Микробиология микозов

1. Микробиология микозов

Доцент
Андреев В.А.

2. Пути размножения грибов

• - путем почкования, в результате чего образуются бластоспоры;
• - с помощью бесполых спор; бесполые споры у одних грибов
образуются в специальных вместилищах – спорангиях (эндоспоры),
у других они образуются открыто на специализированных гифах –
конидиеносцах и называются экзоспорами или конидиями.
• - половым путем; процесс созревания половых спор у грибов
происходит в специальных структурах: - аскоспор – в асках
(сумка), - базидиоспор – на (в) плодовых телах.
( Бесполые структуры грибов называются анаморфами, а половые –
телеоморфами. Последние наиболее значимы для систематики грибов У ряда
грибов половая стадия остается до сих пор не найденой, но обнаружено, что по
рибосомальной последователь-ности РНК, характеру метаболизма и
химическому составу стенок они близки к представителям определенного
класса. Для таких представителей введено такое понятие, как грибы,
обладающие аффинитетом к тому или иному известному классу)

3. Классификация грибов

4. Классификация микозов по Н.Д. Шеклакову (1976г.) (с незначительными изменениями)

• Поверхностные или кератомикозы (разноцветный лишай, белая
и черная пьедра).
• Эпидермомикозы или дерматомикозы (микозы, вызванные
грибами дерматофитами - Trichophyton spp., Microsporum spp.,
Epidermatophyton floccosum, а также плесневыми и дрожжевыми
грибами).
• Подкожные или субкутанные микозы (споротрихоза.,
хромомикоза, феогифомикоза, мицетомы).
• Системные или глубокие (висцеральные) микозы, вызванные
патогенными (преимущественно эндемичными) грибами возбудителями кокцидоидоза, паракокциоидоза, бластомикоза,
адиоспиромикоза, криптококкоза, гистоплазмоза; а также
вызванные условно-патогенными (оппортунистическими
грибами (рода Candida) и плесневыми грибами).

5. Патогенные для человека дерматофиты и их природный резервуар

Группа
Антропофильные
Зоофильные
Геофильные
Виды
T.
rubrum,
T.
mentagrophytes
var.
interdigitalle, T. violaceum, T. tonsurans, T.
shoenleinii, T. ferrugineum, M. audouinii, E.
floccosum
T. verrucosum, T. mentagrophytes var.
mentagrophytes, M.canis, M. equinum, M. gallinae
T. ajelloi, T. terrestre, M. gypseum

6. Клиническая классификация дерматофитии

Болезни
Микоз волосистой части головы,
Наиболее частые возбудители
Trichophyton sp., Microsporum sp.
бровей и ресниц
Фавус
Т. schoenleinii, T. violaceum (редко),
М. gypseum (редко)
Керион
Т. verrucosum, T. mentagrophytes
Микоз бороды и усов
Т. rubrum, T.mentagrophytes,
T. verrucosum
Микоз гладкой кожи лица и тела
Т. rubrum, Т. concentricum
Микоз складок
Е. floccosum, Т. rubrum,
T. mentagrophytes
Микоз ногтей
Т. rubrum, T. mentagrophytes
Микоз кистей
Т. rubrum, E. floccosum,
T. mentagrophytes

7. Лабораторная диагностика дерматофитий

• 1. Микроскопия нативного материала
• 2. Посев и выделение чистой культуры с последующей
идентификацией. (Идентификация проводится по
морфологическим особенностя роста грибов на средах и
результатм микроскопии чистой культуры.
Диагностическое значение имеют: строение мицелия,
форма и расположение макро- и микроконидий,мицелия,
наличие хламидоспор и другие признаки. В качестве
дополнительных признаков исследуется уреазная
акивность, потребность в факторах роста и другие
свойства)
• 3. ДНК диагностика (современный секвенатор нового
поколения, использующий, например, метод
мультиплексного кодирования)
• 4. В качестве перспетивного метода можно назвать также
метод масс-спектрометрии (в стадии разработки).

