Серо- и генодиагностика
Серодиагностика ( Часть 1. РА, РП, РСК , РН )
Serum - сыворотка
Методы диагностики инфекции
Получение сыворотки (=Св; Св - это свернутая плазма без сгустка)
Пробирка с осевшими эритроцитами (с антикоагулянтом)
Получение антисыворотки (= А-Св)
Адъювант – депо для АГ (для медленного рассасывания).
Очистка антисывороток
Аффинная хроматография (очистка АТ)
!!!
Содержание части 1.
РА ( реакции агглютинации )
РА (реакции агглютинации; проводятся с клетками)
SAT = serum agglutination test
.
Human red blood cells before (left) and after (right) adding serum containing anti-A antibodies. The agglutination reaction the presence of the A antigen on the surface of the cells.
РНА (реакция непрямой /пассивной/ агглютинации)
Диагностикумы
Ла́текс (англ. latex, нем. Latex) 
Латексная агглютинация
- РНГА (= с эритроцитарным диагностикумом)
«Зонтик» - агглютинация есть Пуговка – агглютинации нет
1% суспензия эритроцитов
РНГА
Quantitative agglutination test
Hemagglutination Inhibition
РПГА
Реакция коагглютинации (РКА)
Реакция коагглютинация (РКА)
РТГА (реакция торможения гемагглютинации)
РТГА
.
.
НА есть у вирусов
.
Оценка титра АТ в динамике зб
Контроли
Реакция Кумбса (= антиглобулиновый тест)
DAT -
Варианты постановки реакции Кумбса
Прямая РА Кумбса
Прямая и непрямая проба Кумбса
Нефелометрия, турбометрия
Нефелометрия, турбометрия
РП (реакции преципитации /поиск молекул/)
Реакция кольцепреципитации в жидкой фазе
.
.
РП по Оухтерлони
Стандартная Св - это Св с точно определенным количеством искомого АГ. Титруем.
Радиальная иммунодиффузия
.
Ракетный электрофорез (модификация РП по Манчини)
Реакция иммунопреципитации
.
? ?
38.58M
Category: medicinemedicine

Серо- и генодиагностика

1. Серо- и генодиагностика

СЕРО- И
ГЕНОДИАГНОСТИКА
Рисунки для презентаций
(Ссылка: Internet < 2008 г.)

2.

3. Серодиагностика ( Часть 1. РА, РП, РСК , РН )

СЕРОДИАГНОСТИКА
( ЧАСТЬ 1. РА, РП, РСК , РН )
Рисунки разных
источников интернета

4.

5. Serum - сыворотка

Сыворотка – это свернутая плазма (кровь)
без сгустка.
Антисыворотка (А-Св) – сыворотка,
содержащая специфические антитела
(противодифтерийная сыворотка …).

6. Методы диагностики инфекции

Прямые
(выявления возбудителя)
- Микробиологический
- анализ
- Методы выявления
Ag (антигенов)
- Микроскопия
- Генодиагностика
Косвенные
(выявление эффекта)
- Методы выявления
- антител
- Инструментальный
анализ
- Гистология

7. Получение сыворотки (=Св; Св - это свернутая плазма без сгустка)

Кровь берется в пустую емкость (можно с
шариками; без антикоагулянтов)
Ретракция (= сокращение сгустка) за счет
тромбоспондина тромбоцитов (37о C ~40
минут)
Отслаивается желтая жидкость –
сыворотка (центрифугируем для
отделения от примесей эритроцитов)

8. Пробирка с осевшими эритроцитами (с антикоагулянтом)

9.

10. Получение антисыворотки (= А-Св)

Вводим АГ млекопитающему несколько
раз (с адъювантом)
Через ~месяц берем пробно кровь Св
Проверяем титр АТ
30% крови или 50% ( 50%
смертность) Св +
консервант Использование

11.

12. Адъювант – депо для АГ (для медленного рассасывания).

Неполные (без иммуностимулятора)
Полные (с иммуностимулятором)

13.

14. Очистка антисывороток

Спиртовое осаждение
Высаливание
Аффинная хроматография

15. Аффинная хроматография (очистка АТ)

16.

