Оценка цитотоксических эффектов IgG больных шизофренией, обладающих супероксиддисмутазной активностью

1.

Томск
2023
ОЦЕНКА ЦИТОТОКСИЧЕСКИХ ЭФФЕКТОВ IgG БОЛЬНЫХ
ШИЗОФРЕНИЕЙ, ОБЛАДАЮЩИХ СУПЕРОКСИДДИСМУТАЗНОЙ
АКТИВНОСТЬЮ
Научный руководитель:
Епимахова Е.В., к.б.н., н.с. НИИ
психического здоровья Томского НИМЦ
Докладчик:
Крачнакова К.П., СибГМУ
5 курс МБФ, группа 4804

2.

Актуальность
Шизофрения - это тяжелое, хроническое и прогрессирующее
заболевание, одним из патогенетических факторов которого
является окислительный стресс.
Исследования последних лет привели к открытию антител,
обладающих каталитическими свойствами, которые назвали
абзимами. На данный момент выявлено множество реакций,
которые способны катализировать абзимы, в том числе в
лаборатории молекулярной генетики и биохимии изучаются
оксидоредуктазные активности IgG при шизофрении.
Биологическая роль каталитических антител в патогенезе
заболеваний пока неизвестна. Одна из патогенетических гипотез
наделяет абзимы цитотоксическими свойствами. Изучение
эффектов IgG, обладающих каталитическими свойствами, на
клетки центральной нервной системы in vitro поможет проверить
эту гипотезу.
2

3.

Цель и задачи
Цель: Изучить эффекты IgG, выделенных из сыворотки крови
больных
параноидной
шизофренией,
обладающих
супероксиддисмутазной активностью (СОД), на жизнеспособность
клеток клеточной линии SHSY5Y нейробластомы человека.
Задачи:
1. Проверить жесткие критерии принадлежности СОД активности
изучаемым IgG пациентов с шизофренией и здоровых людей.
2. Изучить супероксиддисмутазную активность IgG пациентов с
параноидной
шизофренией, в сравнении со здоровыми
лицами.
3. Изучить
эффект
сывороточных
IgG,
пациентов
с
шизофренией,
обладающих
супероксиддисмутазной
активностью, на клеточную гибель нейробластомы в
эксперименте in vitro.
3

4.

Объект исследования
Количество обследованных человек
34
Острая шизофрения
Здоровые лица
18 человек
(F 20.0, F20.6)
16 человек,
Длительность заболевания:
19.00 [17.00; 22.00]
Средний возраст:
44.00 [35.00; 49.00]
Средний возраст:
40.50 [38.00; 45.50];
4

5.

Материалы и методы
Очистка сывороточных IgG методом аффинной хроматографии на колонках с
ProteinG-Sepharose на хроматографе AKTA purifier (GE Healthcare, Швеция).
Гомогенность IgG исследовали методом электрофореза в градиентном 4-18% ПААГ.
СОД активность IgG оценивали по степени торможения реакции восстановления
нитросинего тетразолия в диформазан супероксидными радикалами на
спектрофотометре Cary 60 (Agilent, США).
Процент мертвых клеток оценивали по окрашиванию флуоресцентными
красителями Хекст и Пропидий йодид методом высокопроизводительного
скрининга на платформе CellInsight CX7 HCS (Thermo Fisher, США). Для этого клетки
нейробластомы рассаживали в 96-луночные планшеты (1х10^4 клеток на лунку) и
спустя сутки добавляли препараты IgG в конечной концентрации 0,2 мг/мл, далее
культивировали в течение 24 часов. В качестве контроля использовали клеточную
линию, в которую вместо IgG вносили эквивалентные объемы фосфатного буфера.
Статистическая обработка данных проводилась в программе Statistica 10.0. Для
определения значимости различий в исследуемых группах использовали
непараметрический критерий Краскела-Уоллиса и Манна-Уитни на уровне
значимости p≤ 0,05.
5

6.

Дизайн исследования
СЫВОРОТКА КРОВИ
Аффинная хроматография на
колонках с PROTEIN-G SEPHAROSE
Диализ IgG
IgG
Проверка гомогенности
Скрининг супероксиддисмутазной
активности IgG
Оценка цитотоксических эффектов IgG,
обладающий СОД активностью
6

7.

Результаты
Рис. 1. Анализ гомогенности препаратов IgG с помощью SDS-электрофореза в градиентном ПААГ.
Бэнды:
1-5 – IgG пациентов с шизофренией после обработки 10мМ ДТТ;
М – маркеры молекулярной массы белков, кДа.
7

8.

Результаты
Рис. 2. СОД активность IgG а в группе здоровых лиц и в группе больных параноидной
шизофренией
8

9.

Результаты
Рис. 3. Регистрация клеток на приборе
CX7: а – клетки окрашенные
флюорисцентным красителем Hoechst,
б – клетки окрашенные
флюорисцентным красителем
Пропидий йодид;
в – композиция двух красителей.
Рис. 4. Процент мертвых клеток при
инкубации с IgG пациентов с
шизофренией и при инкубации без
добавления антител, с добавлением
фосфатного буфера.
9

10.

Выводы
1. Доказана принадлежность изучаемой СОД активности антителам
больных шизофренией и здоровых лиц.
2. Уровень СОД активности у пациентов с параноидной шизофренией
достоверно превышал уровень изучаемой активности у здоровых
лиц.
3. В экспериментальных пробах in vitro показано усиление клеточной
гибели shsy5y под влиянием сывороточных препаратов IgG
пациентов с шизофренией, обладающих СОД активностью.
10

11.

Благодарю за внимание!
11

12.

Клинические проявления шизофрении
Позитивная
симптоматика
Негативная
симптоматика
• повышенная
стрессонеустойчивость;
• отсутствие традиционно
ожидаемых эмоций;
• Бред, галлюцинации,
• снижение интереса к
различным сторонам жизни;
• аффективное состяние;
• нарушения в
двигательной моторике.
• обедненность мимики;
• повышенная утомляемость;
• интеллектуальные
затруднения.