Транскрипция у эукариот Лекция 8
Словарик
Словарик
Особенности транскриптона эукариот
Структура промотора эукариот
Факторы транскрипции эукариот
Ядерные РНК-полимеразы
РНК-полимераза I
РНК-полимераза I. Функции
РНК-полимераза III
РНК-полимераза III. Функции.
РНК-полимераза II
РНК-полимераза II. Функции
Основные стадии транскрипции
Инициация транскрипции «в комиксах»
Инициация транскрипции «в комиксах»
Инициация транскрипции + Pol II «в комиксах»
Инициация транскрипции + Pol II «в комиксах»
Инициация транскрипции + Pol II «в комиксах»
Элонгация транскрипции «в комиксах»
Элонгация транскрипции «в комиксах»
Терминация транскрипции «в комиксах»
Регуляция транскрипции
Некодирующие регуляторные элементы
Энхансеры. Структура.
Энхансеры: «петлевая модель» действия
Инсуляторы (англ. insulate - изолировать )
Механизм действия инсуляторов
Механизм действия инсуляторов
6.55M
Category: biologybiology

Лекция 8. Молекулярная генетика. Транскрипция РНК эукариот

1. Транскрипция у эукариот Лекция 8

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА

2. Словарик

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА. ТРАНСКРИПЦИЯ РНК ЭУКАРИОТ

3. Словарик

– процесс переноса остатка фосфорной
кислоты от фосфорилирующего агента-донора к субстрату,
катализируется киназами
– замещение атомов водорода в органических
соединениях остатком уксусной кислоты CH3CO (ацетильной группой),
катализируется ацетилтрансферазами
– последовательности ДНК, усиливающие транскрипцию
при взаимодействии со специфическими белками
– последовательности ДНК репрессирующие активность
генов, ослабляющие транскрипцию при взаимодействии с белками
– последовательности ДНК, определяющие
специфичность действия энхансеров и сайленсеров

4.

5.

6. Особенности транскриптона эукариот

1
• единица транскрипции – ген
2
• оператор отсутствует
3
• иная структура промотора

7. Структура промотора эукариот

На расстоянии -25 п.н. от +1 нукл. находится ТАТА-бокс, его
позиция определяет точку инициации транскрипции
На расстоянии -60-80 п.н. находится ЦААТ-бокс
Расстояние между ЦААТ и ТАТА большое и РНК-полимераза не
способна накрыть всю эту область. ЦААТ опознается своим
белком, а ТАТА - своим.

8. Факторы транскрипции эукариот

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА. ТРАНСКРИПЦИЯ РНК ЭУКАРИОТ

9.

10. Ядерные РНК-полимеразы

РНК-полимераза I
РНК-полимераза II
РНК-полимераза III

11. РНК-полимераза I

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА. ТРАНСКРИПЦИЯ РНК ЭУКАРИОТ

12. РНК-полимераза I. Функции

РНК полимераза I транскрибирует гены 18S, 5.8S и 28S
Транскрипция генов rРНК и сборка рибосом происходит в
ядрышке

13.

У
промотор гена
предшественника rРНК
состоит из двух участков:
(core promoter
element)
(upstream control
element).
С этими участками
связываются белковые
комплексы SL1 и UBF

14.

В состав SL1 входит
белок
(TATA-box
binding protein), хотя в
промоторе rРНК нет ТАТА
последовательности.
В SL1 входят также три
дополнительных белка,
называемых
,
и
.

15.

Факторы регулирующие
транскрипцию rРНК,
ассоциированы с РНКполимеразой I
Белок
связывает
полимеразу и SL1
- другой белок
млекопитающих,
ассоциированный с
полимеразой,
взаимодействует с

16.

Транскрипционная активность
РНК полимеразы I зависит от:
1. фазы клеточного цикла
(ингибируется при митозе);
2. пролиферативной
активности клеток (при
интенсивном делении
требуется много rРНК).

17.

РНК-полимераза I должна
быть фосфорилирована для
успешного взаимодействия с

18.

Активность основных
факторов инициации
(
и
) регулируется в
зависимости от фазы
клеточного цикла:
1.
инактивируется в
митозе при помощи
фосфорилирования.
2.
активируется
фосфорилированием в G1
фазе.

19.

Концентрация активного
регулируется связыванием с
белком, ассоциированным с
ретинобластомой
Его ингибирующая активность
подавляется при
фосфорилировании в S фазе.
Подобным образом
инактивирует
, входящий в
состав

20.

Белок
способствует
передвижению нуклеосом по
ДНК для эффективной
транскрипции РНК
полимеразой I.

21. РНК-полимераза III

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА. ТРАНСКРИПЦИЯ РНК ЭУКАРИОТ

22. РНК-полимераза III. Функции.

РНК полимераза III транскрибирует гены 5S
,
и

23.