!!!
Для проведения сер.реакций все Св
инактивируются по СК (системе
комплемента) при 52o в течение
20-30 минут.
[При более высокой температуре (56
градусов) идет денатурация Ig .]

17.

Содержание части 1.
РА
РП
РСК

18.

Сравнительная чувствительность
основных иммунометрических методов
Метод
Предел чувствительности
Прямая преципитация в растворе
500 мкг/мл
Радиальная иммунодиффузия (Манчини)
50 мкг/мл
Двойная иммунодиффузия (Оухтерлони)
10 мкг/мл
Контрэлектрофорез
5 мкг/мл
Турбидиметрия и нефелометрия
0,5 мкг/мл
Дот-блот
0, 05 мкг/мл
Иммуноблоттинг
0, 0005 мкг/мл
ИФА, непрямая иммунофлюоресценция
0, 00005 мкг/мл
Хемилюминисценция
0, 000005 мкг/мл
Радиоиммунный метод
0, 0000005 мкг/мл

19. !!!

20. Содержание части 1.

21.

РА
( реакции агглютинации )

22.

РА
(реакции агглютинации;
проводятся с клетками)

23.

24.

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

25.

SAT
= serum agglutination test
= РА

26. РА ( реакции агглютинации )

27. РА (реакции агглютинации; проводятся с клетками)

.

28.

29.

.

30. SAT = serum agglutination test

Human red blood cells before (left) and after (right)
adding serum containing anti-A antibodies.
The agglutination reaction the presence of the A antigen
on the surface of the cells.

31.

32. .

33.

34.

.

35. Human red blood cells before (left) and after (right) adding serum containing anti-A antibodies. The agglutination reaction the presence of the A antigen on the surface of the cells.

http://books.google.ru/books?id=ytCNCbCWx8oC&pg=PA87&dq=Immunoglob
ulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CFk
Q6AEwCDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

36.

Ориентировочная
РА

37.

IgM - холодовые Ig
(т.е. лучше связывают
АГ «на холоду»)
IgG - тепловые Ig
РА
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

38.

39.

40.

IgM – холодовые АТ
(осаждение ИК в коже)
IgG – тепловые АТ
(осаждение ИК
в почках, легких)

41.

Развернутая
РА
(количественная реакция;
с раститровкой)

42.

Развернутая
РА

43.

44.

45.

46.

47.

РНА
(реакция непрямой
/пассивной/
агглютинации)

48.

Диагностикумы
1) АГ-содержащие
- микробные
- эритроцитарные
(РНГА)
- латексные
2) АТ-содержащие
- микробные
- эритроцитарные
(РПГА)
- латексные

49.

50.

Ла́текс (англ. latex, нем. Latex)
— общее название эмульсий
дисперсных полимерных частиц в
водном растворе.
В природе встречается в виде
молочка, которое выделяют
различные растения, в частности
бразильская гевея, одуванчик и др.

51.

Латексная агглютинация

52.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

53.

- РНГА
(= с эритроцитарным
диагностикумом)

54. РНА (реакция непрямой /пассивной/ агглютинации)

«Зонтик» - агглютинация есть
Пуговка – агглютинации нет
http://www.slideshare.net/jochoa/18-virus-viroides-y-priones

55. Диагностикумы

Зонтик
= агглютинация
есть
Пуговка

56.

1% суспензия эритроцитов
0,1 мл осадка эритроцитов до 10 мл
физраствора

57. Ла́текс (англ. latex, нем. Latex) 

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

58. Латексная агглютинация

РНГА

59.

Quantitative agglutination
test

60. - РНГА (= с эритроцитарным диагностикумом)

РНГА
(эритроцит
+ АГ)
Определение АТ

61. «Зонтик» - агглютинация есть Пуговка – агглютинации нет

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

62.

РНГА
(эритроцит + АТ)
Определение АГ

63. 1% суспензия эритроцитов

Термодинамическое
движение

64.

65. РНГА

66. Quantitative agglutination test

Hemagglutination Inhibition

67.

РПГА
http://www.slideshare.net/KAVIPRIYA6/ag-ab-

68.

Реакция коагглютинации
(РКА)
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

69.

Белок А = FcR
Реакция коагглютинация (РКА)
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

70.

71.

РТГА
(реакция торможения
гемагглютинации)

72.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

73. Hemagglutination Inhibition

РТГА
http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

74. РПГА

.

