Технология получения препаратов тетрациклина

1.

Колонии штамма Str. fradiae выращивают в течение 8-10
сут. на агаризованной среде. Культуру на косяках
выращивают при 29оС в течение 10-12 сут. Культурой с
косяков засевают колбы объемом 750 мл. Инокулят
выращивают при t =29оС в течение 48 ч на качалке,
имеющей 220 об./мин. 5% инокулята переносят в колбы с
ферментационной средой состава, мас.%:
- рыбная мука 2,0;
- меласса 2,0;
- крахмал 1,5;
- однозамещенный фосфорнокислый аммоний 0,02;
- хлористый натрий 0,2;
- сернокислый магний 0,2;
- мел 0,3;
- соевое масло по 2 мл в каждую колбу,
- водопроводная вода до 100 мл.

2.

• Ферментацию проводят при аэрации
1м3/м3 *мин. и t =29оС .
• Количество тилозина определяют
микробиологическим методом диффузии в агар
с использованием в качестве тест-культуры
Bac. subtilis .
• Через 160 ч ферментации в среде
накапливается антибиотик тилозин.

3. Технология получения препаратов тетрациклина

• Для с/х выпускают препараты на основе
7-хлортетрациклина (С22Н23ClN2O8) и
8-окситетрациклина (С22Н24 N2O9).
Это амфотерные соединения, способные
образовывать соли с кислотами и основаниями,
плохо растворимы в водных р-рах в интервале рН
от 4,5 до 7,5, но хорошо растворимы при рН 2,0 и
выше 8,0. Неустойчивы к воздействию
окислителей, в т.ч. и кислорода воздуха.
Промышленные продуценты хлортетрациклина
штаммы Actinomyces aurefasiens, а
окситетрациклина – Actinomyces rimosus.

4.

• Выпускают кормовые препараты хлортетрациклина
в виде:
• биовита-20, биовита-40, биовита-80,
содержание соответственно чистого антибиотика
20,40, 80 г в 1 кг препарата и одновременно 3,5,8 мкг
витамина В12 в 1г препарата.
По внешнему виду - однородный порошок от светлокоричневого до коричневого цвета.
Препараты содержат микроэлементы, белок, жиры и
минеральные соли.
При введении биовита в рационы в количестве
15-20г антибиотика на 1 т корма прирост в массе
животных увеличивается на 30%, а расход кормов в
среднем снижается на 5-10%.

5.

• Окситетрациклин для животных выпускается в
форме терравита Р (растворимый) и терравита К
(кормовой).
Препараты терравит-5, терравит-10, терравит-50
представляют собой однородный порошок светлокоричневого цвета с горьким вкусом и плесневым
запахом, содержащий соответственно 5, 10, 50 г
чистого антибиотика в 1 кг препарата.
Препарат терравит Р-20 – обладает активностью
20 ед./мг; терравит Р-40 – обладает активностью
40 ед./мг; терравит К-40 – содержащий
антибиотика до 40 ед./мг. Помимо антибиотика в
состав препаратов входит витамин В12, однако
содержание его не нормируется.

6.

• При введении 15-20 г антибиотика на 1т корма
привес животных увеличивается на 10-15%,
одновременно в такой же степени снижаются
затраты корма.
• Терравит -5, -10, -50 и К-40 применяется
совместно с концентрированными кормами
для тех же целей, что и биовит.
• Телятам и поросятам терравит-Р дают в виде
водных р-ров или растворенным в молоке.

7.

Биосинтез окситетрациклина
Посевной материал – виде спор со сроком
хранения до 3 мес. при t=4-6 ºС. Его размножают
при t=26-28 ºС в три генерации., τ = 2-3 сут.
Культуру продуцента Actinomyces rimosus дважды
размножают в колбах на 750 см3 с 200 см3
питательной среды на качалке (160-180 об./мин.),
затем в посевном аппарате.
Засев посевных аппаратов -700 см3 на 1 м3
аэрируемой питательной среды (расход воздуха
1м3/ м3*мин.)

8.

• Питательная среда для выращивания
продуцента, %:
Кукурузная мука
– 6,0
Кукурузный экстракт – 1,5
Сульфат аммония
- 0,6
Хлорид натрия
- 0,4
Мел
- 0,8
Вода
- остальное
Для основной ферментации среда того же
состава с внесением

9.

• Для основной ферментации среда того же
состава с внесением Со 1г/ м3 среды.
• Доза посевного материала 10-15% от объема
среды. Параметры те же, что при выращивании
пос.материала.
• Строгое соблюдение асептических условий.
• Коэффициент заполнения ферментера 0,5, т.к.
сильное
пенообразование.
Подается
стерильный синтетический пеногаситель.
• Контроль процесса по рН, температуре и
аэрации. Полное время биосинтеза τ=100-120ч.,
при t=26-28 ºС.

10.

•К.ж., содержащую до 4,5% АСВ, направляют на
вакуум-выпаривание при t=50-60ºС до содержания
АСВ 12-15%. Затем на распылительную сушилку и
высушиватся при tвх. =160-200 ºС и tвых. =70-80 ºС.
•В некоторых случаях сушку к.ж. проводят с
наполнителем (свекловичный жом 250 кг/м3 к.ж.,
но при этом сушка на вальцово-ленточной сушилке
или на сушилке с псевдокипящим слоем.
•Препараты терравит -5, -10, -50 представляют
собой высушенную к.ж., полученную в результате
выращивания продуцента Actinomyces rimosus и
стандартизованную по антибиотику наполнителем.

11.

