Санкт-Петербург Научно-производственная фирма «АБРИС+»

Острый монобластный лейкоз с созреванием (М5)

Монетные столбики (множественная миелома)

Идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура

Т-клеточный лейкоз из крупных гранулярных лимфоцитов (1)

Т-клеточный лейкоз из крупных гранулярных лимфоцитов (2)

Лимфома Беркитта (Острый лейкоз Беркитта)

30.04M

Category:

medicine

Диагностика заболеваний. Гематологический атлас

1. Санкт-Петербург Научно-производственная фирма «АБРИС+»

Диагностика
заболеваний
Гематологический
атлас

3.

Этапы морфологического
анализа:
забор биоматериалов и
приготовление препарата
фиксация и окрашивание
материала
исследование под
микроскопом

Характеристики клеток, которые должны быть
выявлены после применения красителей:
окраска гемоглобина розовая
зернистость нейтрофилов хорошо
прокрашивается в виде фиолетового
окрашивания на розовом фоне
выявляется нежная азурофильная
зернистость моноцитов
ядра лейкоцитов фиолетово-красного
цвета с хорошо видимой структурой
хроматина
хорошо выделяются ядрышки
цитоплазма нейтрофилов светлорозовая

5.

Красители производства «Абрис+»
Диахим-ГемиСтейн-Р (по
Романовскому)профессионал
Диахим-ГемиСтейн-Р (по
Романовскому)классик
Диахим-ГемиСтейн-МГ (по МайГрюнвальду)
Диахим-ГемиСтейн-Л (типа Лейшман)

6.

Метод окраски препаратов крови и костного
мозга Паппенгейма-Крюкова:
комбинированная окраска фиксаторомкрасителем по Май-Грюнвальду и
раствором красителя по Романовскому.
погрузить мазки в краситель-фиксатор
Диахим-ГемиСтей-МГ(по Май-Грюнвальду)
или Диахим-ГемиСтей-Л (типа Лейшман) и
выдерживать в течение 2-3 минут;
ополоснуть препараты в буферном
растворе;
приготовить рабочий раствор красителя
Диахим-ГемиСтей-Р: смешать краситель с
буферным раствором в соотношении 1:10 1:15 и профильтровать;
зафиксированные мазки крови погрузить в
рабочий раствор красителя ДиахимГемиСтей-Р (по Романовскому) на 10-12
мин;
препараты промыть буферным раствором,
высушить на воздухе и микроскопировать.

7.

Окраска биопрепаратов:
фиксация красителем-фиксатором Диахим-
ГемиСтей-МГ не более 1 минуты
окраска раствором красителя ДиахимГемиСтей-Р (по Романовскому)в разведении
1 : 10 и даже 1: 15 в течение 3 мин.

8.

Режим окраски препаратов крови с использованием
красителя Диахим-ГемиСтейн-Р-классик
погрузить мазки в
краситель-фиксатор
Диахим-ГемиСтей-МГ(по
Май-Грюнвальду) или
Диахим-ГемиСтей-Л (типа
Лейшман) и выдерживать в
течение 2-3 минут;
ополоснуть препараты в
буферном растворе;
приготовить рабочий
раствор красителя ДиахимГемиСтей-Р: смешать
краситель с буферным
раствором в соотношении
1:20 - 1:30 и
профильтровать;
зафиксированные мазки
крови погрузить в рабочий
раствор красителя ДиахимГемиСтей-Р (по
Романовскому) на 20-45
мин;
препараты промыть
буферным раствором,
высушить на воздухе и
микроскопировать.

9.

Режим окраски препаратов крови с использованием
красителя Диахим-ГемиСтейн-МГ
погрузить мазки в краситель-фиксатор
Диахим-ГемиСтей-МГ(по Май-Грюнвальду) и
выдерживать в течение 2-3 минут;
ополоснуть препараты в буферном
растворе;
приготовить рабочий раствор красителя
Диахим-ГемиСтей-МГ: смешать краситель с
буферным раствором в соотношении 1:3 и
профильтровать;
зафиксированные мазки крови погрузить в
рабочий раствор красителя ДиахимГемиСтей-МГ (по Май-Грюнвальду) на 10-12
мин;
препараты промыть буферным раствором,
высушить на воздухе и микроскопировать.

10.

Окраска ретикулоцитов
Смешать в пробирке раствор красителя
ЦитоСтейн-Ртц и кровь в соотношении 1:1 1:4.
Выдержать при комнатной температуре в
течение 30-40
минут.
Приготовить мазки и микроскопировать.