75.

.

76. Реакция коагглютинации (РКА)

http://www.slideshare.net/KAVIPRIYA6/ag-ab-

77. Реакция коагглютинация (РКА)

78.

.

79.

Оценка титра АТ в динамике
зб
1 раз – при поступлении в стационар
(остатки Св замораживаются)
2 раз через дней 10-14 парно
Если титр АТ (= Ig) увеличился в 4 и более
раз, то это свидетельствует о свежей
инфекции.

80.

http://www.slideshare.net/jochoa/18-virus-viroides-y-priones

81. РТГА (реакция торможения гемагглютинации)

82.

Контроли
Для проверки качества реакции
Положительный контроль (+)
Отрицательный контроль (-)

83. РТГА

Реакция Кумбса

84. .

Реакция Кумбса
(= антиглобулиновый тест)

85. .

DAT прямой антиглобулиновый тест !
= Прямой тест Кумбса
Разработан Кумбсом в 1945 году для
дифференцировки иммунного и неиммунного
гемолиза.
Среди здоровых доноров тест положителен в 1
случае на 1000-14.000 и примерно в 1 случае на
6-100 среди госпитализированных пациентов
без очевидных признаков гемолиза или
гемолитической анемии.
https://books.google.ru/books?id=8pBrgAGcoWMC&pg=PA318&dq=AB+Rh+IgG+IgM&hl=ru&sa=X&ved=0
ahUKEwjOw6rfhubJAhXK_HIKHXcDCNQQ6AEIHDAA#v=onepage&q&f=true

86.

Варианты постановки реакции
Кумбса
Непрямая (оценка титра антител)
Прямая

87.

Резус-конфликт
Реакция Кумбса

88. НА есть у вирусов

Прямая РА Кумбса

89.

90. .

91. Оценка титра АТ в динамике зб

92.

Прямая и непрямая проба Кумбса

93.

Реакция флоккуляции
(по Рамону) (от лат . flоecus - хлопья шерсти) появление опалесценции или хлопьевидной массы
(иммунопреципитации) в пробирке при реакции
токсин - антитоксин или анатоксин - антитоксин.
Применяют для определения активности
антитоксической сыворотки или
анатоксина.
http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

94. Контроли

Нефелометрия,
турбометрия

95.

Нефелометрия, турбометрия

96.

http://books.google.ru/books?id=EGW5CFOII9IC&pg=PA26&dq=Immunoglobul
in+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CEUQ
6AEwBDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

97. Реакция Кумбса (= антиглобулиновый тест)

РП
(реакции преципитации
/поиск молекул/)

98. DAT -

Реакция кольцепреципитации
(в жидкой фазе) по Асколи
(диагностика сибирской язвы)

99. Варианты постановки реакции Кумбса

Реакция кольцепреципитации
в жидкой фазе

100.

101. Прямая РА Кумбса

http://books.google.ru/books?id=L4CIqkhuQ8C&pg=PA170&dq=Immunoglobulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=x
E9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CF8Q6AEwCTgK#v=onepage&q=Immunog
lobulin%20variable%20region&f=false

102.

103.

104.

РП по Оухтерлони
(в 1% агарозе
АГ
/плотной фазе/)
АТ

105. Прямая и непрямая проба Кумбса

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

106.

107.

108.

109.

http://books.google.ru/books?id=iuBiMLiHyjcC&pg=PA375&dq=cd88++immune+complex&hl=ru&sa=X&ei=8
z5TT-GyL8PItAarwqWXDA&ved=0CC4Q6AEwADgU#v=onepage&q&f=false

110.

http://books.google.ru/books?id=EGW5CFOII9IC&pg=PA26&dq=Immunoglobul
in+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CEUQ
6AEwBDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

111. Нефелометрия, турбометрия

112. Нефелометрия, турбометрия

.

113.

114.

115. РП (реакции преципитации /поиск молекул/)

116.

117. Реакция кольцепреципитации в жидкой фазе

.

118.

http://books.google.ru/books?id=ytCNCbCWx8oC&pg=PA87&dq=Immunoglob
ulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CFk
Q6AEwCDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

119.

120.

121.

