenteriae
В
Sh. flexneri
C
Sh. boydii
D
Sh. sonnei
Ферментация углеводов
Образование
индола
Декарбоксил
ирование
орнитина
лактозы
глюкозы
маннита
дульцита
сахарозы
-
+
-
-
-
-
-
-
+
+
+
-
-
-
+
+
+
+
-
+
+
(медленно)
+
+
-
+
(медленно)
Условные обозначения: (+) - ферментация углеводов, образование
индола, каталазы;
(-) - отсутствие ферментации углеводов, образования индола, орнитина;
( + ) - слабое образование индола, орнитина, ферментация углеводов

23.

• не образуют H2S,
• не имеют уреазы;
• реакция Фогеса-Проскауэра
отрицательная;
• как правило, не ферментируют лактозу (за
исключением шигелл Зонне), адонит,
салицин и инозит, не разжижают желатин,
• обычно образуют каталазу, не имеют
лизин-декарбоксилазы и
фенилаланиндезаминазы.

24. Лабораторная диагностика дизентерии

1. Посев на чашках Петри: слева - среда Плоскирева, справа - среда
с эозином и метиленовым синим (в проходящем свете)2 и 3.

25.

• Дифференциальные цветные среды: 4-6-скошенный
столбик из сухой питательной среды (4-расщепление
мочевины, 5-расщепление лактозы, 6-расщепление
глюкозы); 7-9 - среда Рассела с индикатором Андраде (7расщепление глюкозы с образованием газа, 9 расщепление лактозы).

26.

• Серологическая идентификаций
выделенных культур производится с
помощью реакции агглютинации на стекле
сначала со смесью сывороток против видов
Флекснера и Зонне, которые часто
встречаются.

27.

У дизентерийных больных иногда выделяются штаммы, не
агглютинирующиеся специфическими сыворотками.
В таких случаях ставят реакцию агглютинации с кипяченой в
течение 1 часа взвесью культуры в надежде обнаружить
агглютинабельность термостабильного антигена шигелл.
Прибегают также к фаготипированию, для чего на
засеянный шигеллами газон наносят каплю поливалентного
дизентерийного фага.
В связи с широким распространением лекарственно
устойчивых штаммов шигелл обязательно определяется
антибиотикорезистентность выделенной культуры.

28.

• Серодиагностика.
• Серологический метод диагностики
дизентерии с помощью развернутой
реакции агглютинации используется для
выявления стертых форм болезни и при
эпидемиологическом обследовании очага
инфекции.
• Лучшие результаты дает реакция непрямой
гемагглютинации с эритроцитарными
диагностикумами Зонне и Флекснера

29. Профилактика

Основное значение имеют санитарно-гигиенические мероприятия,
направленные на разрыв путей передачи инфекции.
Важную роль играют уборка мусора, борьба с мухами, охрана источников
водоснабжения от загрязнения, контроль качества водопроводной
воды.

30. Эшерихиозы

Эшерихиозы - группа острых кишечных инфекций, вызываемых
патогенными для человека кишечными палочками (эшерихиями) и
протекающих с
гастроинтестинальной симптоматикой, характер которой во многом
зависит от вида возбудителя.

31. Эшерихиозы

Это заболевания, вызываемые
патогенными штаммами Escherichia coli
Их отличия от условно-патогенной
кишечной палочки - в продукции
факторов патогенности, ответственных
за клиническую картину заболевания.
Их сходство с условно-патогенной E.coli
по основным морфологическим,
биохимическим, культуральным
cвойствам

32. Морфология

• Возбудителем является
Escherichia coli.
• Гр – палочка с закругленными
концами, размером 2-3 х 0,40,6 мкм, спор не образует,
капсулу, жгутики и пили может
иметь.
• Факультативные анаэробы.
• Этот возбудитель является
показателем фекального
загрязнения, особенно воды.
Коли - титр и коли - индекс
часто использовали как
санитарные показатели.
• Эшерихии входят в состав
микрофлоры толстого
кишечника.

