Образование свободных радикалов при гипоксии

1.

Министерство здравоохранения Российской Федерации
Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования
«Российский национальный исследовательский медицинский университет им. Н.И. Пирогова»
Кафедра госпитальной терапии педиатрического факультета
Новый метод экспресс-диагностики для выявления
свободнорадикальных патологий
A new rapid diagnostic method for detecting free-radical pathologies
Работу выполнила:
Смирнова Анастасия Андреевна,
Педиатрический факультет
Группа 2.5.02в
Преподаватель: Бобков Е.В., к.м.н., доцент
Москва 2020
Руководители:
Чернигина И.А., м.н.с. кафедры биологии ГБОУ ВПО
НижГМА Минздрава РФ
Калиновская О.В., старший научный сотрудник НИЦ
ФППББ УлГПУ

2.

Что такое свободные радикалы?
Свободные радикалы (СР) - это высоко реактивные молекулы
с неспаренными электронами, находящимися на внешней
оболочке молекулы, обладающие очень высокой
реакционной способностью, и как следствие,
повреждающим влиянием на клетки организма.

3.

Свободнорадикальные патологии D. Harman 2019

4.

Цели и задачи
Цель работы: оценка возможности применения озона для
создания окислительного стресса в клетках и определение
уровня свободнорадикальных повреждений ДНК в
лейкоцитах животных- опухоленосителей.
Задачи:
1) определение уровня спонтанных повреждений ДНК методом «ДНК- комет»;
2) оценить возможность применения озона для создания повреждений ДНК.
3)подсчет концентрации лейкоцитов в крови животных контрольной и опытной
групп в камере Горяева;
4) сравнение и статистический анализ показателей опытной и контрольной групп
5) изучение научной литературы по данной проблеме.
Работа была выполнена в рамках научно-исследовательской работы
кафедры биологии Нижегородской государственной медицинской
академии «Поиск новых возможностей в диагностике и терапии
злокачественных новообразований».

5.

Материалы и методы
Цельная кровь лабораторных животных: 16-ти белых нелинейных крыс
самцов в возрасте 3 месяцев:
-8 контрольных;
-8 опытных.
Модель неоплазии получена путем перевивки опухолевого штаммахолангиомы (альвеолярного рака печени) РС1. Срок роста опухоли – 7 дней
с момента перевивки.
Количественный анализ лейкоцитов в
камере Горяева
(Н. К. Горяев, 1914)
Исследуемый образец
крови 120 мкл
Метод ДНК- комет
(O. Ostling, K.Johanson,1985)

6.

Количественный анализ лейкоцитов
в камере Горяева
Лизис эритроцитов
Микроскопирование
Заполнение камеры
раствором крови в
уксусной кислоте
Подсчет лейкоцитов в камере Горяева

7.

Щелочная версия метода
«ДНК-комет»
Приготовление слайда и
создание окислительного
стресса
Электрофорез
Лизис
Щелочная
денатурация
Окрашивание
Визуализация
«комет»

8.

9.

10.

11.

Выводы
1) Концентрация лейкоцитов в крови животных с перевитыми опухолями выше, чем у
животных контрольной группы, и значимо увеличивается с ростом опухоли (p ≤ 0,05).
2) Уровень спонтанных повреждений ДНК в лейкоцитах опухолевых животных выше,
чем у животных контрольной группы, в 1,8 раза (р≤0,05). Уровень повреждений ДНК
так же увеличивается с ростом опухоли (р≤0,001).
3) Уровень диффузии хвоста ДНК-комет при воздействии озоном в концентрации 900
мкг/л в течение 10 минут сопоставим с уровнем диффузии хвоста ДНК-комет при
воздействии гамма-излучения 60Co в дозе 3 Гр.
Таким образом:
Во-первых, разработан новый способ создания повреждений ДНК
для комета теста.
Во-вторых, показана возможность широкого внедрения новой
версии теста ДНК комет в скрининг-программы для выявления
групп риска больных с СРП.
Мы позволим делать ежегодно на 1 млн. комета тестов больше, чем раньше и
облегчим страдания от химиотерапии в результате внедрения
индивидуальных программ лечения почти 400 тыс. человек.

12.

Свободнорадикальные
Covid -19
патологии