• Препарат терравит Р – это высушенный на
распылительной сушилке фильтрат к.ж., а
высушенный осадок после фильтрации
является основой для производства препарата
терравит К.
• Стандартизацию препаратов терравит проводят
свекловичным жомом или кукурузной мукой.
• Готовые препараты расфасовывают в
бумажные мешки по 20 кг, хранят в темных
помещениях при температуре не выше 20 ºС и
относительной влажности не более 75%. Срок
годности препаратов до 6 мес. со дня
изготовления.

12.

• При производстве биовита споровый материал
выращивают на пшене. Его активность не
должна быть менее 3000 ед./см3.
• Посевной материал размножают в колбах (1-2
генерации) при t=26-28 ºС в течение 24-30ч. на
среде%:
• Зерно-картофельная барда - 40,0
• Кукурузный экстракт
- 3,0
• Мука
- 3,0
• Доводят рН среды до 6,7-6,9 30%-ным
раствором едкого натра.
• Для засева посевного аппарата 0,7 дм3
посевного материала.

13.

Культивирование при t=27-28 ºС в течение 30-40ч. при
перемешивании, аэрации и добавлении пеногасителя.
Биосинтез хлортетрациклина в ферментерах на среде, %:
- Зерно-картофельная барда - 10,0
- Мука (крахмальность 51%) - 5,0
- Аммония нитрат
- 0,7
- Мел
- 0,5
- Натрия хлорид
- 0,3
- Кобальта хлорид
- 0,0001
- Пеногаситель
- до 0,2
В качестве предшественника 0,0001% роданистого
бензила.
Перед началом культивирования значение рН на уровне
6,6-6,7. Культивирование при перемешивании и аэрации в
течение 60-70ч., t=26-28 ºС. Об окончании биосинтеза

14.

• Переработку к.ж. проводят одним из 2-х
способов:
1. К.Ж. с АСВ около 3,0% направляют на вакуумвыпаривание до АСВ 10-12%.
К концентрату добавляют консервант-пиросульфат
натрия 2-3 кг/м3 к.ж. и высушивают на распылительной сушилке.
Если содержание антибиотика более, чем в
ТУ(обычно 90-150 г/кг), то продукт
стандартизируют наполнителем (тонкоизмельченные отруби, муку обезжиренную - кукурузную или
соевую, либо свекловичный жом).

15.

2.
К.ж. в сборнике обрабатывают р-ром гашеной
извести
с
целью
перевода
растворимого
хлортетрациклина в осадок в виде соли кальция.
- Осадок – на фильтр-пресс и выгружают в бункер и с
помощью шнекоразгрузочного механизма – на
грануляцию, а затем – на сушку.
высушенные
гранулы
по
трубопроводу
пневмотранспортом собирают в сборник, а затем на
стадию дробления и измельчения.
Продукт стандартизуют и расфасовывают по 10-20 кг
в двухслойные бумажные мешки, помещенные в
бязевые.
• Хранят в затемненных помещениях при температуре
не выше 25 ºС.
• Срок хранения биовита-20 до 6 мес., биовита-40 и
-80 – год со дня выработки.

16.

Технология получения препаратов бацитрацина
• Кормовые препараты антибиотика бацитрацина,
имеющие название бацилихины, представляют
собой высушенную к.ж., полученную в результате
глубинного выращивания продуцента
Bac. licheniformis, содержащую цинкбацитрацины и
различные биологически активные вещества.
• Бацитрацины – полипептидные антибиотики, среди
которых выделено 10 индивидуальных форм: А, А1,
В, С, D, E, F1, F2, F3 и G.
• Готовый препарат на основе бацитрацина на 37%
представлен бацитрацином А, суммарная формула
С66Н108N17O16. Полипептид бацитрацин А состоит из
10 остатков аминокислот.

17.

• Кормовые препараты бацитрацина выпускаются
под названиями: бацилихин-10, бацилихин-20,
бацилихин-30 и содержат соответственно 10, 20,
30 г чистой цинковой соли антибиотика в 1 г
препарата.
• Готовый продукт – гигроскопичный порошок от
серовато-белого до светло-коричневого цвета,
горький на вкус. Обладает высокой антибиотической активностью от 45 до 74 ед./мг (1 мг
должен содержать не менее 42 ед.) против
грамположительных аэробных и анаэробных
бактерий.
• Проявляет синергические действия с другими
антибиотиками (с хлортетрациклином).

18.

• Добавка от 5 до 15г чистого антибиотика на 1т корма для
животных и птицы повышает привесы на 15-17% и
снижает затраты корма и падеж молодняка на 5-10%.
• Бацитрацины
получают
при
глубинном
или
поверхностном росте бактерий на средах, содержащих
глюкозу, лактат аммония и неорганические соли или
соевую муку и глюкозу.
• Исходная культура продуцента в виде спор поступает на
размножение в колбы, а затем в посевной аппарат на
среде состава, %:
• Крахмал
-1,8
• Мука соевая
- 7,5
• Карбоксид кальция – 0,02
• Сульфат аммония - 0,2.
• Длительность получения посевного материала 16-18ч. на
стадии.

19.

• Ферментация при температуре 37 ºС в течение 30-32ч
на среде, %:
• Крахмал
-2,0
• Сульфат магния - 0,33
• Мука соевая
- 7,5
• Карбоксид кальция – 1,0
• Процесс получения посевного материала и основной
ферментации в условиях аэрации 1м3/м3*мин. И
перемешивания при внесении пеногасителя 0,2%.
Активность в к.ж. 4000 ед./см3. Образующийся
бацитрацин на 85% локализуется в растворе, а
оставшиеся 15% находятся в спорах продуцента.
• При температуре 18-20 ºС сохраняют свою активность
до 2-х лет препараты.
• Гарантийный срок хранения препаратов бацилихина –
1год.