33.

Кишечная палочка (эшерихия коли, лат. escherichia coli; общепринятое
сокращение E. coli)

34.

Этиология.
Возбудители эшерихиозов - Е. coli - грамотрицательные
кишечные палочки, относящиеся к роду Escherichia, семейству
кишечных бактерий.
Они хорошо растут на обычных питательных средах. Имеют
сложную антигенную структуру. Микробы содержат
соматический 0-антиген, жгутиковый Н-антиген
и поверхностный соматический К-антиген.
К настоящему время у Е. coli изучено более 170 0-антигенов,
половина из которых выделена у патогенных для
человека эшерихий. Различия в 0-антигене положены в основу
разделения эшерихий на соответствующее число 0-групп.
Внутри каждой серогруппы бактерии различаются по Н-и Кантигенам. В клинической практике ограничиваются указанием
на принадлежность возбудителя к той или иной 0-серогруппе:
06, 0111,0124 и т. д.
Различные патогенные эффекты, вызываемые эшерихиями,
обусловлены продуцируемыми ими энтеро-, цито- и
веротоксинами, а также адгезивным и инвазивным действием
самих бактерий.

35. Антигенная структура

- О-антиген – липополисахарид, термостабильный.
- К-антиген – полисахарид, делится на L,А,В антигены.
L-антиген – термолабильный, штаммы очень токсичны
А-антиген – термостабильный (100ºС 2,5 часа)
В-антиген – термолабильный, содержится у
большинства патогенных серотипов
- Н-антиген – содержится у подвижных,
термолабильный
О(1-150):К(1-88):Н(1-49)

36.

37.

Устойчивость во внешней среде
Е. coli не устойчивы к высокой температуре. Бактерии группы
кишечных палочек обезвреживаются обычными методами
пастеризации (65 - 75° С).
При 60° С кишечная палочка погибает через 15 минут.
1% раствор фенола вызывает гибель микроба через 5-15
минут, сулема в разведении 1:1000 - через 2 мин.,
устойчивы к действию многих анилиновых красителей.
Сохраняемость кишечной палочки при низких температурах
и в различных субстратах внешней среды изучена
недостаточно.
По некоторым данным в воде и почве кишечная палочка
может сохраняться несколько месяцев.

38.

• В настоящее время принято подразделять диареегенные
для человека Е. coli на пять категорий:
энтеротоксигенные (ЭТКП),
энтероинвазивные (ЭИКП),
энтеропатогенные (ЭПКП),
энтерогеморрагические (ЭГКП)
энтероадгезивные (ЭАКП) кишечные палочки.

39.

Особенности патогенных Е. coli и вызываемых ими
заболеваний
Патотип E.coli. Клиническая картина
Энтерогеморрагические (ЕНЕС) Поражает толстый кишечник
— АД, действие Шига- токсина. 1-я фаза — секреторная диарея
с болями, часто без Т°С. Шига-токсин вызывает гемоколит
Энтеропатогенные (ЕРЕС) Поражает тонкий кишечник
Водянистая диарея, чаще у детей 0-2 лет, хронич. диарея с
гипотрофией.
Энтеротоксигенные (ЕТЕС) Поражает тощую кишку — энтеротоксины (термолабильный и -стабильный). Водянистая диарея
с болями в животе, легкая или ср. тяжести диарея
путешественников (в течение 1-5 дней).
Энтероинвазивные (EIEC) Поражает толстую кишку — адгезия,
инвазия слизистой и ее воспаление. Водянистая диарея или
картина дизентерии, в кале слизь, часто кровь, лейкоциты.
Диарея путешественников.
Энтероагрегативные (ЕАЕС) Поражает тонкий и толстый
кишечник — , энтеро- или цитотоксин. Водянистая диарея, с
рвотой, реже с примесью крови. АД — адгезия к слизистой и ее
денудация. ГУС- гемолитико-уремический синдром

40. Клинические проявления колиэнтеритов

41.

