Диэнай. Зачем нужна фрагментированная ДНК

1. диэнай

Почему его нужно принимать
постоянно
dnaclub®

2. Зачем нужна фрагментированная днк

Диэнай. Часть I.
ЗАЧЕМ НУЖНА
ФРАГМЕНТИРОВАННАЯ ДНК
dnaclub ®

3. Состав Диэная

• Фрагментрированная
ДНК лососевых рыб,
иммобилизованная на
полимере ПЭГ-1500 по
axis-технологии
dnaclub ®

4. ДНК

• Дезоксирибонуклеиновая кислота –
полимер, состоит из нуклеотидов.
• Нуклеотиды соединяются между
собой прочной ковалентной связью
через сахар одного нуклеотида и
фосфорную кислоту другого.
• Получается полинуклеотидная цепь.
dnaclub ®

5. Кодирование белков

• Белки (протеины,
полипептиды) состоят из
цепочек аминокислот
(АМК).
• Каждая АМК закодирована
в генотипе набором из трех
нуклеотидных пар.
dnaclub ®

6. Хранение информации

• Информация хранится в
ядре клетки,
организованных в виде
хромосом,
представляющих
комплекс сложных
молекул.
• Нити ДНК, накручены на
белковые
макромолекулы-стержни
(гистоны).
dnaclub ®

7. Функция ядра клетки

1) хранение и передача наследственной
информации в клетке;
2) создание аппарата белкового синтеза
– синтез всех видов РНК и образование
рибосом.
Повреждения и регенерация
Различные участки ДНК ядра клетки
постоянно участвуют в различных
биохимических процессах, поэтому ДНК
подвержена повреждениям
Способность устранить неполадки в ДНК
жизненно важна для клетки. Причем
этот ремонт клетка должна производить
самостоятельно и непрерывно.
dnaclub ®

8. Восстановление коротких участков повреждения ДНК

ДНК восстанавливаются тремя путями
(известно 10 способов):
1. Прямым возвращением к исходному
состоянию;
2. Вырезанием поврежденного участка
и заменой его нормальным;
3. Рекомбинационным
восстановлением в обход
поврежденного участка.
Эксцизионная репарация. Исправление
фрагментов ДНК длиной в 12-13 или
27–29 нуклеотидов.
Делаются два разреза в цепочке, удаляя
кусок из нуклеотидов, содержащий
поврежденную часть. Затем в дело
вступают уже упоминавшиеся ДНКполимераза и ДНК-лигаза, достраивая
недостающий фрагмент и сшивая
цепочку.
Гуцол Л. О. , Непомнящих С. Ф. Пострадиационное восстановление ДНК.
Иркутск: 2015
dnaclub ®

9. Циркулирующие внеклеточные нуклеиновые кислоты крови

ДНК в плазме здоровых доноров в среднем не превышает 53
нг/мл. При развитии онкологических заболеваний концентрация
внДНК возрастает и составляет от 10-1200 нг/мл [5-7] до 2160
нг/мл.
В крови больных, получивших травму увеличение концентрации
ДНК наблюдается уже через 20 мин.
Источниками внеклеточной ДНК в крови могут служить
• процессы некроза и онкоза (А),
• апоптоза (Б),
• активной секреции (В).
В составе циркулирующих в крови внеклеточных ДНК были
обнаружены ДНК, имеющие характерные для опухолевых
клеток мутации, аберрантное метилирование, перестройки
микросателлитной ДНК, вирусная ДНК.
dnaclub ®

10. Образование фрагментированной ДНК при апоптозе

Классическую апоптозную гибель клеток можно
определить некоторыми морфологическими и
биохимическими характеристиками, которые
отличают его от других форм гибели клеток.
Одной из таких особенностей, которая является
отличительной чертой апоптоза, является
фрагментация ДНК.
В умирающих клетках ДНК расщепляется
эндонуклеазой, которая фрагментирует
хроматин в нуклеосомные единицы, которые
являются кратными примерно 180-200 б.п.
олигомерами и появляются в виде ДНК-лестницы
при работе на агарозном геле.
Matassov D. Measurement of apoptosis by DNA fragmentation.
Methods Mol Biol. 2004;282:1-17.
Saadat Y.R. An update to DNA ladder assay for apoptosis detection
// Bioimpacts. 2015; 5(1): 25–28.
dnaclub ®

11. Нарезки ДНК при апоптозе: 200, 400, 600 н.п.