11.

Цитохимия

12.

ДИАХИМ- ЦИТОСТЕЙН- МПО
Набор реагентов для цитохимического определения пероксидазы в лейкоцитах
Реагенты, вошедшие в набор:
Бензидин (или орто-толидин).
Перекись водорода 3%.
Краситель «Диахим- ГемиСтейн-Р» (по
Романовскому).
Набор обеспечивает окраску 12 препаратов.
Принцип реакции:
Пероксидаза является ферментом лизосомальной каталазой, катализирующей
в присутствии перекиси водорода окисление
различных субстратов. При окислении
ортотолидина или бензидина, используемых
в реакциях, образуются интенсивно
окрашенные соединения, в том случае, если
в клетке присутствует пероксидаза, при
взаимодействии с которой перекись
водорода разрушается с выделением
кислорода, который и окисляет орто-толидин
или бензидин, переводя их в окрашенные
соединения.
МПО-маркер клеток гранулоцитарного ряда
со стадии маелобласта

13.

ДИАХИМ – ЦИТОСТЕЙН - ПАС
Набор реагентов для цитохимического определения гликогена в лейкоцитах.
Реагенты, вошедшие в набор:
йодная кислота;
реактив Шиффа.
гематоксилин Майера.
Набор обеспечивает 6 исследований (от1 до 10
препаратов за 1 исследование).
Принцип реакции:
Механизм РАS- реакции основан на окислении
йодной кислотой гликолевых групп, или их
амино- или алкиламино- производных до
альдегидов. Альдегидные группировки при
взаимодействии с реактивом Шиффа
образуют продукт красного цвета.

14.

ДИАХИМ – ЦИТОСТЕЙН - СЧ
Набор реагентов для цитохимического определения фосфолипидов в лейкоцитах с помощью
судана черного Б.
Реагенты, вошедшие в набор:
спиртовой раствор судана черного Б – 2фл.
спиртовой раствор фенола - 2фл.
бифосфат натрия кристаллический – 6фл.
Набор обеспечивает 6 исследований (от 1 до10
стекол за 1 исследование).
Принцип реакции:
Выявление фосфолипидов основано на
применении липофильных красителей,
растворяющихся и избирательно
концентрирующихся во внутриклеточных
липидах.
Окрашивание липидов – маркерный признак
молодых,незрелых и зрелых клеток
гранулоцитарного ряда.

15.

ДИАХИМ- ЦИТОСТЕЙН-ХЭ.
Набора реагентов для цитохимического определения хлорацетат эстеразы в лейкоцитах.
Реагенты, вошедшие в набор:
Нафтол-АSD-хлорацетат
Трис-буфер ( рН 7,1)
Прочный синий РР.
Набор обеспечивает 10исследований
Принцип реакции:
Субстратом неспецифических эстераз являются
эфиры карбоновых кислот. Метод основан на
том, что азокраситель, образующийся
при сочетании освобождающегося при гидролизе альфа-нафтола с
различных стабилизированными диазотами, осаждается в месте локализации фермента в нейтральной среде.
В цитоплазме клетки определяются мелкие синефиолетовые
гранулы.

16.

ДИАХИМ- ЦИТОСТЕЙН-НЭ.
Набора реагентов для цитохимического определения неспецифической эстеразы в лейкоцитах.
Реагенты, вошедшие в набор:
1. Альфа-нафтилацетат.- 1фл.
2. Прочный синий «Б» - 10фл.
3. Фосфатный буфер -1 фл.
4. NaF -10фл.
Набор обеспечивает 10исследований.
Принцип реакции:
Альфа-нафтилацетат эстераза ускоряет гидролизное расщепление альфанафтилацетата до уксусной кислты
и альфа-нафтола, чье соединение
с диазониевой солью образует
красно-коричневое окрашивание,
нерастворимое в воде.

17.

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН - КФ
Набор реагентов для определения активности
кислой фосфатазы в лейкоцитах.
Реагенты:
1.Нафтол AS-фосфат - 12 флаконов
2.Диметилформамид-1 флакон;
3.Ацетат натрия – 1 флакон
4.Парарозанилин – 1 флакон
5.Азотистокислый натрий – 1 флакон
6.Тартрат натрия - 1 флакон
Принцип метода:
Цитохимиченское выявление кислой
фосфаитазы в световом микроскопе
основано на образовании нерастворимогог
окрашенного осадка в местах, где
происходит гидролиз субстрата, который
катализирует кислая фосфатаза.
КФ иммет особое значение для д-ки острых
лейкозов,злокачественных
лимфом,миеломной
болезни,ВКЛ.Определение активности КФ
при ОЛЛ отличить бласты Т-клеточной
природы от лейкемических клеток Вклеточной природы

18.