Клинические проявления колиэнтеритов

42.

• ЭПКП – вызывают эшерихиозы у детей до 1 года.
Возбудители поражают эпителий тонкого
кишечника, адсорбируются на поверхности
энтероцитов за счет белков наружной мембраны и
размножаются здесь, повреждая микроворсинки и
вызывая их отторжение.
• Развивающаяся при этом воспалительная реакция
обусловлена действием эндотоксина, который
освобождается при разрушении кишечных палочек.
Течение болезни – тяжелое, она может длиться
неделями. Основные клинические проявления:
диарея, рвота, срыгывание пищи, признаки
обезвоживания. Может развиться гипотрофия.

43. 2 категория эшерихиозов

энтеропатогенная E.coli Открыл
Эшерих, 1886. Штаммы O26,O55,O125,O44.
Клиника- водная диарея, эксикоз у детей
до 1 года жизни, инкуб.период 6-24ч.
Факторы патогенности: связанные в узел
пили, которые через сигнальную систему
вызывают фосфорилирование
белка Hp-90 клеток эпителия, активацию
фосфолипазы С.
2-EPEC
Повреждающее действие связано с
перестройкой цитоскелетной структуры.
Энтеротоксина не выявлено.

44.

ЭТКП способны продуцировать энтеротоксины и часто
являются причиной диареи у детей и взрослых в
развивающихся странах, а также улиц, посетивших
эти страны («диарея путешественников»).
Среди ЭТКП различают штаммы, продуцирующие
термолабильный энтеротоксин, иммунологически
близкий энтеротоксину холерных вибрионов,
штаммы, вырабатывающие термостабильный энтеротоксин,
и, наконец, штаммы, образующие оба эти энтеротоксина.
В состав ЭТКП входят следующие 0-группы: 06, 08, 011, 015,
020, 025, 027, 063, 078, 080, 085, 0114, 0115, 0126, 0128, 0139,
0148,0153,0159, 0166, 0167.
Заболевание, которое они вызывают, нередко именуют
холероподобным эшерихиозом.

45. Категории эшерихиозов

•1- ETEC энтеротоксигенная E.coli, штаммы O6,
O7, O8, O9, O148, O158.
Клиника -холероподобный синдром
(диарея путешественников),
инкуб.период - 16-72ч, болеют взрослые и дети.
Факторы патогенности:
LT -термолабильный токсин,
ST-термостабильный токсин (или оба),
их синтез кодируют гены плазмид,
структура LT подобна В-субъединице
толерогена

46. Энтеротоксигенная E.coli

47.

• ЭИКП обладают способностью инвазировать эпителий
кишечника и вызывать заболевания, патогенез и
клиника которых подобны шигеллезу
(дизентериеподобный эшерихиоз).
• Они имеют много общих 0-антигенов с шигеллами.
ЭИКП включают следующие 0-группы: 028, 029, 0112,
0124, 0135, 0136, 0143, 0144, 0152, 0164,0167,
принадлежащие к классу I, являются причиной
заболеваний с преимущественным поражением тонкой
кишки у грудных детей (колиэнтериты детей раннего
возраста).
• К ним относятся серогруппы: 026, 055, 086, 0111ab,
0119, 0125ab, 0127, 0128ab, 0142 и 0158. ЭПКП,
принадлежащие к классу II, вызывают
заболевание у детей и взрослых, симптом сходный с
сальмонеллезом.

48. 3 категория эшерихиозов

3- EIEC энтероинвазивная E.coli
штаммы O124,O135,O143,O144
клиника- дизентерия-подобный синдром,
локализация процесса- нижний отдел
подвздошной кишки, толстая кишка. Чаще
болеют дети 1,5-2 лет, подростки.
Инкуб.период 6-48ч.
Факторы патогенности: плазмида, подобная
плазмиде шигелл, кодирующая
токсигенные, инвазивные свойства. EIEC
внедряется и размножается в клетках
слизистой оболочки кишки, вызывая ее
деструкцию.