Основным источником
подобных фрагментов
являются собственные
клетки после апоптоза,
управляемого
разрушения. Ежедневно
организм человека
получает около 10 г
«строительного
материала» ДНК в виде
фрагментов по 200, 400,
и 600 нуклеотидных пар
[18].
Huang X., e.a. Cytometric assessment of DNA damage in relation to cell cycle phase and apoptosis //
Cell Proliferation. 2005. 38(4):223-43
dnaclub ®

12. Хорошие и плохие фрагменты ДНК

По сути это один из видов регенеративных процессов на геномном
уровне, который зависит от доступности фрагментов ДНК.
Клетки организма млекопитающих могут использовать фрагменты
эндогенной и экзогенной ДНК для восстановления дефектных
локусов генов, например, за счет гомологичного обмена
экзогенного фрагмента ДНК с локусом хромосомы, несущей
делецию [Cell Cycle. 2007 Sep 15;6(18):2293-301].
Функциональный размер подобной «нарезки», то есть готовых к
утилизации «полуфабрикатов», существенно отличается от ДНК,
деградирующей в результате некроза (травма, гнойновоспалительный процесс, онконекроз).
Условно, патологические фрагменты, как правило, имеют
значительно большие размеры и могут оказывать дополнительное
повреждающее действие [Aging Cell (2016) 15, pp398–399].
Увеличение концентрации, величины фрагментов, специфические
изменения структуры ДНК наиболее широко используются в
диагностике онкологических заболеваний [Clin Chem. 2015
Jan;61(1):112-23].
dnaclub ®

13. Анализ фрагментированной ДНК

Анализируемые образцы
1.
2.
3.
4.
Электрофореограмма
образцов ДНК
Исходное сырье ДНК.
Диэнай.
Деринат.
Стандартный маркер.
2
dnaclub ®

14. Новый класс препаратов на основе фрагментированной ДНК

фгДНК стимулируют и существенно облегчают
репаративные и регенеративные процессы,
способствует заживлению трофических язв, ускоряют
динамику эпителизации слизистых желудочнокишечного тракта и кожных покровов. Оказывает
выраженный радиопротекторный эффект при
облучении.
Фрагментированная до определенных размеров ДНК
поддерживает иммунный ответ, активируя макрофаги и
Т-лимфоциты. Установлено, что эффекты связаны с
активацией клеток через рецепторный аппарат [ Nat Rev
Immunol. 2004 Apr;4(4):249-58], в частности, toll-like
receptors [Biochim Biophys Acta. 2009 Sep-Oct;1789(910):667-74].
В результате активируется и поддерживается миелопоэз,
что было подтверждено в исследованиях на животных
[Nat Rev Immunol. 2004;4:249–58] и клинических
исследованиях при химиотерапии у онкологических
пациентов [BMC Cancer (2015) 15:122].
dnaclub ®

15. Необходима постоянная доступность фрагментированной ДНК 200 – 600 н.п.

Для здоровых
• Восстановление
повреждений в ДНК
клеток – эффект
продления жизни
Для больных
• Восстановление
поврежденных клеток
• Ускорение реабилитации
после острых вирусных и
бактериальных инфекций
• Постоянная поддержка
иммунного ответа
• Защита от онкологической
ДНК
• Профилактика
метастазирования
опухолей
dnaclub ®