8. Факторы риска развития оппортунистических микозов

- иммунные нарушения, как приобретенные, (СПИД, перенесенные
инфекционные заболевания и др.), так и врожденные (дефицит
системы комплемента, синдром Чедиака-Хигаши, недостаточность
системы миелопероксидазы, дефицит IgA и др.);
- истощающие хронические заболевания (туберкулез, опухоли, анемии
и др.);
- эндокринные нарушения (сахарный диабет, гипо- и гиперкортизолизм, гипертиреоз и др.);
- длительное или массивное употребление антибиотиков,
иммунодеприсантов, кортикостероидных препаратов, цитостатиков,
гормональных контрацептивов и др, влияющих на клеточный
иммунитет или ведущих к гипегликемии тканей;
- рентгено- и радиотерапия;
- профессиональные вредности (контакт с растительным сырьем,
контаминированным грибами, антибиотиками и др.);
- травматические и ивазивные вмешательства (травмы, хирургические
вмешательства, гемодиализ, катетеризация сосудов и др.).
Риску развития микозов, вызванных условно-патогенными грибами так
же подвержены беременные (эстрогенный компонент), лица пожилого
возраста и новорожденные.

9.

Классификация лекарственных средств,
применяемых для лечения микозов
Основные группы
Номенклатура антимикотиков
антимикотиков
1.
Полиеновые
антибиотики
2. Азолы
3. Аллиламины
4. Прочие антимикотики
5.Антисептики,
обладающие антигрибковой
активностью
Амфотерицин В, амфоглюкамин,
натамицин, нистатин, леворин, микогептин
Бифоназол, изоконазол, итраконазол (орунгал),
клотримазол (канестен), миконазол (дактарин),
Кетоконазол (низорал), оксиконазол, флуконазол
(дифлюкан)
Тербинафин (ламизил), нафтифин
Препараты ундециленовой кислоты,
гризеофульвин, нитрофунгин, декамин, котримоксазол, йодид калия, аморолфин,
циклопироксоламин, пентамидин.
Кислоты (салициловая, бензойная, борная),
раствор йода, метиленовый синий,
бриллиантовый зеленый

10. Исследования, подтверждающие значимость грибов как возбудителей при оппортунистических микозах

• - повторные исследования, подтверждающие
видовую идентификацию возбудителя;
• - количественные методы посева материала;
• - гистологические методы выявления возбудителя в
пораженной ткани;
• - определение титра антител в крови и другие
прямые или косвенные доказательства наличия
инфекционного процесса (выявление мицелиальных
форм грибов р. Candida, обнаружение
глюкоманнана, глюканов и др. тесты).

11.

11

12. Ферментативная активность основных возбудителей кандидоза

Виды грибов
Глюкоза
Мальтоза Сахароза
Лактоза
C.albicans
+
+
-/+
-
С.tropicalis
+
+
+/-
-
C.parapsilosis
+
з/-
-/+
-
C.kefyr
+
-
+
+/-
C.quilliermondii
з
-
з
-

13.

Candida albicans

14. Тип роста Mycotoruloides

15. Тип роста Mycotorulа

16. Тип роста Candida

16

17. Тип роста Mycocandida

17

18. Тип роста Blastodendrion

18

19. Хламидоспоры C. albicans

20.

Candida albicans

21. AUXACOLOR 2

21

22. Хромогенная среда для выделения грибов рода candida

22

23. Некультуральные методы лабораторной диагностики микозов (экспресс-методы)

Platelia Aspergillus Ag,
(BIO-RAD)
Определение галактоманнана
аспергиллов в сыворотке крови
Pastorex Cryptoplus, (BIORAD)
Определение
глюкуроноксиломаннана
криптококков
G-тест,
Определение (1 3)- -Dглюкана грибов
Fungtell Assay
ПЦР
Определение ДНК грибов
PNA-FISH тест
Флюоресцентное определение
нуклеиновой кислоты с
пептидом
23

24. Определение (13)--D-глюкана в крови G-тест, Fungtell Assay (Assotiates of Cape Cod. Inc)

Определение (1 3)- -D-глюкана в крови
G-тест, Fungtell Assay
(Assotiates of Cape Cod. Inc)
Строение клеточных стенки и мембраны гриба
-(1,6)-глюкан
-(1,3)глюкан
фосфолипидный
бислой мембраны
-(1,3)-глюкан-синтаза
эргостерол
клеточная
24
стенка

25.