49.

ЭГКП - небольшая группа бактерий, вызывающая достаточно
характерную симптоматику: геморрагический колит,
сопровождающийся кровянистой диареей с отсутствием в
испражнениях значительной примеси лейкоцитов и протекающий
на фоне нормальной или субфебрильной температуры.
Наиболее характерным осложнением заболевания является
гемолитико-уремический синдром. Эти бактерии выделяют
цитотоксин, вызывающий гибель клеток Vero и HeLa in vitro.
Таким образом, все эти эшерихии образуют шигаподобный токсин
1 (веротоксин 1), а большинство и шигаподобный токсин 2
(веротоксин 2), действием которых во многом обусловлена
приведенная симптоматика.
ЭГКП включают следующие серогруппы: 026, 0111, 0145, 0157.
С Е. coli 0157:H7 связаны драматические вспышки этого
эшерихиоза среди детей и взрослых в США, Канаде и Японии.

50.

• ЭАКП впервые выделены в 1985 г. Они
неинвазивны, не образуют цитотоксины и
не имеют плазмидного фактора адгезии.
Свое название получили
благодаря способности к адгезии к клеткам
Нер-2 in vitro. Категория ЭАКП пока не
представлена какими-либо серогруппами.

51.

• Механизм передачи - фекально-оральный.
• Среди путей распространения инфекции ведущая роль
принадлежит пищевому, причем основными
факторами передачи выступают молоко и молочные
продукты.
• При инфекции ЭГКП основные факторы передачи - мясные
продукты и молоко.
Вторым по значению является водный путь передачи
инфекции. В некоторых случаях имеет место контактнобытовой путь распространения заболевания.
Восприимчивость к коли-инфекции значительно выше в
детском возрасте. Более того, ЭПКП, относящиеся к классу
вызывают заболевания лишь у детей в возрасте до 2 лет.
• Сезонный подъем заболеваемости эшерихиозами
приходится на летне-осенние месяцы.

52.

53.

• Инфицирующая доза сильно зависит от
типа патогенной кишечной палочки (так для
энтеротоксигенной E.coli эта величина
может составлять от 100 миллионов до 10
миллиардов бактерий, в то время как для
энтероинвазивной и, предположительно,
энтерогемморагической E.coli - всего 10
организмов, как и у Shigella).
• В наибольшей степени восприимчивы к
заболеванию дети раннего возраста,
пожилые и ослабленные люди.

54.

Клиническая картина энтерогеморрагических эшерихиозов также
полиморфна: от легкой диареи до тяжелого патологического процесса,
протекающего с геморрагическим колитом, гемолитико-уремическим
синдромом или тромбоцитопенической пурпурой. Такой полиморфизм
клинических проявлений обусловлен неодинаковой количественной
способностью энтерогеморрагических эшерихий продуцировать экзотоксин.
Клиника энтероадгезивных эшерихиозов у детей не описана.
Основные диагностические признаки эшерихиозов
1. Эпиданамнез – болеют дети всех возрастов, но преимущественно дети
первого года жизни и дошкольники, встречается в течение всего года, но
чаще отмечается летне-осенняя сезонность.
2. Начало заболевания острое, реже постепенное; клинические проявления
зависят от принадлежности эшерихий к той или иной группеи и отличаются
полиморфизмом.
3. Ведущий синдром болезни – энтеритный.или гастроэнтеритный синдром;
синдром, определяющий тяжесть болезни - степень и вид эксикоза.
4. Особенно тяжело эшерихиозы протекают у новорожденных и детей первых
3-х месяцев жизни с отягощенным преморбидным фоном.
5. Воспалительные изменения в копрограмме отсутствуют, за исключением
эшерихиозов, вызванных ЭИЭ.

