Способы культивирования аэробных микроорганизмов

1.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА
№7
СПОСОБЫ
КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
АЭРОБНЫХ
МИКРООРГАНИЗМОВ

2.

ЦЕЛЬ
ЗАНЯТИЯ:
Научится культивировать бактерии на
жидких и твердых питательных средах.
Знать методы культивирования бактерий:
штрихом,
точечный,
пластинчатый,
уколом.
Искусственные питательные
среды.
Простые,
элективные
дифференциально-диагностические
питательные среды
и
Основные
требования
приготовлению питательных сред.
к

3.

Питательные среды
Питательной средой в микробиологии называют среды, содержащие различные соединения
сложного или простого состава, которые применяются для размножения бактерий или других
микроорганизмов в лабораторных или промышленных условиях.
Питательная среда должна соответствовать следующим требованиям:
● быть стерильной
● содержать все необходимые для роста питательные вещества в легко усвояемой форме;
● иметь оптимальную влажность, вязкость, рН
Рис.1 Готовая сухая питательная среда
Рис.2 Мясо-пептонный бульон и мясо-пептонный
агар

4.

ЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
Взвешивание отбирают навески компонентов питательной среды на
аналитических весах. компоненты питательной среды растворяют в
предварительно нагретой до 70 °С дистиллированной воде.
Установление оптимальной величины pH. Выполняют с применением
индикаторных бумажек. Прибор используемый для этой операции – потенциометр
или компаратор, При этом в пробирках сравнивают цвета жидкостей с эталонным
цветом.
Разлив. Осуществляется в специальные пробирки, объемом 3-5 или 10 мл или в
чашки Петри. Это могут быть также флаконы или колбы, специальные бутылки.
Стерилизация. Режим стерилизации выбирают с учетом указаний к рецепту и в
зависимости от компонентного состава.
Контроль. Стерильность контролируют, используя термостат. Для этого среду
ставят в него на двое суток. При отсутствии при осмотре признаков роста среду
считают стерильной

5.

ВИДЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
Естественные
ПО ПРИРОДЕ
ПО
КОНСИСТЕНЦИИ
Исскуственные
Жидкие
Полужидкие
Плотные

6.

ВИДЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
простые
ПО СОСТАВУ
сложные
универсальные
ПО НАЗНАЧЕНИЮ
элективные
дифференциально диагностические

7.

ВИДЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД
● Естественные среды — готовят из продуктов животного и растительного происхождения (мясо, асцит, костная
мука, кормовые дрожжи, сгустки крови и др.)
● Искусственные среды — готовят из определенных химически чистых органических и неорганических
соединений, взятых в точно указанных концентрациях и растворенных в дважды дистиллированной воде.
● Плотные и полужидкие среды отличаются от жидких наличием желирующего агента (агар-агар, реже
желатин). Кроме того, в качестве плотных сред применяют коагулирующие яичные или сывороточные белки,
картофель, среды с силикагелем.
● Простые: мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА), питательный желатин,
● Сложные — многокомпонентные среды, которые могут содержать аминокислоты, витамины, микроэлементы и
другие вещества.
● Универсальные— служат для культивирования большинства микроорганизмов, например МПБ, МПА, бульон,
шоколадный агар, пептонная вода.
● Селективные— служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.
● Элективные (избирательные) — служат для выделения определенного вида микробов, росту которых они
благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. Среды становятся
элективными при добавлении к ним определенных антибиотиков, солей, изменения pH. Жидкие элективные
среды называют средами накопления.
● Дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной
активности.

8.

Культивировании микроорганизмов
Культивирование микроорганизмов, помимо состава питательной среды, сильно зависит от физических и
химических факторов (температуры, кислотности, аэрации, света и т. д.). При этом количественные показатели
каждого из них неодинаковы и определяются особенностями метаболизма каждой группы бактерий.
Можно выделить методы культивирования на твердых и в жидких питательных средах; в аэробных, анаэробных и
микроаэрофильных условиях.
Внесение микроорганизмов в стерильную среду называется посевом, или инокуляцией.
Культивирование аэробных микроорганизмов проводят следующим образом:
– на поверхности плотных сред или в тонком слое жидких сред, когда микроорганизмы получают кислород прямо
из воздуха;
– в жидких средах (глубинное культивирование). В этом случае микроорганизмы используют растворенный в
среде кислород. В связи с низкой растворимостью кислорода, для обеспечения роста аэробных бактерий в толще
среды, требуется постоянное аэрирование.

9.

Инокуляция в питательный бульон и агар
Петлей или пипеткой отбирают материал из пробирки с
выросшей культурой и переносят в пробирку со
стерильным жидким бульоном. При этом петлю слегка
погружают в пробирку с питательным бульоном и
растирают посевной материал по стенке пробирки,
после чего его смывают средой. Выполненные посевы
помещают в термостат в вертикальном положении.
При пересеве бактерий на стерильный скошенный агар,
обе пробирки берут в левую руку, и держат так, чтобы
скошенная часть агара находилась на поверхности и
посев осуществлялся под контролем глаза. Петлю
находящуюся в правой руке стерилизуют в пламени и
дают ей остыть. Пробки из пробирок вынимают правой
рукой V и IV пальцами. Петлю держат, как писчее перо.
После вынимания пробки пробирки держат в
наклонном положении. Петлю с находящимся на ней
пересеваемым материалом вводят в пробирку со
стерильным агаром до дна, опускают на поверхность
питательной среды и скользящими движениями наносят
штрих снизу вверх, от одной стенки пробирки к другой.

10.

Культивировании микроорганизмов
Инокуляция бактериологической иглой
Пробирки со столбиком агара держат вверх дном в
левой руке. После снятия пробки горлышко пробирки
фламбируют
огнем.
Бактериологическую
иглу
прожигают в пламени, охлаждают, забирают ею
инокулируемый материал и вкалывают с находящимся
на ней материалом до дна пробирки. Пробку
фламбируют в огне, закрывают пробирку и помещают в
термостат.
Посев на поверхность агаризованной среды в чашках
Петри
можно
производить
с
помощью
бактериологической
петли,
микробиологического
шпателя. При посеве петлей отбирают клетки
микроорганизмов с агаризованной или жидкой среды,
приоткрывают крышку чашки Петри и на поверхности
среды проводят штрихи, после чего чашку закрывают и
помещают в термостат крышкой вниз.
Инокуляция
бактериологической
иглой
Инокуляция петлей на поверхность питательной
среды в чашке Петри