Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом проточной цитометрии

1.

Диагностика редких вариантов
острых лейкозов методом
проточной цитометрии
ПОДГОТОВИЛ : УСЕНОВ ЮРИЙ ЮРЬЕВИЧ
340 ГРУППА

2.

• Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей
из 100 тысяч заболевают лейкемией в
возрасте до 15 лет. Около 40-46 % случаев
приходится на детей 2-6 лет.

3.

• Хромосомные изменения обнаруживают
приблизительно у 60-70 % больных.
• неблагоприятные факторы внешней
среды: ионизирующее излучение, действие
электромагнитного поля, химических
веществ, бензола, медикаментов, в состав
которых входят алкилирующие соединения.
• вирусы (HTLV-I - Т-клеточный
лйкоз/лимфома взрослых; вирус ЭпштейнаБарр – лимфома Беркитта, Лимфома
Ходжкина)

4.

5.

• Основной клинической симптоматикой ОЛ
служат процессы гиперплазии опухолевой
ткани (бластная трансформация костного
мозга, увеличение лимфатических узлов,
органов, появление опухолевых
инфильтратов и т.д,) и признаки
подавления нормального кроветворения.

6.

Клиническая симптоматика развернутой стадии
ОЛ складывается из 5 основных синдромов:
• 1. гиперпластического
• 2. геморрагического
• 3. анемического
• 4. интоксикационного
• 5. инфекционных осложнений

7.

• Л.- опухолевые клональные заболевания
кроветворной системы с первичным
поражением костного мозга. Мишенью
опухолевой трансформации являются
стволовые кроветворные клетки и
коммитированные клеткипредшественники. Субстрат опухоли
представлен бластами.

8.

9.

FAB-классификация, 1976
• Лф: L1, L2, L3
• Миело: М0, М1,
М2, М3,М4,
М5,М6, М7

10.

Иммунофенотипирование
• CD – кластер дифференцировки
• Антитела (мембранные гликопротеины,
карбогидраты, гликолипиды)
• Проточная цитометрия является
современной технологией быстрого
оптического измерения параметров клетки,
ее органелл и происходящих в ней
процессов.

11.

12.

Образцы для проточной цитометрии
кровь
костный мозг
ликвор
суставная жидкость
плевральная жидкость
асцитическая жидкость
клетки тканей (например, опухолей)

13.

Проточные цитофлюориметры

14.

• Концепция соответствия фенотипа
злокачественной клетки фенотипу
нормального клеточного аналога на
каждом уровне дифференцировки.
В большинстве случаев ОЛ бласты имеют
иммунофенотип, сравнимый с
нормальными гемопоэтическими клетками
аналогичных стадий дифференцировки.

15.

Иммунологическая идентификация
включает:
• Определение линейной принадлежности
злокачественных клеток
• Анализ клеточного созревания, т.е. уровня
дифференцировки, степени гетерогенности
популяции злокачественных клеток
• Аберрантности, т.е. отличия от нормальных аналогов
• Клональности
• Определение количества гемопоэтических клеток
• Контроль и мониторинг эффективности терапии
• Выявление минимальной остаточной болезни

16.

17.

• Лейкемические клетки можно
отличить от их нормальных
аналогов по ряду критериев. К
основным типам аберрантности
фенотипа л.клеток относятся:

18.

• Коэкспрессия антигенов нескольких
линий
• Асинхронная экспрессия антигена
• Избыточная экспрессия антигенов
• Отсутствие экспрессии или низкий
уровень экспрессии антигена
• Фенотипический профиль,
практически не встречающийся в
норме

19.

Структура иммунологических вариантов острых
лейкозов НЦПиДХ
1,6%
24,6%
73,8%
ОЛЛ
ОМЛ
бифенотипы

20.

Частота выявления
различных фенотипических вариантов ОЛ
1,91%
1,6%
4,8%
4,0%
В1
В2
12,7%
В3
Т
6,4%
М0
9,5%
5,6%
54,0%
М1-2
М3
М4

21.

Иммунологическая диагностика бифенотипического
лейкоза
• 1995, 2009
• Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для
того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров
«чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20%
клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ
устанавливатся, если маркеры и м. и л. линии набирают
более 2 баллов. Учитывается также СИФ.

22.

Иммунологическая диагностика бифенотипического
лейкоза
Баллы
Маркеры В ряда Маркеры Т ряда Маркеры
миелоряда
2
CD79a
cyIgM
cyCD22
CD3cy/mem
TCRαβ
TCRγδ
MPO
1
CD19
CD10
CD20
CD2
CD5
CD8
CD13
CD33
0,5
TdT
CD24
TdT
CD7
CD1a
CD14
CD15
CD64
CD117

23.

За последние 5 лет в НЦПиДХ
было выявлено 6
бифенотипических лейкозов,
причем 3 из них имели фенотип
Т-линейной и миелоидной
направлений
дифференцировки, и 3 случая
В-линейной и миелоидной
направлений
дифференцировки.

24.

Суммарный иммунофенотип
Т+миело:
CD7+mCD3+CD2+CD117+CD13+CD15+HLADR+CD34+MPO+
В+миело:
CD19+CD22+CD79а+CD13+CD33+CD117+CD
15+HLA-DR+CD34+MPO+TdT+

25.

R1
100
101
100
101
102
CD45 PerCP
103
104
100
101
102
CD7 FITC
103
104
100
101
102
CD2 FITC
103
104
R1
102
CD45 PerCP
103
104
100
101
100
102
CD22 FITC
101
103
102
CD22 FITC
104
103
100
104
101
102
CD10 FITC
103
104

26.

Мегакариоцитарный лейкоз (М7)
• С 2010 по 2014гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д,
с-м Дауна - 3
• CD42a+CD42b+CD41+CD33+HLA-DR-CD34MPO• CD33+CD41a+CD42a+CD42b+CD61+HLA-DRCD34-MPO-,
• Коэкспрессия CD4, CD7, CD56

27.

Мегакариоцитарный лейкоз (М7)
07.12.10-Muhtarzhanov a-pk.444
07.12.10-Muhtarzhanov a-pk.456
R1
100
101
102
CD45 PerCP
103
104
100
07.12.10-Muhtarzhanov a-pk.449
100
101
102
103
CD20 FITC
101
102
103
CD42a FITC
104
07.12.10-Muhtarzhanov a-pk.458
104
100
101
102
103
CD37 FITC
104

28.

Эритробластный лейкоз (М6)
26.02.10-Atakulaev .334
26.02.10-Atakulaev .334
R1
0
100
200
400
600
800
26.02.10-Atakulaev
FSC-Height .344
101
102
103
CD38 FITC
1000
104
100
101
102
CD45 PerCP
103
104

29.

Плазмобластный лейкоз
16.02.10-Soltanbaev .245
15.02.10-Soltanbaev .216
R1
100
101
102
CD45 PerCP
103
104
100
101
102
103
CD38 FITC
104
16.02.10-Soltanbaev .246
15.02.10-Soltanbaev .222
100
100
101
102
CD7 FITC
103
104
101
102
103
CD38 FITC
104

30.

Спасибо за внимание!