Ген
rРНК содержит
внутренний промотор,
области и

24.

, 5S rРНК
специфичный
транскрипционный фактор,
взаимодействует с
последовательностью
внутри гена 5S rРНК.
Это приводит к посадке
белкового комплекса –

25.

связывает последовательность ДНК,
без этого невозможна
эффективная транскрипции
гена.
После соединения

геном 5S rРНК связывается

26.

В состав
входит
фактор способствует
присоединению РНК
полимеразы III и началу
транскрипции

27.

Гены
содержат
дополнительный участок
ДНК – , способствующий
связыванию
.
Белок-белковое
взаимодействие
и
заменяется ДНКбелковым.
Далее,
присоединяет
и

28.

Регуляторные элементы
промотора генов
расположены вне
транскрибируемой области

и
последовательности
представляют ближний и
дальний элементы
промотора.

29.

С
связывается белок
С
– фактор
.
Связывание
и
приводит к присоединению

30.

Промотор содержит
.
Промоторы
,
транскрибируемых РНК
полимеразой III схожи с
промоторами РНК
полимеразы II.
Для всех трех типов
промоторов общий
механизм - это

31.

транскрипции
для РНК полимеразы III
изучена плохо.
Известно, что транскрипты
оканчиваются
последовательностью, с
которой связывается белок
,
способствующий
и стабильности
транскриптов

32.

,
регулируется в
зависимости от фазы
клеточного цикла

33.

направлено на
подавление
транскрипции во время
митоза.
La белок активируется
при фосфорилировании

34.

Транскрипция РНК
полимеразой III
чувствительна к
структуре

35.

Субъединица
kD
фактора
способна
ацетилировать гистоны
и, таким образом,
изменять структуру
хроматина,
благоприятным для
транскрипции образом

36. РНК-полимераза II

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА. ТРАНСКРИПЦИЯ РНК ЭУКАРИОТ

37. РНК-полимераза II. Функции

транскрибирует
, а также некоторые
наиболее подверженный регуляции фермент из трех РНК
полимераз
состоит из 17 субъединиц, одной из особенностей строения
наибольшей субчастицы РНК полимеразы II является ее Сконцевой домен
, построенный из повторяющихся
гептамеров. Количество этих повторов варьирует для разных
организмов, составляя в среднем несколько десятков.
Последовательное укорочение С-концевого домена приводит
к гибели клеток.

38.

39.

40. Основные стадии транскрипции

Инициация
• Образование базального комплекса
• Начало синтеза цепи РНК
Элонгация
• Продолжение процесса транскрипции,
рост дочерней цепи РНК
Терминация
• Завершение процесса транскрипции

41.

42.

43. Инициация транскрипции «в комиксах»

ДНК
К цепи подходит
фактор
транскрипции TFIID
самый крупный
фактор транскрипции.
Желтый участок -

44.

45. Инициация транскрипции «в комиксах»

связывается с
боксом и располагается
рядом с сайтом
инициации
Это присоединение
вызывает формирование
ДНК

46. Инициация транскрипции + Pol II «в комиксах»

Затем подходят
факторы
(оранжевый) и
(красный)
присоединяется к
рядом с
подходит к
.
собирается
дистанционно

47. Инициация транскрипции + Pol II «в комиксах»

связывается с
и
и
способствует
присоединению
собран и
подходит к точке
инициации
транскрипции
К сформировавшемуся
комплексу подходит
фактор

48. Инициация транскрипции + Pol II «в комиксах»

TFIIE
TFIIH
связывается,
подходит
Все готово и для
инициации
транскрипции
требуется энергия

49.

50. Элонгация транскрипции «в комиксах»

В двухцепочечной ДНК
формируется «
»,
обеспечивающий доступ
Pol II к единице
транскрипции и
начинается синтез mРНК
Начинается элонгация
цепи и факторы
,
,
,
отсоединяются
действует
дистанционно и
mРНК быстро
растет

51. Элонгация транскрипции «в комиксах»

Элонгация
завершается когда
достигается конец
транскрипта
Закрывается «
в ДНК
»
Pol II освобождается
вместе с
полученными от АТФ
фосфатами

52. Терминация транскрипции «в комиксах»

Комплекс Pol II отходит,
mРНК освобождается.
Фактор TFIID отходит,
позволяя ДНК вернутся в
.
Первичный
транскрипт готов и
после процессинга
будет
транспортирован из
ядра клетки

53.

54.

Ключевая стадия
инициации
транскрипции РНК
полимеразой II – это
посадка на промотор,
а именно на
бокс,
и
ассоциированных с
ним факторов

55.

Большая субъединица
белка
фосфорилируется.
Эта субъединица
является ATPзависимой ДНК

56.

До начала синтеза
РНК, С-концевой
домен РНК
полимеразы II
дефосфорилирован.
После связывания
РНК полимеразы II, с
инициаторным
комплексом
связывается
,
который, в свою
очередь, присоединяет

57.

