ПЦР Руша

1. пцр

ПЦР
РУША
01-641

2. Что это такое?

ЧТО ЭТО ТАКОЕ?
Полимеразная цепная реакция (ПЦР,
PCR) — метод молекулярной
биологии, позволяющий создать
копии определенного фрагмента
ДНК из исходного образца, повысив
его содержание в пробе на
несколько порядков.

3. Что было открыто раньше?

ЧТО БЫЛО ОТКРЫТО РАНЬШЕ?
ПЦР
Увеличение количества
фрагментов
Определение
последовательности
Секвенирование

4. открытие

ОТКРЫТИЕ
1971 г. Норвежский
биохимик Хьелль Клеппе
опубликовал статью,
в которой описал метод,
очень похожий на ПЦР
1976 г. Ученые из США
выделили
термостабильную ДНКполимеразу и назвали
ее Taq-полимеразой.
1977 г. Фредерик Сенгер
предложил метод
секвенирования ДНК
1983 г. Руководитель
лаборатории синтеза
ДНК в Cetus
Corporation Кэри
Мюллис ”изобрел”
процесс амплификации
(преумножения) генов,
который позже получит
название полимеразной
цепной реакции

5. Кэри мюллис

КЭРИ МЮЛЛИС
• 1985 Г. МЮЛЛИС И ЕГО ГРУППА
«Можно
ожидать, чтоПОДАЛИ
после охлаждения
РАЗРАБОТЧИКОВ
ЗАЯВКУ
получатся
две структуры,
из которых
НА ПАТЕНТ,
КОТОРЫЙкаждая
УТВЕРДИЛИ
содержит полноразмерную матричную цепь,
28 ИЮЛЯобразом
1987 ГОДА.
подобающим
связанную с праймером.
Для завершения процесса репаративной
• В ДЕКАБРЕ 1985 ГОДА
репликации нужно будет добавить ДНКЖУРНАЛ
SCIENCE ОПУБЛИКОВАЛ
полимеразу.
В результате
получатся ужеПЕРВУЮ
две
молекулы
исходного
дуплекса. Цикл
можно
СТАТЬЮ
КЭРИ МЮЛЛИСА
О ПЦР
повторять, каждый раз добавляя свежую
порцию фермента». - Х.Клеппе

6. Принцип метода

ПРИНЦИП МЕТОДА
Образец днк
Праймеры
Нуклеотиды
Днк-полимераза
Буфер

7. Днк-ПОЛИМЕРАЗА

ДНК-ПОЛИМЕРАЗА
• ФЕРМЕНТ, КАТАЛИЗИРУЮЩИЙ ПРОЦЕСС
ПОЛИМЕРИЗАЦИИ ДНК ИЗ НУКЛЕОТИДОВ
Репликация — процесс
создания двух дочерних
молекул ДНК на основе
родительской молекулы
ДНК

8. Этапы

ЭТАПЫ
Денатурация
Отжиг
праймеров
Элонгация

9.

10.

11. Визуализация гель-элекрофорез

ВИЗУАЛИЗАЦИЯ
ГЕЛЬ-ЭЛЕКРОФОРЕЗ
Готовят гель
Расплавленный при
65 °С гель заливают
в плашку с гребенкой,
формирующей лунки
Камеру подключают
к источнику питания
Ставят в камеру
в лунки
микропипеткой вносят
раствор из ПЦРпробирок, смешанный
с краской