55. Лечение.

• При холероподобном течении эшерихиоза главным терапевтическим
мероприятием является восстановление водно-электролитного
баланса. Оно достигается путем пероральной регидратации глюкозоэлектролитными растворами, а в тяжелых случаях - внутривенным
введением полиионных растворов.
Больным назначают также кишечные антисептики (нитрофурановые
препараты, оксихинолины).
• Принципы и способы лечения больных дизентериеподобным
эшерихиозом те же, что и дизентерии.
• В лечении энтеропатогенного эшерихиоза используют кишечные
антисептики, в тяжелых случаях - антибиотики (полимиксины,
аминогликозиды, цефалоспорины III поколения, рифакол,
фторхинолоны.
• Лечение больных энтерогеморрагическим эшерихиозом включает
этиотропные средства и энергичную патогенетическую терапию.
Этиотропная терапия в
легких случаях включает кишечные антисептики, в тяжелых фторхинолоны, цефалоспорины III поколения, рифакол

56. Лабораторная диагностика эшерихиоза

Лабораторная диагностика эшерихиоза
• 1. Бактериологический метод. Исследуют
испражнения и рвотные массы с целью выделения
возбудителя. Элективными являются среды Эндо,
Левина. Окончательный ответ через 48–72 часа.
• 2. Серологический метод (РПГА) позволяет выявить
специфические антитела в крови с 5–7 дня заболевания.
Диагностическим является рост титра антител в
динамике заболевания в 4 и более раз.
• 3. Копрологический метод. Наличие в кале слизи в виде
тяжей и комочков, а в ней лейкоцитов, эритроцитов,
клеток кишечного эпителия при отсутствии детрита и
жировых масс, указывает на воспалительный процесс в
толстом кишечнике; наличие в большом количестве
непереваренной клетчатки, крахмала, мышечных
волокон, жира наблюдается преимущественно при
поражении тонкого кишечника.

57. Культуральные свойства

• Эшерихии хорошо растут на обычных
питательных средах при температуре
37°С и рН 7,2-7,4.
• На жидких средах E.coli дает диффузное
помутнение, на плотных средах
образует S- и R- формы колоний.
• На основной для эшерихий среде Эндо
лактозоферментирующие кишечные
палочки образуют интенсивно красные
колонии с металлическим блеском,
• не ферментирующие - бесцветные
колонии.

58. Escherichia coli Грам- Lac+

Escherichia coli
ГрамLac+

59.

60.

61.

Колонии E. coli на плотной питательной
среде

62.

63.

64.

65. м

66. Токсины

• Наибольшее значение в патогенезе заболевания
имеют энтеротоксины — термолабильный и
термостабильный.
• По характеру биологического действия
термолабильный энтеротоксин Э. коли вызывает
расширение изолированных кишечных петель
(дилятация) и образование в них серозногеморрагического экссудата.
• В патогенезе при колибактериозе
определенную роль играют
ферментообразование, колициногенность и
токсины, образуемые возбудителем.

67. Биохимические свойства.

• Кишечная палочка в большинстве случаев
ферментирует углеводы (глюкозу, лактозу,
маннит, арабинозу, галактозу и др.) с
образованием кислоты и газа, образует индол, но
не образует сероводород, не разжижает желатин,
обесцвечивает метиленовую синьку в молоке,
молоко свертывает.
• + р-я с метилротом
• - р-я Фогес-Проскауэра

68.