- комплекс,
важный для репарации
и транскрипции.
В его состав входят
, локально
расплетающие ДНК в
двух направлениях (5’
и 3’) и
РНК
полимеразы

58.

После
фосфорилирования Сконцевого домена
,
РНК полимераза
теряет сродство в
инициаторному
комплексу и

59.

Помимо
,
фосфорилирует
(активируя) несколько
циклин-зависимых
киназ:
, и ,а
также
(56kD) и
(74kD)

60.

Кроме описанных факторов в инициации транскрипции
РНК полимеразой II участвует множество других.
Они обеспечивают регуляцию транскрипции различных
генов.

61.

Основной маркер элонгационного состояния РНК полимеразы II фосфорилированный
.
За поддержание фосфорилированного состояния в процессе элонгации
отвечает фактор
, состоящий из
и
(Ctk1, Ctk2, и Ctk3 у
дрожжей).
Инактивация этого фактора влияет только на транскрипцию определенного
набор генов.

62.

Кроме
, фактором элонгации РНК полимеразы II является
гетеротример
.
Негативный регулятор этого фактора –
. Он связывает комплекс
и и предотвращает их ассоциацию с

63.

В процессе элонгации РНК полимераза может встретить те же проблемы,
что и прокариотическая РНК полимераза:
, участки,
вызывающие
и попадание в
состояние

64.

Если работающая РНК-полимераза встретит повреждение ДНК,
нуждающееся в репарации, то с таким остановленным комплексом
связываются белки
и
.
Эти белки опосредуют посадку факторов репарации на повреждение, а
также играют важную роль для восстановления транскрипции после
репарации.

65.

За супрессию пауз РНК-полимеразы отвечает
арестованного состояния –
.
, а за выход из

66.

Кроме факторов, обеспечивающих элонгацию транскрипции, с
фосфорилированной формой РНК полимеразы II связываются белки,
участвующие в процессинге
. Среди них и аппарат разрезания , отвечающий за терминацию транскрипции.

67. Регуляция транскрипции

МОЛЕКУЛЯРНАЯ ГЕНЕТИКА. ТРАНСКРИПЦИЯ РНК ЭУКАРИОТ

68. Некодирующие регуляторные элементы

Геном животных и человека – сложнейшая система с
многоуровневой системой регуляции.
Важную роль в процессах регуляции играют некодирующие
последовательности:
,
,
. Они
определяют уровень транскрипции генов.

69. Энхансеры. Структура.

- это последовательности ДНК, формирующие модули.
Модули - это отдельные части энхансеров.
Например, М1+М2+М3+М4 - один энхансер, но он состоит из 4-х
модулей.
Все 4 модуля узнаются своими белками, а они, сидя на ДНК,
взаимодействуют друг с другом.
Если в клетке присутствуют все соответствующие белки, то участку ДНК
придается определенная конформация и начинается синтез РНК.

70. Энхансеры: «петлевая модель» действия

(Activators) - белки,
связывающиеся с энхансерами,
которые помогают РНКполимеразе правильно начать
транскрипцию.
(Repressor)- белки,
которые связывают активаторы,
чем снижают или прекращают
транскрипцию.
(Basal factors)белки, которые ориентируют РНКполимеразу на начало
структурной части гена.
(или Pribnow box)- часть
промотора, являющаяся сайтом
связывания для белковых
факторов.
(Transcription factors)- помогают
занять правильную позицию
активаторам и РНК- полимеразе.

71.

72. Инсуляторы (англ. insulate - изолировать )

Последовательности нуклеотидов, которые могут подавлять
позитивное и негативное влияние эухроматина и гетерохроматина на
экспрессию генов, интегрированных в этот хроматин и
фланкированных указанными последовательностями в новом сайте
интеграции.
Такие участки ДНК как бы изолируют ген, находящийся между ними,
способствуя сохранению его обычной пространственной структуры.

73. Механизм действия инсуляторов

А Схема функционирования двух генов (желтый и голубой),
локализованных в домене, контролируемом двумя инсуляторами
(зеленый) и белками, которые связываются с инсуляторами (желтый).
Энхансеры локализуются между двумя генами (вместе с
транскрипционными факторами, обозначенными бирюзовым и
оранжевым), они могут активировать транскрипцию с промотора каждого
гена.

74. Механизм действия инсуляторов

В Если пограничный элемент, инсулятор (красный), расположен между
двумя энхансерами, формируется новый хромосомный домен, в
результате голубой ген остается в одном, а темно-желтый – в другом
домене.
Бирюзовый транскрипционный фактор не может действовать на промотор
темно-желтого гена в соответствии с локализацией второго инсулятора.
Энхансер может активировать транскрипцию с промотора голубого гена,
который остался в том же домене.
English     Русский Rules