Значение моноклональных антител. Производство моноклональных антител

1.

11.3 С. Биомедицина и биоинформатика
ТЕМА: 1-2 Значение моноклональных антител. Производство
моноклональных антител. Диагностика и лечение
заболеваний с помощью моноклональных антител.
Цель: 11.4.4.5 - объяснять использование моноклональных антител в диагностике и
лечении заболеваний
+ олимпиадный уровень: таргетная медицина на основе моноклональных антител
Критерии успеха:
• Описывать последовательность и суть этапов производства МТ.
• Описывать значение и применение моноклональных тел.
• Описывать методы диагностики с помощью моноклональных тел.

2.

1
2
3
Б Д З
4
5
Ж Г
Казалось бы ураура! Магическая
пуля в виде
моноклональных
антител получена
путем
гибридизации,
но это не
сработало на
человеке. Что
стало
препятствием в
применении?
6
7
8
Гибридомная технология:
А В Е
(1) иммунизация животных;
(2) выделение В-лимфоцитов из
селезёнки;
(3) культура клеток миеломы без ГГФТ;
(4) слияние В-лимфоцитов и клеток
миеломы с помощью вируса Сёндай;
(5) сегрегация клеточных линий в НАТ
среде;
(6) скрининг и селекция линий,
производящих антитела;
(7) размножение гибридомы in
vitro (a) или in vivo (b);
(8) получение антител.

3.

СПОСОБЫ ПРЕОДАЛЕНИЯ ОТТОРЖЕНИЯ АНТИТЕЛ
1. ХИМЕРИЗАЦИЯ
В 1997 году был одобрен ритуксимаб — антитело против белка CD20 на
поверхности В-лимфоцитов, предназначенное для лечения В-клеточных
лимфом. Для его генерации полученные гибридомным методом вариабельные
фрагменты объединили с человеческими константными доменами и таким
образом достигли содержания человеческих участков более 70%.

4.

Разница между химерным
и гуманизированным
антителами.
Синим показаны
человеческие
последовательности,
оранжевым — мышиные.
Хотя химерные антитела
оказались более эффективными и
менее иммуногенными, чем
полностью мышиные, они все же
вызывают HACA-ответ —
образование человеческих
антител против химер. Поэтому с
1980-х годов начали разработку
гуманизированных антител. КАК
ЖЕ ИХ МОЖНО ПОЛУЧИТЬ?

5.

2. ПОЛУЧЕНИЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКИХ АНТИТЕЛ
Технология дисплея (фагового)
1. Стимуляция разнообразия
генов, кодирующих
вариабельные фрагменты —
так получаются библиотеки
антител.
2. Экспрессировать эти гены, то
есть преобразовать генотип в
фенотип.
3. Осуществить селективное
давление, которое бы
заставило генотип
эволюционировать.
4. Амплифицировать
полученный результат.
Важное преимущество использования
дисплейных методов по сравнению с
гибридомными — возможность отбирать
только те антитела, которые НЕ
связываются с ненужными белками,
например, с близкими к мишени, но
которые не надо блокировать, чтобы не

6.

ПОЛУЧЕНИЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКИХ АНТИТЕЛ
Технология дисплея (фагового)Технология
использования трансгенных
1. Стимуляция разнообразия
животных, экспрессирующих
генов, кодирующих
человеческий репертуар антител.
вариабельные фрагменты —
так получаются библиотеки
антител.
2. Экспрессировать эти гены, то
есть преобразовать генотип в
фенотип.
3. Осуществить селективное
давление, которое бы
заставило генотип
эволюционировать.
4. Амплифицировать
полученный результат.
Преимущества перед дисплейными:
антитела получаются быстрее и,
поскольку отбор идет in vivo, а не in vitro,
исключено образование антител с плохой
растворимостью и другими проблемами в
дальнейшей разработке.

7.

Разнообразие функций антител. Как
можно применять моноклональные
антитела на практике?

8.

Посмотрите видео по ссылке
https://www.youtube.com/watch?v=i96HAoYP7Ow

9.

Применение антител в научной, медицинской и ветеринарной
практике
ДИАГНОСТИКА
1. Иммуноферментный анализ (ИФА) — это метод
В медицинской
диагностике с помощью
принципа
взаимодействия антигенантитело определяют
концентрации
специфических антител в
крови, выявляя текущие
или перенесенные
инфекции и заболевания,
а также гормоны и
онкомаркеры.
Диагностические
экспресс тест-системы
для ветеринарии для
«полевой» диагностики.
качественного и количественного определения
различных соединений путем образования комплекса
антиген-антитело. Один из компонентов комплекса
конъюгирован с ферментом, который окрашивается в
ходе реакции с хромогенным субстратом. Таким
образом, можно определить количество окрашенного
продукта, а, соответственно, и анализируемого
вещества.

10.