69. Содержит 1% лактозу, 0.1% глюкозу, тиосульфат натрия и сульфат железа, индикатор фенол рот. Посев по поверхности и уколом в

Среда Клиглера:
Содержит 1% лактозу, 0.1%
глюкозу, тиосульфат натрия
и сульфат железа,
индикатор фенол рот.
Посев по поверхности и
уколом в столбик агара.
При ферментации только
глюкозы – желтый столбик,
скошенная часть не меняет
окраску.
При ферментации и
глюкозы, и лактозы (E.coli)
– весь агар желтый
При образовании
сероводорода
(сальмонеллы, протей) –
агар чернеет

70. Среда Клиглера содержит:  1. МПА (Мясо-пептонный агар -мясопептонный бульон +агар-агар) 2. Глюкозу 1г/л 3. Лактозу 10 г/л 4.

Среда Клиглера содержит:
1. МПА (Мясо-пептонный агар -мясопептонный бульон +агар-агар) 2. Глюкозу 1г/л 3.
Лактозу 10 г/л 4. Индикатор рН- феноловый красный (в кислой среде желтеет) 5.Индикатор
на Н2S (при выделении чернеет
Принцип
действия
среды:
ферментация
глюкозы
происходит
только
в
анаэробных
условиях
в
глубине среды (столбика) изза ее малой концентрации.
Ферментация
лактозы
происходит
в
аэробных
условиях на поверхности
среды (скоса). При этом цвет
индикатора
меняется
на
желтый (закисление среды).
О
продукции
сероводорода
узнаем по почернению среды.

71. E.Coli - иммунофлюоресценция

72.

73.

Основной метод – бактериологический. Исследуемый материал (испражнения, рвотные
массы, мочу, кровь, пищевые продукты, отделяемое носа, зева, уха и т. д.) засевают на среды
Эндо, Левина, Плоскирева. Выделенные культуры сероидентифицируют.
Для этого с окрашенными колониями (в количестве не менее 10) ставят реакцию
агглютинации на стекле с поливалентными эшерихиозными ОК сыворотками (или со смесью
не более пяти ОК сывороток) для дифференциации ЭПЭ от других эшерихий.
Культуры, давшие положительную РА с поливалентной эшерихиозной сывороткой проверяют
в РА на стекле с каждой типовой сывороткой.
При положительном результате с одной из них ставят развернутую РА с этой сывороткой и с
живой (определение К-антигена) и гретой при 100ºС 1 час (определение О-антигена)
культурой. Сыворотку разводят до титра.
РА считается положительной, если с гретой культурой отмечается агглютинация в разведении
сыворотки не ниже ½ ее титра, а живая культура агглютинируется сывороткой, разведенной
не менее чем 1:200.
Параллельно с изучением антигенной структуры (в реакциях агглютинации) у подозрительных
колоний проверяют биохимические свойства путем посева на среды Гисса (сахаролитические
свойства) и на МПБ (для изучения протеолитических свойств).
По комплексу изученных признаков устанавливают вид и серотип возбудителя.
В ряде лабораторий применяют люминисцентно-серологический метод исследования с
использованием иммунофлюоресцирующих сывороток, позволяющих получить
предварительный ответ через 1-2 часа после начала исследования.
Вспомогательный метод – серологический:ставят РНГА (реакцию непрямой гемагглютинации)
с сывороткой больного, начиная с 3-5 дня болезни, изучают нарастание титра антител в
динамике заболевания.

74.