Галактоманнан (ГМ) Aspergillus spp.
Platelia Aspergillus (BIO-RAD)
Чувствительность и специфичность – 80-97%
ГМ+ – 2 повторных теста ИА+
ГМ- – несколько повторных тестов ИА-
25

26. Ложноположительные результаты теста «Platelia Aspergillus Ag»

Частота: 1% - 18% (среднее 8%)
Причины:
Цитостатическая терапия (2 недели после окончания)
Перекрестные реакции с экзотоксинами бактерий или
дрожжеподобных грибов
Новорожденные (83%) – искусственное вскармливание,
Bifidobacterium spp.
Фунгемия или бактериемия (15%)
Терапия антибиотиками (пиперациллин / тазобактам,
амоксициллин / клавуланат)
26

27. G-тест, Fungtell Assay (определение (13)--D-глюкана в крови)

G-тест, Fungtell Assay
(определение (1 3)- -D-глюкана в крови)
Тест с лизатом амебоцитов краба Lumulus polyphemus
Определяет: Aspergillus, Candida, Fusarium, Trichosporon,
Saccharomyces, Acremonium
Не определяет: Cryptococcus, Zygomycetes
Время определения – 1 час
Чувствительность – 93-100%
Специфичность – 77% (Pickering et al, JCM, 2005, 43 5957)
Специфичность – 90% (тест однократно)
Специфичность – 96% (тест двукратно)
Odabasi et al. CID
2004; 39: 199-205
27

28. ПЦР в диагностике инвазивных микозов

Метод перспективен для скриннинга
грибковых инфекций
Тест не стандартизован, остается
исследовательским
Противоречивые данные из различные
лабораторий (чувствительность,
специфичность, фрагменты ДНК,
биосубстраты)
28

29. Система фунгитест

29

30. Дрожжевые клетки грибов р. Candida

31. Дрожжевые клетки C. krusei

32. Malassesia furfur

32

33. Разноцветный лишай

33

34.

Aspergillus fumigatus

35.

Aspergillus fumigatus

36.

Aspergillus flavus

37.

Aspergillus flavus

38.

Aspergillus niger
Колония 3-е суток
Колония 7 суток

39.

Aspergillus niger

40.

Mucor racemosus

41.

Mucor racemosus

42.

Rhizopus stolonifer

43.

Rhizopus stolonifer

44. Капсула у Cryptococcus neoformans

45.

Cryptococcus neoformans

46. Криптококки в ткане

47. Колонии C. neoformans на среде Staib.

47

48. Сферулы грибов Coccidioides immitis

49. Выход эндоспор при разрыве стенки сферулы.

49

50. Артроспоровый мицелий C. immitis

50

51. Сферула C. immitis.

51

52. Дрожжевые клетки H. capsulatum в ткане

52

53. Мицелиальная форма H. capsulatum

53

54. Дрожжжевые клетки P. brasiliensis

54

55. Адиоспоры (E. crescens)

56. Мицелиальная форма C. parvum var. crescens

56

57. Спорангии Rhinosporidium seeberi.

57

58. Кожные проявления кокцидиоидоза.

58

59. Актиномикотическая друза

59

60. Микроскопическая картина культуры актиномицета

60

61. Микроскопическая картина N. asteroides

61

62. Мицелиальные формы Nocardia spp.

62

63. N. asteroides в мокроте

63

64.

Характеристика возбудителей глубоких микозов
1
2
3
Coccidioides
immittis
Юго-Западные
штаты США,
страны
Центральной и
Латинской
Америки
Возбудитель кокцидоидоза
(лихорадка долины св. Иохима,
ревматизм пустыни) –
неконтагиозный микоз (больной
человек для окружающих не
опасен). Диморфный гриб.
Аэрогенный путь инфицирования –
вдыание артроспор.
Гриппоподобное заболевание при
первично легочной инфекции,
иногда развивается узловатая или
многоформенная эритема,
поражение кожи, костей, суставов и
внутренних органов. В организме
человека (тканевая форма) образует
сферулы (20-60 мкм) в диаметре,
содержащие эндоспоры.
64

65.