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН - ЩФ
Набор реагентов для определения активности
щелочной фосфатазы лейкоцитах.
Реагенты:
1.a-нафтилфосфат натрия- 6 флаконов
2.Прочный синий РР-6 флаконов;
3.Пропандиоловый буфер - 1 флакон
4.Метиловый зеленый - 1 флакон
Принцип метода:
В основе лежит метод азосочетаниярасщепление щелочной фосфатазой aнафтилфосфата с освобождением aнафтола,образующего с солями диазония
нерастворимый окрашенный в коричневый
цвет осадок в местах локализации
фермента.

19.

ДИАХИМ-ЦИТОСТЕЙН-С
Набор реагентов для цитохимического определения сидеробластов и сидероцитов в клетках
эритроидного ряда.
Принцип метода.
Использование реакции с берлинской лазурью,
основанное на образовании
ферриферроцианида при взаимодействие
ионов трехвалентного железа с
ферроцианидом в кислой среде. Реакция
проявляется в виде образования синего или
зеленого осадка ферриферроцианида.
Состав набора
Реактив для фиксации мазков - 1 флакон
(100 мл)
Желтая кровяная соль (20%) - 3 флакона
(по10 мл)
Концентрированная хлористоводородная
кислота - 1 флакон (8,2 мл)
Сафранин (0,1%) - 1 флакон (100 мл).

20.

Эритропоэз (1)
Нормальная периферическая кровь
Эритробласты
Нормобласты
Нормобласты

21.

Эритропоэз (2)
Стоматоциты
Нормоциты
Каплевидные эритроциты и овалоциты
Ретикулоциты

22.

Эритропоэз (3)
Макроциты
Микроциты
Сфероциты
Эхиноциты

23.

Тельца Жолли
Эритропоэз (4) Монетные столбики
Каплевидные эритроциты
Тельца Паппенгейма

24.

Гранулопоэз (1)
Миелобласты
Нейтрофильные миелоциты
Промиелоциты
Нейтрофильные миелоциты

25.

Гранулопоэз (2)
Нейтрофильный метамиелоцит
Нейтрофильные метамиелоцит и миелоцит
Эозинофильные миелоциты и метамиелоциты
Нейтрофилы

26.

Гранулопоэз (3)
Базофилы
Пельгеровская аномалия
Токсическая зернистость в нейтрофиле
Вакуолизация нейтрофила

27.

Лимфопоэз
Лимфобласт
Лимфоциты
Лимфоциты

28.

Моноцитарный ряд
Монобласт
Промоноцит
Моноциты

29.

Тромбопоэз
Мегакариобласт
Мегакариоцит
Промегакариоциты
Тромбоциты

30. Нормальная периферическая кровь

31. Нормальный костный мозг

32.

Морфологические варианты острых
миелоидных лейкозов (по ФАБклассификации).
Острый миелобластный лейкоз с
минимальной дифференцировкой
бластов (вариант Мo)
Острый миелобластный лейкоз без
созревания (М1)
Острый миелобластный лейкоз с
созреванием (М2).
Острый промиелоцитарный лейкоз
(М3)
Острый миеломонобластный лейкоз
(М4)
Острые монобластные лейкозы М5а
Острые монобластные лейкозы М5б
Острый эритромиелоз.
Острый мегакариобластный лейкоз.

33.

•ВОЗ-классификация ОЛ
1.
ОМЛ с повторяющимися генетическими нарушениями:

ОМЛ с t(8;21)(q22;q22), (AML1/ETO);

ОМЛ с избытком эозинофилов и inv16(q13;q22) t(16;16)(p13;q22), (CBF /MYH11) = ФАБ М4эо;

Острый промиелоцитарный лейкоз (ОПЛ) с t(15;17)(q22;q12), (PML/RAR ) = ФАБ М3;

ОМЛ с 11q23 (MLL).
2.
ОМЛ с мультилинейной дисплазией:

Вследствие МДС или других миелопролиферативных заболеваний;