Классификация возбудителя
сем: Enterobacteriaceae
род: Escherichia
вид: E. сoli (энтеропатогенные штаммы)
Восприимчивы все виды сельскохозяйственных животных, включая птиц и пушных зверей, главным образом, молодняк; болеет человек
Патогенез и факторы вирулентности:
заражение происходит алиментарным путем, реже аэрогенным ;
возбудитель проникает в кровь, вызывает сепсис или размножается в кишечнике – энтеротоксическая и энтеритная формы;
факторы вирулентности – возбудитель продуцирует термолабильный экзотоксин и термостабильные эндотоксины, гемолизины, обладает адгезией и др.
Методы диагностики:
Бактериологический метод:
–
материал для исследования:
при жизни – кал;
посмертно – труп целиком, отрезок тонкого кишечника, брыжеечные лимфатические узлы, паренхиматозные органы, головной мозг.
–
микроскопия:
методы окраски: простой метод, по Граму;
микрокартина: полиморфные палочки по 3 мкм, располагаются одиночно, реже попарно;
грамотрицательные;
спор не образуют;
капсулу не образуют;
неподвижны.
–
культивирование:
посев на питательные среды : МПА, МПБ, дифференциально-диагностические среды (среда Эндо, среда Левина и др.);
особенности выделения возбудителя:
–
факультативные анаэробы;
–
оптимальная температура 37oС;
–
срок культивирования 18-20 часов.
культуральные свойства:
»
на МПБ – интенсивное помутнение, образование легко разбивающегося осадка;
»
на МПА – сочные, круглые, с ровными краями, серо-белого цвета колонии;
»
на МПА с кровью - сочные, круглые, с ровными краями;
»
на среде Эндо – ярко-красные колонии, на среде Левина – темно-фиолетовые или черные колонии.
–
биохимические свойства:
обладает высокой сахаролитической активностью; для выявления проводят посевы на «цветной ряд» (среды Гиса);
ферментируют с образованием кислоты и газа – глюкозу, лактозу, маннит, не расщепляют сахарозу;
желатин не разжижают, сероводород не образуют, образуют индол, дают положительную реакцию с метиленовым красным (ярко-розового цвета),
отрицательная реакция Фогес-Проскауэра.
–
биопроба:
внутримышечно заражают выделенной микробной культурой белых мышей и цыплят.
Серологический метод:
–
используют РА (пробирочная и на стекле) для серотипизации полученного антигена (микробной культуры) с поли- и моновалентными коли-сыворотками;
–
используют реакцию иммунофлюоресценции.

75.

76.

77.

В связи с тем, что колонии патогенных и непатогенных кишечных палочек на указанных
средах не отличаются, принадлежность выделяемых культур патогенных серогрупп
определяют с помощью слайд-агглютинации с диагностическими поливалентными ОКсыворотками, или адсорбированными О-сыворотками, содержащими антитела к
определенным О-антигенов.
Микробиологическая промышленность выпускает 5 наборов диагностических ОКсывороток: ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД и ОКЕ. Основная поливалентная сыворотка ОКА
содержит антитела к О-и К-антигенов более 20 главных серологических групп.
Смесь ОК-сывороток готовят так, чтобы конечное разведение каждой из них было 1:10.
Агглютинирует 10 лактозоположительных колоний. Материал из каждой колонии берут
петлей так, чтобы часть ее осталась для дальнейшего пересева. Если одна из колоний
дала положительную слайд-агглютинацию, ее остаток пересевают на среду
Олькеницкого.
Через 18-20 ч учитывают ферментацию лактозы и глюкозы (пожелтение и разрыв
колонки и скошенной части агара).
Выделенную культуру ориентировочно относят к определенной серогруппы. Для
окончательной идентификации возбудителя необходимо поставить развернутую
реакцию агглютинации в пробирках для отдельного выявления его О-и К-антигенов.

78.

Диагностические агглютинирующие сыворотки разводят в двух рядах пробирок (в
первом - О-сыворотку, во втором - К-сыворотку) до титра, который указан на этикетках
ампул.
Для определения О-антигена в каждую пробирку первого ряда вносят по 2 капли 2-х
млрд суспензии выделенной культуры, прогретой в течение 2 ч при 100 ° С. При
кипячении инактивируется К-антиген, который локализуется поверхностно и
задерживает агглютинацию О-антигена.
Последний при прогреве не разрушается. Для выявления К-антигена в каждую
пробирку второго ряда с разведенной до титра сывороткой вносят по 2 капли суспензии
живого (не кипяченой культуры). Пробирку помещают в термостат при 37 ° С на 18-20
час.
При положительной реакции развернутой агглютинации до титра (или по крайней мере
до половины титра) делают окончательный вывод о выделении соответствующего
серовару патогенных эшерихий
. Отрицательная слайд-агглютинация 10 лактозоположительных колоний эшерихий дает
право дать ответ об отсутствии энтеропатогенных кишечных палочек.
Выделенную в среде Олькеницького культуру, которая дала положительную
развернутую реакцию агглютинации, сеют на среды Гисса для изучения ее
сахаролитических, пептолитичних свойств и подвижности.