122.

http://books.google.ru/books?id=3PJVLH1NmQAC&pg=PA212&dq=Immunoglo
bulin+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CD

123.

РП
по
Оухтерлони

124.

125.

РП по Манчини
(в агарозе /плотной фазе/)
Реакция количественная

126.

Стандартная Св - это Св с
точно определенным
количеством искомого АГ.
Титруем.

127.

http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

128.

129.

http://books.google.ru/books?id=iuBiMLiHyjcC&pg=PA375&dq=cd88++immune+complex&hl=ru&sa=X&ei=8
z5TT-GyL8PItAarwqWXDA&ved=0CC4Q6AEwADgU#v=onepage&q&f=false

130. .

http://books.google.ru/books?id=EGW5CFOII9IC&pg=PA26&dq=Immunoglobul
in+variable+region&hl=ru&sa=X&ei=xE9vUbClMqeo4AT2r4DgBw&ved=0CEUQ
6AEwBDgK#v=onepage&q=Immunoglobulin%20variable%20region&f=false

131.

Радиальная иммунодиффузия

132.

.

133.

http://www.slideshare.net/drjayeshpatidar/clinical-microbiology

134.

Ракетный электрофорез
(модификация РП по Манчини)

135. .

https://books.google.ru/books?id=j-qeCgAAQBAJ&printsec=frontcover&dq=inauthor:"Patrick+R.+Murray"&hl=ru&sa=X&ved=0ahUKEwjmmIHxiIjKAhVC1XIKHRbOA-

136.

Реакция
иммунопреципитации

137.

138.

https://books.google.ru/books?id=MXMazr0LRDsC&printsec=frontcover&dq=microbiology&hl=ru&sa=X&ved=0ahUKEwiC
w63qhojKAhVEvHIKHb-bAQ8Q6AEINDAD#v=onepage&q=microbiology&f=true

139.

.

140.

http://books.google.ru/books?id=tbgBneqKu6MC&pg=PA144&dq=IgG1+IgG2+IgG
3+IgG4+Ig+g+IgG&hl=ru&sa=X&ei=FVh6UefVLen44QT_kID4CA&ved=0CGUQ6AEw
CQ#v=onepage&q=IgG1%20IgG2%20IgG3%20IgG4%20Ig%20g%20IgG&f=false

141. РП по Оухтерлони

http://vetfak.nsau.edu.ru/new/uchebnic/microbiology/stu/index_immun.htm

142.

143.

https://books.google.ru/books?id=XRZGZfJf7fgC&pg=PA279&dq=enterobacteriaceae&hl=ru&sa=X&ei=X5YgVYbFDYHRsgHFyIKwCQ&ved=0CDUQ6AEwBDgK#v=onepage&q=enterobacteriaceae&f=true

144.

145. Стандартная Св - это Св с точно определенным количеством искомого АГ. Титруем.

146.

147.

148.

?
?

149.

150. Радиальная иммунодиффузия

https://books.google.ru/books?id=MXMazr0LRDsC&printsec=frontcover&dq=microbiology&hl=ru&sa=X&ved=0ahUKEwiC
w63qhojKAhVEvHIKHb-bAQ8Q6AEINDAD#v=onepage&q=microbiology&f=true

151. .

РСК
(реакция связывания
комплемента)

152.

153. Ракетный электрофорез (модификация РП по Манчини)

154.

РСК
(реакция отрицательная)
ЕА =
гемолитическая
система

155.

РСК
(реакция положительная)

156. Реакция иммунопреципитации

157.

РН
(реакции нейтрализации)

158.

РН (реакция нейтрализации)
токсина антитоксическими
антителами
http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap18/

159. .

Диагностика ботулизма
7 серотипов ботулинического токсина
(А-G).
В РФ 4 серотипа токсина – А, В, С, Е.
4 мышки
Вводим токсинсодержащий
материал, затем антисыворотки.

160.

Ботулизм
(9 серотипов ботулинического
токсина – А-G; С1, С2, С3;
в РФ – А, В, С, E)

161.

Чипы

162.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap19/sld004.ht

163.

http://classes.midlandstech.edu/carterp/Courses/bio225/chap19/sld004.ht

164.

165.

Благодарю за внимание!

166.

+ …
English     Русский Rules