Без предшествующих МДС или других миелопролифераций, но с дисплазией, по крайней мере, 50%
клеток в двух или более миелоидных линиях
3.
ОМЛ и МДС, связанный с предшествующим лечением:

Вариант, связанный с использованием алкилирующих препаратов или гамма-облучением;

Вариант, связанный с использованием ингибиторов топоизомеразы II (иногда развиваются
лимфопролиферации);

Другие варианты
4.
Другие категории ОМЛ

ОМЛ с минимальной дифференцировкой (= ФАБ М0);

ОМЛ без созревания (= ФАБ М1);

ОМЛ с созреванием (= ФАБ М2);

Острый миеломоноцитарный лейкоз (= ФАБ М4);

Острый монобластный/острый моноцитарный лейкоз (ФАБ М5а/5б);

Острый эритроидный лейкоз: эритроидный/миелоидный ( 50% эритроидных предшественников + 20%
бластов; = ФАБ М6) и истинный эритролейкоз (80% незрелых эритроидных прешественников);

Острый мегакариобластный лейкоз (= ФАБ М7);

Острый базофильный лейкоз;

Острый панмиелоз с миелофиброзом (= острый миелофиброз);

Миелоидная саркома

34.

Острый миелобластный лейкоз
с минимальной миелоидной
дифференцировкой бластов (М0)

35.

Острый миелобластный лейкоз без
созревания (М1)
Судан Ч
МПО
Окраска МГ+Романовский

36.

Острый миелобластный лейкоз с созреванием
(М2)
Окраска по Паппенгейму (МГ+Ром)
МПО
Окраска Суданом черным

37.

Острый промиелоцитарный лейкоз (М3)
Окраска по Паппенгейму (МГ+Ром)
МПО
Окраска Суданом черным В
Окраска на ХЭ

38.

Острый миеломонобластный лейкоз (М4)
Окраска по Паппенгейму (МГ+Ром)
Окраска на НЭ

39.

•Неспецифическая эстераза (М4)

40.

Острый монобластный лейкоз без созревания
(М5а)
Окраска по Паппенгейму (МГ+Ром)
НЭ

41.

Острый монобластный лейкоз с созреванием
(М5b)
Окраска по Паппенгейму
(МГ+Ром)
НЭ

42. Острый монобластный лейкоз с созреванием (М5)

43.

Острый эритромиелоз
(М6)

44.

Острый мегакариобластный лейкоз (М7)

45. Острый мегакариобластный лейкоз (М7)

46. Острый мегакариобластный лейкоз (М7)

47.

Острый лимфобластный лейкоз (L1)
Отрицательная реакция на МПО

48.

Острый лимфобластный лейкоз (L2)
Отрицательная реакция на НЭ

49.

Острый лимфобластный лейкоз (L3)
Положительная ПАС-реакция

50.

Хронический миелолейкоз

51.

Хронический лимфолейкоз

52.

Волосатоклеточный лейкоз

53.

Миелодиспластический синдром (МДС)
Миелодиспластические синдромы-
гетерогенная группа заболеваний, в основе развития которых лежит
повреждение полипотентной стволовой кроветворной клетки. Эти клональные
нарушения характеризуются неэффективным гемопоэзом, сопровождающимся
развитием рефрактерной анемии, анемии, лейкопении и\или тромбоцитопении
и диспластическими изменениями клеток основных ростков миелопоэза.
ФАБ – классификация МДС:
-рефрактерная анемия (РА)
-рефрактерная анемия с кольцевыми сидеробластами (РАКС)
-рефрактерная анемия с избытком бластов (РАИБ)
-рефрактерная анемия с избытком бластов в трансформации (РАИБ-Т)
-хронический миеломоноцитарный лейкоз (ХММЛ)
-хронический миеломоноцитарный лейкоз с трансформацией (ХММЛ-Т)
-рефрактерная анемия с мультипотентной дисплазией (неклассифицированный
МДС-МДС-Н)

54.

ФАБ-классификация миелодиспластического синдрома
Процент
бластов в
крови
Процент
бластов в
костном
мозге
РА
<1
<5
<15
<1
РАКС
<1
<5
>15
<1
РАИБ
<5
5-20
Варьирует
<1
РАИБ-Т
>5
21-30
Варьирует
<1
ХММЛ
<5
5-20
Варьирует
>1
Вариант
Процент
кольцевидных
сидеробластов
Содержание
моноцитов в
крови (109\л)