Фенотипические особенности макрофагов плаценты у женщин с COVID-19

1.

1
2
ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МАКРОФАГОВ
ПЛАЦЕНТЫ У ЖЕНЩИН С COVID-19
Дальневосточный научный центр
физиологии и
патологии дыхания
Автор: Лязгиян Карен Саргисович, лаборант-исследователь лаборатории «Механизмов
этиопатогенеза и восстановительных процессов дыхательной системы при НЗЛ»
Научный руководитель: д.б.н., профессор РАН Андриевская И. А.
Плацентарные макрофаги представляют собой гетерогенную популяцию иммунных клеток, присутствующих на протяжении всей беременности. Они необходимы для поддержания
гомеостатической среды плаценты и защиты хозяина от инфекций. Плацентарные макрофаги состоят из двух различных популяций - децидуальных макрофагов и клеток
Гофбауэра; они обнаруживаются уже на 10-й день беременности и присутствуют в течение всех трех триместров беременности. Разнообразие этих макрофагов было сильно
недооценено, и большинство исследований ограничивалось иммуногистохимической характеристикой и выводами из того, что было зарегистрировано в других резидентных
макрофагах. Изучение тканевых макрофагов было революционизировано благодаря развитию беспристрастных методов, таких как многопараметрическая проточная цитометрия.
Выделение человеческих макрофагов из плаценты оказалось наиболее удобным подходом для характеристики макрофагов и функциональных исследований. Фенотипический анализ
макрофагов
Материалы и методы
Результаты исследования и их обсуждение.
Проспективное исследование по типу случай-контроль включало обследование 125 рожениц
с диагнозом «COVID-19», среднетяжелое/тяжелое течение, внебольничная пневмония
вирусной этиологии и их новорожденных детей (основная группа). Пациенты основной
группы в зависимости от тяжести течения внебольничной пневмонии были разделены на две
подгруппы: 1 подгруппа – легкое течение заболевания (ОРВИ) – 74 случая, 2 группа –
средне-тяжелое течение пневмонии – 51 случай. Контрольную группу составили 28
практически здоровых рожениц. Источником материала служили плаценты, полученные в
срок 38-40 недель беременности. Ткань была обработана с использованием различных
растворов и методов, включая трипсин, коллагеназу, и диссоциацию клеток. Полученная
клеточная суспензия была подвергнута центрифугированию, наложению на фиколл, и
последующему отделению клеток. Клеточные агрегаты были анализированы с
использованием моноклональных антител, включая TRAIL (CD253), IL2R (CD25), IL17R
(CD217), TNFR1 (CD120А), TNFR2 (CD120В), TGFβR2, VEGFR1 (CD309), с последующим
анализом методом проточной цитометрии.
Анализ фенотипов популяций плацентарных макрофагов в исследуемых группах показал,
что, количество TNFR1 (CD120А)-позитивных макрофагов в плаценте в подгруппе 2 (17,13
(15,71;17,79)%, р<0,0001) было выше контроля (12,2 (10,35;13,5)%) и подгруппы 1 (13,97
(13,17;14,84)%, р<0,0001). В подгруппе 1 TNFR1 был выше контроля (р=0,002). При этом
экспрессия TNFR2 (CD120В) на макрофагах в подгруппе 2 была значимо ниже (2,7
(2,1;3,65)), чем в контроле (6,35 (5,52;6,95), р<0,0001) и в подгруппе 1 (4,2 (3,4;5,25),
р<0,0001). В подгруппе 1 TNFR2 был ниже контроля (р<0,0001). Количество TRAIL (CD253) в
макрофагах плаценты в подгруппе 2 был выше (21,25 (16,87;28,32)%, р<0,0001), чем в
контроле (9,71 (8,46;10,74)%) и в подгруппе 1 (14,88 (14,19;15,98)%, р<0,0001). В подгруппе
1 TRAIL был также выше контроля (р<0,0001). Также был выше уровень экспрессии IL2R
(CD25) на макрофагах плаценты в подгруппе 2 (9,22 (8,39;9,97)%, р<0,0001), чем в
подгруппе 1 (7,61 (6,2;9,28)%). В контроле количество макрофагов, эспрессирующих IL2R,
было низким (2,75 (1,95;3,37)%). Аналогичные изменения прослеживались в экспрессии
IL17R (CD217). Количество рецептора на макрофагах в подгруппе 2 было выше (29,27
(28,3;31,52)%, р<0,0001), чем в подгруппе 1 (12,7 (11,04;13,85)%). В контроле IL17R был
низким (5,03 (3,75;6,34)%). Не было исключением повышение количества TGFbR2 на
макрофагах плаценты в подгруппе 2 (9,73 (8,4;10,59)%, р<0,0001) относительно подгруппы 1
(7,51 (6,39;8,05)%). В контроле TGFbR2 был низким (4,1 (3,32;4,57)%). Обращало внимание
снижение количества макрофагов в плаценте, экспрессирующих VEGFR2 (CD309), в
подгруппе 2 (3,99 (3,38;5,4)%, р<0,0001) относительно контроля (18,15 (13,27;22,12)%) и
подгруппы 1 (5,42 (4,54;6,5)%, р<0,0001). В подгруппе 1 VEGFR2 был ниже контроля
(р<0,0001).
35
*
30
легкое течение
25
20
15
*
*
*
средне-тяжелое
течение
*
*
*
10
5
*
*
*
контроль
**
0
TNFR1
TNFR2
TRAIL
IL2R
IL17R
TGFbR2
*
VEGFR2
Рис.1. Культура плацентарных макрофагов. Цифровая
микроскопия. Увеличение 60.
Рис.2. Показатели экспрессии поверхностных антигенов на
макрофагах плаценты в исследуемых группах.
Рис.3. Экспрессия различных поверхностных антигенов на
макрофагах плаценты. Контрольная группа. Метод проточной
цитофлуометрии.
Рис.4. Экспрессия различных поверхностных антигенов на
макрофагах плаценты. COVID-19. Метод проточной
цитофлуометрии.
Вывод: Полученные результаты подтверждают, что дифференцировка моноцитов крови пуповины, попадающих в ворсины
плаценты, происходит в направлении М1-фенотипа плацентарных макрофагов, что вносит существенный вклад в развитие
плацентарных нарушений у женщин с COVID-19. Возможно, что осложнения беременности у женщин с COVID-19 в зависимости от
степени инфицирования будут связаны с воспалительными изменениями ворсин плаценты и ее сосудистого русла, что требует
дальнейших изучений и подтверждений.