Иммуноанализ в медицине. NAT диагностика

1.

Иммуноанализ в медицине. NAT
диагностика.
Выполнил: ст. 506 гр.
лечебного факультета
Сундуй-оол Ч. Я.

2.

Иммунохимические методы анализа, основанные на специфическом связы
Выделяют два больших периода:
-Первый - период протоиммунологии, связанный со стихийным, умозритель
-Второй этап - период экспериментальной и теоретической иммунологии - н
Чтобы лучше понять суть методов иммуноанализов, полезно осознать их от

3.

МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРЕЦИПИТАТОВ АНТИТЕЛ С
АНТИГЕНАМИ В ГЕЛЕ
Встречная иммунодиффузия по Оухтерлони и Элек:
Эти исследователи обнаружили и использовали физико-химические свойства
агарового геля, поры которого имеют размеры, достаточные, чтобы
пропустить (дать возможность диффундировать) молекулы свободных
антител и многих растворимых антигенов, но задерживающие более
крупные по размеру комплексы антител с антигенами. В результате в месте
встречи антител с антигенами выпадает осадок; в геле он виден
невооруженным глазом как полоса преципитации. Оухтерлони и Элек
подобрали концентрацию агар-агара — 1,25-1,5%.
Радиальная иммунодиффузия по Манчини:
Разработали методику радиальной иммунодиффузии (РИД) в том же
агаровом геле для количественного определения содержания в крови (в
сыворотке) иммуноглобулинов классов А, G и М.
Для этого потребовалось получить моноспецифические антисыворотки
лабораторных животных против очищенных иммуноглобулинов классов М,
А и G человека.

4.

Метод Оухтерлони и Элека:
а - линии преципитации, при диффузии двух од
б - линии преципитации, при диффузии двух р

5.

Существует много вариантов конструкций тест-систем для
иммуноанализов. Мы разберем несколько базисных.
Прямые иммуноанализы
Прямыми называют анализы, в которых метку присоединяют
непосредственно либо к заданному антигену, либо к антителу,
специфичному против искомого антигена.
Прямой вариант используют в гомогенных системах и некоторых
гетерогенных: в конкурентном, ингибиторном, сэндвич-ИФА и
иммуноферменто-метрическом анализе.
- Ингибиторный иммуноферментный анализ
- «Сэндвич»-ИФА
- Иммунометрический анализ

6.

Непрямые иммуноанализы
Непрямые методики применяют чаще, чем прямые.
Непрямым иммуноанализом называют анализ, в котором метку
присоединяют не к целевому антигену и не к антителу против целевого
антигена, а к так называемым вторым антителам - антивидовым
антииммуноглобулиновым антителам, т.е. антителам к иммуноглобулинам
того вида животных или человека, с биологическим материалом которого
работают. Таким образом, один и тот же препарат конъюгата
антиглобулиновых антител с ферментом используют в качестве
проявляющего стандартного реагента в разных тест-системах для
определения различных конкретных антигенов или антител. Непрямые
варианты ИФА не требуют очистки искомых антигенов или антител. Чистым
должен быть только препарат антивидовых антииммуноглобулиновых
антител.
- Твердофазный непрямой иммуноферментный анализ.
-Метод иммуноблота.

7.

8.

Специфичность иммуноанализов
-Специфичность диагностической тест-системы - параметр, характеризующий
ее распознавательные возможности в отношении именно данного заболевания,
которое она «не путает» с другими.
-Диагностическая эффективность - это параметр, характеризующий
возможности данной тест-системы одновременно правильно определять
позитивные пробы как позитивные, а негативные пробы - как негативные.
-Положительная предсказательная значимость (ППЗ).
-Отрицательная предсказательная значимость (ОПЗ).
Чтобы пользоваться данными характеристиками, необходимо знание реальной
распространенности данного инфекционного заболевания в обследуемых
популяциях населения.
ППЗ рассчитывают как частоту встречаемости инфицированных людей среди
всех индивидуумов, определенных данной тест-системой как позитивные:
ОПЗ тест-системы рассчитывают как частоту неинфицированных людей среди
всех индивидуумов, определенных данной тест-системой как отрицательные

9.

NAT-диагностика
Максимальной чувствительностью обладают тесты, направленные на
выявление нуклеиновых кислот вирусов, тесты называют NAT-тестами
(Nucleic Acid Tests).
За рубежом первые попытки внедрения NAT в службу крови были
предприняты еще в 1995 году. За период с 1998 по 2000 годы в США,
Канаде, Австралии, Японии и во многих Европейских странах NAT-методы
были внедрены для тестирования всех компонентов крови. В первую очередь
молекулярные методы были использованы для выявления РНК вируса
гепатита С (HCV).
Внедрение NAT методов позволило в 10 раз снизить риск инфицирования
вирусом гепатита С по сравнению с использованием одних только
серологических методов диагностики.

10.

11.

Было показано, что тестировании крови на наличие вируса гепатита В с
помощью NAT методов в формате минипулов имеет небольшую
диагностическую ценность по сравнению с высокочувствительным тестом
по выявлению HBsAg.
Высокая аналитическая чувствительность NAT методов позволяет
тестировать как индивидуальные образцы, так и несколько образцов крови
(от 6 до 24), объединенных в один минипул.
В России NAT-тестирование проводится только в добровольном порядке и
только в некоторых регионах, по скольку требует серьезных денежных
вложений, специальных лабораторий и грамотного, хорошо обученного
медицинского персонала. Те единичные станции переливания крови (СПК),
которые используют молекулярные методы, работают только на
отечественных тест системах.

12.

Таким образом, актуальность внедрения молекулярных методов в службу кро

13.

Литература:
1. Иммунология т.1, под ред. У. Пола.
2. Зарождение иммунологии, Т.И. Ульянкина.
3.Теория и практика иммуноанализа, А.М. Егоров, А.П. Осипов, Б.Б. Дзантие