16. Как фрагментированная ДНК проникает в кровоток

Диэнай. Часть II.
КАК ФРАГМЕНТИРОВАННАЯ ДНК
ПРОНИКАЕТ В КРОВОТОК
dnaclub ®

17. Всасывание в пищеварительном тракте

Эпителий желудка и кишечника представляет
структурный барьер между внутренней и
внешней средой, основной функцией которого
является перемещение из «внешней» среды
необходимых (нужных для жизни) соединений
и не пропускать ненужные, опасные молекулы
и образования (вирусы, бактерии,
макромолекулы, ксенобиотики и т.д.).
Так как процесс пищеварения завершается
полным разрушением ДНК до нуклеотидов
или олигонуклеотидов, которые не могут
участвовать в подобном механизме
регенерации. Поэтому обычно лекарственные
препараты с фгДНК вводятся парентерально
(деринат и др).
dnaclub ®

18. Механизмы абсорбции в кишечнике

1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Пассивный – диффузия;
активный энергозатратный
транспорт;
облегченной диффузии;
пассивный околоклеточный –
фильтрация;
транспортерами (Ргликопротеином и др.);
пресистемный метаболизм с
последующим всасыванием
исходной молекулы или ее
метаболитов;
эндоцитоз и трансцитоз.
(Метельский, 2009):
dnaclub ®

19. Почему высокая биодоступность пегелированных макромолекул

проблема
• Барьер желудочнокишечного тракта
решение
• Биодоступность без Axisтехнологии – менее 1 %
• Барьер печени (???)
• Неизвестно
• Эндотелиальный барьер
капилляров
• Биодоступность с Axisтехнологией: 10-20 %
dnaclub ®

20. Axis-технология – получение пегелированных макромолекул

Пегелированные макромолекулы
окружены молекулярным слоем воды
(«водяной шубой»)
dnaclub ®

21. Способы транспорта воды

Облегченная диффузия через
аквапоры
Пиноцитоз – захват клеткой
мелких водяных частиц
При микропиноцитозе образуются пузырьки из
кавеолы (впячивание) диаметром 0,1 мкМ.
Микропиноцитоз характерен для энтероцитов.
dnaclub ®

22. Пути транспортировки питательных веществ в тонкой кишке

?
Отток крови
в печень
dnaclub ®

23. Поглощение избытка воды

dnaclub ®

24. Путь липидов в тонком кишечнике «мимо» печени

Хиломикрон для
лимфы минуя печень
Эмульгированные
капельки жира
dnaclub ®

25. Транспорт эмульгированных липидов - хиломикронов

Компоненты желчи в просвете
эмульгируют жиры в липидные капли,
которые далее разрушаются липазами до
моноглицеридов и жирных кислот. Эти
соединения стабилизируются в эмульсии
под действием желчных кислот. Продукты
гидролиза путем пиноцитоза проникают
через микроворсиновые мембраны и
собираются в цистернах гладкого ER, где
они ресинтезируются как триглицериды.
Обработанные через RER и Golgi, эти
триглицериды окружены тонким слоем
белков и упаковываются в везикулы,
содержащие хиломикроны (0,2-1 м в
диаметре) липидов, образованных в
комплексе с белком. Хиломикроны
переносятся в латеральную клеточную
мембрану, секретируемую экзоцитозом, и
поступают во внеклеточное пространство в
направлении лимфатического сосуда
сосочка (млечный синус).
dnaclub ®

26. Транспорт соединений через энтероциты в кровоток

Транспорт воды пиноцитозом, эмульгированный
жир, Пегелированные макромолекулы
Защитный барьер
В грудной лимфатический
проток и в общий кровоток
dnaclub ®
В печень

27. Правильная технология приема препаратов линейки Диэнай

1.
Помнить – капсулы растворяются
через 20 минут после приема.
2.
Принимать на фоне отсутствия
активного пищеварения в
желудке: утром перед завтраком,
через 2 часа после завтрака,
через 4 часа после обеда.
3.
Капсулы запивать 50 мл воды.
Повторно выпить около стакана
воды через 10-15 минут после
приема капсул для
транспортировки содержимого
капсул в тонкий кишечник.
4.
Прием пищи – не раньше 30
минут после капсул.
dnaclub ®

28. Спасибо за внимание

О.В. Гришин
СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ
dnaclub ®