Применение антител в научной, медицинской и ветеринарной
практике
ДИАГНОСТИКА
2. Вестерн-блоттинг, или вестерн-блот, — это метод
В медицинской
диагностике с помощью
принципа
взаимодействия антигенантитело определяют
концентрации
специфических антител в
крови, выявляя текущие
или перенесенные
инфекции и заболевания,
а также гормоны и
онкомаркеры.
Диагностические
экспресс тест-системы
для ветеринарии для
«полевой» диагностики.
определения специфичных белков в образце.
Денатурированные белки разделяют по размеру
электрофорезом в полиакриламидном геле. После
этого их переносят на нитроцеллюлозную или PVDF
мембрану и детектируют заданный белок с помощью
специфичных к нему антител. Используется в
молекулярной биологии, биохимии, генетике и
материаловедении.

11.

Применение антител в научной, медицинской и ветеринарной
практике
ДИАГНОСТИКА
3. Иммунофлуоресцентный анализ (МФА) — это
В медицинской
диагностике с помощью
принципа
взаимодействия антигенантитело определяют
концентрации
специфических антител в
крови, выявляя текущие
или перенесенные
инфекции и заболевания,
а также гормоны и
онкомаркеры.
Диагностические
экспресс тест-системы
для ветеринарии для
«полевой» диагностики.
метод качественного и количественного
определения антигенов в препаратах клеток и
тканей с помощью антител, меченых
флуоресцентными маркерами. Образование
комплекса антиген-антитело затем определяется
с помощью флуоресцентного сигнала.

12.

Применение антител в научной, медицинской и ветеринарной
практике
ДИАГНОСТИКА
В медицинской
диагностике с помощью 1. Иммуноферментный
принципа
анализ (ИФА)
взаимодействия антиген-2. Вестерн-блоттинг, или
антитело определяют
вестерн-блот
концентрации
3. Иммунофлуоресцентн
специфических антител в ый анализ (МФА)
крови, выявляя текущие
или перенесенные
инфекции и заболевания,
а также гормоны и
онкомаркеры.
Диагностические
экспресс тест-системы
для ветеринарии для
«полевой» диагностики.

13.

Посмотрите видео по ссылке
Добавьте
конспект
фактами
https://youtu.be/EtFqzBZlo3Y?si=horcJHR6mRdKXOIB

14.

Применение антител в научной, медицинской и ветеринарной
практике
ДИАГНОСТИКА
ИММУНОТЕРАПИЯ – таргетное
В медицинской
диагностике с помощью 1. Иммуноферментный
принципа
анализ (ИФА)
взаимодействия антиген-2. Вестерн-блоттинг, или
антитело определяют
вестерн-блот
концентрации
3. Иммунофлуоресцентн
специфических антител в ый анализ (МФА)
крови, выявляя текущие
или перенесенные
инфекции и заболевания,
а также гормоны и
онкомаркеры.
Диагностические
экспресс тест-системы
для ветеринарии для
«полевой» диагностики.
лечение на основе
моноклональных антител
Лекарственные
препараты на основе
моноклональных
антител применяют
для лечения
ревматоидного
артрита, рассеянного
склероза, псориаза и
многих видов рака.
Чтобы предотвратить
возникновение резусконфликта
искусственно вводят
анти-D

15.

Задания из
республиканских
сборников

16.

17.

18.

ДЗ:
1. ПАРАГРАФ 54-56, записи в тетради.
2. ПОДГОТОВКА К СОР3 на вторник
3. Олимпиадникам и по желанию: Иммунотерапия
https://youtu.be/OwQ54Hje9qg?si=mutdv8pVW6WU4BXQ –Дескриптор: дополнить
конспект
ТЕМАТИЧЕСКАЯ РЕФЛЕКСИЯ:
Я НЕЙРОМИНИДАЗА – СИАЛОВАЯ КИСЛОТА
НЕПОНИМАНИЯ РАСЩЕПЛЕНА И МНЕ СТАЛИ ДОСТУПНЫ
ЗНАНИЯ ДЛЯ ПРОНИКНОВЕНИЯ В ПАМЯТЬ.
Я ФИБРИНОЛИЗИН – У МЕНЯ ОБРАЗОВАЛСЯ ТРОМБ
НЕДОПОНИМАНИЯ НЕКОТОРЫХ ПАРАМЕТРОВ ТЕМЫ, НО Я
РАСТВОРЮ ЕГО ФЕРМЕНТОМ ПОВТОРЕНИЯ И ЗНАНИЯ
СМОГУТ БЫТЬ ОСВОЕНЫ.
Я КОАГУЛАЗА – ПЛАЗМА КРОВИ МОИХ ЗНАНИЙ
СВЕРНУЛАСЬ, ВОКРУГ МЕНЯ СФОРМИРОВАЛСЯ ЧЕХОЛ,
НЕПРОНИЦАЕМЫЙ ДЛЯ ЗНАНИЙ.