79.

.Серологическое исследование
Выявление антиешерихиозних агглютининов в сыворотке крови больных с
диагностической целью в рутинной лабораторной практике не нашло широкого
применения. Антитела если и обнаруживаются, то в низких титрах (не выше 1:100).
Для серологической диагностики коли-инфекций более чувствительной и
специфичной является реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).
Специфический антиген для этой реакции производится путем сенсибилизации
эритроцитов барана суспензией 48 ч. агаровой культуры эшерихий, прогретой 2
часа при 100 ° С. Итак, с помощью РНГА можно обнаружить лишь О-антитела, что
может быть использовано для дифференциации заболеваний от
бактерионосительства, особенно, если взять для реакции эритроцитарный
диагностикум с автоштамом. Достоверность серологической диагностики
эшерихиоза возрастает при выявлении отдельных классов имуноглуболинив.
Изменение повышенной концентрации IgM на IgG обусловлена острым
инфекционным процессом. Обнаружение в сыворотке крови антител только
класса IgG свидетельствует о бактерионосительства. Так, лабораторная
диагностика эшерихиоза основана на выделении возбудителя заболевания и
последующей идентификации патогенных и непатогенных штаммов кишечной
палочки с помощью диагностических ОК-сывороток в ориентированной и
развернутой реакциях агглютинаци

80.

Патогенные эшерихии ферментируют лактозу, глюкозу, мальтозу, маннит, сахарозу (некоторые
штаммы), арабинозы, ксилозу, трегалозу, образуют индол, не выделяют H2S (некоторые штаммы
образуют сероводород), не разлагаются инозит и мочевину, не дезаминують фенилаланин, дают
отрицательную реакцию Фогес -Проскауэра и не синтезируют ДНК-азу.
Для выявления источника инфекции проводят фаго-и колицинотипування выделенных культур.
Идентификация диареегенних серотипов возможна также на основе выявления специфических
маркеров. Культуры типа ЕТКП производят два вида токсинов: термостабильный обнаруживают на
мишатах-сосунка, термолабильный - на культурах Y1 надпочечников. Для быстрой идентификации
ЭПКП используют реакцию коаглютинации на стекле дуия обнаружения белка внешней мембраны.
Серотипы ЕГКП, особенно серовар 0157: Н7, не ферментируют сорбит. Ентероинвазивни кишечные
палочки (ЕИКП) вызывают конъюнктивит у гвинейских свинок при внесении бактерий в
конъюнктивальный мешок (тест Серени), неподвижные, не ферментируют салицин. Они также
выделяют шигаподибни токсины SLT-1 и SLT-2, которые обнаруживают в испражнениях больных с
помощью ИФА. Адгезивные свойства эшерихий (ЕАКП) обнаруживают на культурах Неиа и Нед-2.
Самым быстрым и високоспецифиччим методом диагностики заболеваний, вызванных
энтеропатогенных эшерихии, является использование специфических ДНК-зондов. Они позволяют
выявить гены плазмид, кодирующих патогенность кишечных палочек или синтез их цитотоксин.
Метод основан на том, что одноцепная молекула ДНК может гибридизуватися с комплементарным к
нее вторым цепью ДНК. В большинстве патогенных эшерихий гены вирулентности локализованы в
плазмидах. Итак, зондом для обнаружения этих бактерий могут быть меченые последовательности,
клонированные из таких