Эпитопное картирование белковой молекулы с помощью моноклональных антител

1.

Эпитопное картирование
белковой молекулы с
помощью моноклональных
антител
Добро пожаловать на презентацию, посвященную эпитопному
картированию белковых молекул с использованием
моноклональных антител. Эта методика играет ключевую роль в
понимании структуры и функций белков, а также в разработке
новых терапевтических и диагностических средств.
АР
по Артем Романов

2.

Введение в эпитопное картирование и его значение
Определение эпитопного картирования
Значение в исследованиях
Эпитопное картирование – это процесс определения
Метод важен для понимания взаимодействия
точного места связывания антитела с белковой
антител с белками, разработки вакцин, диагностики
молекулой. Эпитоп представляет собой участок
заболеваний и создания терапевтических антител.
белка, который распознается антителом.
Эпитопное картирование помогает выявить ключевые
участки белка, необходимые для его
функционирования.

3.

Моноклональные антитела: инструмент
для эпитопного картирования
Специфичность и однородность
Получение моноклональных
антител
Моноклональные антитела обладают
Процесс включает иммунизацию
высокой специфичностью к
животного антигеном, выделение B-
определенному эпитопу, что делает
лимфоцитов, слияние с миеломными
их идеальным инструментом для
клетками (гибридомы) и отбор
точного картирования. Они
гибридом, продуцирующих антитела
производятся из одного клона
с нужной специфичностью.
иммунных клеток и, следовательно,
являются однородными.
Преимущества использования
Моноклональные антитела обеспечивают воспроизводимость и стандартизацию
экспериментов, что позволяет получать надежные результаты в эпитопном
картировании. Их можно производить в больших количествах.

4.

Методы эпитопного картирования с
использованием моноклональных антител
Пептидное сканирование
Синтезируются перекрывающиеся пептиды, соответствующие
последовательности белка, и определяется, с какими из них связывается
антитело.
Мутагенез
В белковой молекуле вводят мутации и анализируют влияние этих мутаций на
связываемость антитела. Изменение связывания указывает на участие
аминокислоты в эпитопе.
Рентгеновская кристаллография
Определение трехмерной структуры комплекса антитело-антиген с высоким
разрешением, позволяющее точно установить эпитоп.
Масс-спектрометрия
Идентификация эпитопов после ограниченного протеолиза комплекса
антитело-антиген.

5.

Подготовка образцов и антител
для картирования
Очистка белка
Подготовка
антител
Буферные
растворы
получить чистый и
Антитела должны
Выбор буферных
стабильный белок
быть очищены и
растворов, pH и
для проведения
охарактеризованы.
ионной силы имеет
экспериментов по
Важно знать титр
решающее
картированию.
антител,
значение для
Используются
аффинность и
стабильности
методы аффинной
специфичность.
белка и антител, а
Необходимо
хроматографии,
также для
ионного обмена и
эффективности
гель-фильтрации.
связывания.

6.

Анализ результатов картирования и
идентификация эпитопов
1
Обработка данных
Данные, полученные с помощью различных методов картирования,
необходимо обработать и проанализировать. Используются
специализированные программные инструменты и статистические
методы.
2
Идентификация эпитопов
На основании анализа данных определяется аминокислотная
последовательность, соответствующая эпитопу. Важно учитывать
конформацию эпитопа в трехмерной структуре белка.
3
Подтверждение результатов
Используются дополнительные методы для подтверждения
идентифицированного эпитопа, такие как сайт-направленный
мутагенез и синтез пептидов, соответствующих эпитопу.

7.

Применение эпитопного
картирования в научных
исследованиях
1
Разработка вакцин
2
Диагностика заболеваний
Идентификация эпитопов,
способных индуцировать
Использование эпитопного
нейтрализующие антитела,
картирования для разработки
для разработки эффективных
диагностических тестов,
вакцин против инфекционных
основанных на выявлении
заболеваний.
антител к определенным
эпитопам.
3
Терапевтические антитела
Создание терапевтических антител, нацеленных на определенные
эпитопы, для лечения рака, аутоиммунных заболеваний и других
патологий.

8.

Заключение и перспективы
развития эпитопного
картирования
Эпитопное картирование является мощным инструментом для
понимания структуры и функций белков. Развитие новых
технологий, таких как высокопроизводительное пептидное
сканирование и криоэлектронная микроскопия, открывает новые
возможности для точного и быстрого картирования эпитопов. В
будущем, метод будет играть все более важную роль в
разработке новых лекарственных препаратов и диагностических
средств.