Иммуноферментный анализ

1.

Иммуноферментный
анализ
ВЫПОЛНИЛ:САПАЙ БАСИР МС -217

2.

Определение
Иммуноферментный анализ (сокращённо ИФА) — лабораторный иммунологический
метод качественного или количественного определения различных низкомолекулярных
соединений, макромолекул, вирусов и пр., в основе которого лежит специфическая
реакция антиген-антитело.

3.

Физико-химические взаимодействия
Иммунохимическая реакция в растворе протекает в
несколько стадий, первой из которых является
обратимое образование комплекса между антителами
и антигенами состава 1:1 (вследствие наличия в
молекуле антител более одного центра связывания
для поливалентных антигенов возможно дальнейшее
многостадийное образование сложных комплексов с
различным соотношением компонентов).
Образование комплекса
обеспечивается гидрофобными, ионными, ван-дерваальсовыми и водородными связями

4.

Взаимодействие антигена с
субпопуляцией антител
Ранее для количественного описания эффективности взаимодействия антиген-антитело за
основу была взята простая модель взаимодействия одновалентного антигена и
одновалентного антитела. Но так как молекула антитела имеет несколько
антигенсвязывающих центров и, кроме того, способна взаимодействовать с несколькими
антигенными детерминантами одной молекулы антигена, то такая характеристика
образования иммунохимического комплекса является весьма упрощённой. Для описания
более близкого к реальности процесса взаимодействия поливалентного антитела с
поливалентным антигеном введён термин авидность, или функциональная
аффинность (функциональное сродство). С биологической точки зрения именно
функциональная аффинность играет основную роль в иммунном ответе на инфицирование
организма вирусами или бактериями, имеющими на своей поверхности повторяющиеся
антигенные детерминанты.

5.

Каталитические свойства ферментов
На скорость ферментативной реакции оказывают влияние различные факторы, среди
которых основными являются:
1. температура,
2. природа и pH буфера,
3. субстраты,
4. коферменты,
5. эффекторы,
6. количество белка в системе.

6.

Принцип прямого ИФА
разноцветные круги — различные антигены из внесённой в лунку
сыворотки;
Y с лиловой точкой — антитела, меченные ферментом, обеспечивающим
цветовую реакцию (конъюгат).
Принцип непрямого неконкурентного ИФА
Принцип непрямого неконкурентного ИФА «сэндвич»
синие круги — антиген, иммобилизированный на поверхности лунки;
Y, Y, Y, Y — антитела из внесённой в лунку сыворотки;
Y с лиловой точкой — антитела, меченные ферментом, обеспечивающим
цветовую реакцию (конъюгат).
разноцветные круги — различные антигены из внесённой в лунку сыворотки;
Y — антитела, иммобилизированные на поверхности лунки;
Y с лиловой точкой — антитела, меченные ферментом, обеспечивающим цветовую реакцию
(конъюгат)
Принцип прямого конкурентного ИФА
Принцип непрямого конкурентного ИФА
синие круги — антиген, иммобилизированный на поверхности лунки;
Y, Y, Y, Y — антитела из внесённой в лунку сыворотки;
Y с лиловой точкой — антитела, меченные ферментом, обеспечивающим цветовую реакцию (конъюгат).
большие жёлтые круги — конъюгат антиген-белок, иммобилизированный на поверхности
лунки;
малые красный, зелёный и синие круги — различные антигены из внесённой в лунку
сыворотки (например, наркотические вещества);
Y — немеченые антитела, специфические к конкретному антигену;
Y с лиловой точкой — вторичные антивидовые антитела, меченные ферментом,
обеспечивающим цветовую реакцию (конъюгат).

7.

Классификация методов ИФА

8.

96 ячеечный микропланшет,
используемый для постановки ИФА

9.

Особенности и проблемы ИФА
Как любые иммунохимические методы анализа, ИФА может давать ложноположительные
и ложноотрицательные результаты. Например, ложноположительные результаты при
определении антител к различным инфекциям могут возникнут за счёт ревматоидного
фактора, представляющего собой иммуноглобулин M против собственных
иммуноглобулинов G человека; за счёт антител, образующихся при различных системных
заболеваниях, нарушениях обмена или приёме лекарственных препаратов; у
новорождённых такие ложноположительные реакции могут возникать за счёт образования
в организме ребёнка M-антител к иммуноглобулину G матери.

10.

Основные типы тест-систем в зависимости
от используемых антигенов
В зависимости от того, какие антигены используются, иммуноферментные
тест-системы подразделяют на:
1. Лизатные — в которых используется смесь нативных антигенов
(лизированный или обработанный ультразвуком возбудитель инфекции,
полученный в культуре);
2. Рекомбинантные — в которых используются полученные генноинженерным способом белки-аналоги определённых белковых антигенов
возбудителя;
3. Пептидные — использующие химически синтезированные фрагменты
белков.

11.

Перспективы и развитие метода

12.

Спасибо за внимание