Histoplasma
capsulatum var.
capsulatum
Histoplasma
сapsulatum
var. duboisii
Cтраны
Центральной и
Южной Америки,
Канада, страны
ЮгоВосточной Азии,
спорадические
случай в
Европейских
странах.
Центральная и
Западная Африка
Диморфный гриб, возбудитель
гистоплазмоза с поражением
ретикулоэндотелиальной системы,
кожи, ЖКТ, носоглотки, легких.
Распространен в почве,
загрязненной экскрементами птиц
и летучих мышей. Инфицирование
– воздушно-капельным путем, при
вдыхании пыли со спорами. В
организме человека образуются
мелкие дрожжевые клетки (1,4 –
1,9 мкм) округлой формы,
размножающиеся почкованием.
Почки располагаются цепочкой.
65

66.

Blastomyces
dermatitidis
Северная
Америка,
спорадические
случаи в Индии и
на Ближнем
Востоке
Диморфный гриб – возбудитель
бластомикоза ( болезнь Гилкриста).
Хроническое гранулематозное
заболевание: висцеральная форма
характеризуется развитием
инфильтратов и каверн в легких,
поражаются кости, печень и
селезенка; при кожной форме
образуются папуло-пустулезные
элементы с кровяно-гнойным
содержимым. Инфицирование – при
вдыхании спор, находящихся в
почве или гниющих растительных
остатках. В тканях появляются
округлые клетки (8-16 мкм) с
двойной оболочкой. Почкование
имеет полярный характер.
66

67.

Paracoccidoides
brasiliensis
Страны
Центральной и
Южной Америки
(тропические
зоны)
Диморфный гриб – возбудитель
паракокцидиоидоза. Редко
встречающийся микоз с
гранулематозным поражением
легких, слизистых оболочек, кожи.
Обитает на гниющих растительных
остатках и в почве. Передается при
травме слизистых оболочек рта и
аэрогенным путем). В тканях
образует дрожжевую форму (
круглые клетки до 15-30 мкм в
диаметре). На питательных средах
при 20-25 0С растет в мицелиальной
форме, а на кровяном агаре при 370С
– в дрожжевой форме.
67

68.

Glenosporella loboi
(Loboa loboi)
Бразилия
(Долина
Амазонки)
Диморфный гриб – возбудитель
лобомикоза (келоидный бластомикоз
Лобó, гленоспореллоз). Это
хронический глубокий микоз с
кожными поражеиями и
образованием келоидоподобных
рубцов. Эпидемиология
недостаточно изучена. В Европе
зафиксировано несколько случаев
заболевания у лиц,
контактировавших с
Атлантическими дельфинами.
Тканевая фаза представлена
дрожжеподобными клетками (8-16
мкм).
68

69.

Chrysosporum
parvum
var.crescens
(Emmonsia
parva var.
crescens)
Северная
Америка,
Канада, Азия,
страны
Европы, т.ч.
запад
Беллоруссии,
Дальний
Восток
Диморфный гриб,
возбудитель
адиоспиромикоза. Источник –
почва, водная растительность.
Инфицирование аэрогенным
путем спорами и
фрагментами мицелия. В
организме человека образует
крупные адиоспоры ( 700
мкм), напоминающие
сферулы при кокцидиоидозе.
От последних отличаются
отсутствием эндоспор.
69

70.

Penicillium
marneffei
Страны ЮгоВосточной
Азии
Диморфный гриб –
возбудитель эндемического
пенициллиоза. Встречается
как ВИЧ- ассоциированная
инфекция. Тканевая форма –
дрожжевые клетки,
размножающиеся делением.
70

71.

Сryptococcus
neoformans var.
neoformans.
C.neoformans var.
gatti
Повсеместно
Анаморфные базидиомицетовые
дрожжи – возбудители
криптококкоза
( Торулёз, болезнь Буси-Бушке).
Телеоморфа относится к роду
Filobasidiella. Поражает легкие,
кожу, ЦНС. Обитает в почве,
выделен из фруктов, молока, масла,
овощей; содержится в помете
голубей. Инфицирование –
аэрогенным путем; отмечено
заражение C. neoformans var. gatti
при тесном контакте с эвкалиптом.
В организме отмечаются дрожжевые
округлые клетки (3-25 мкм),
покрытые полисахаридной
капсулой, которая при микроскомии
видна в виде ореола. ВИЧ –
ассоциированная инфекция;
вызывает у этой группы пациентов
менингоэнцефалит.
71

72.

Инвазивный аспергиллез, аспергиллема
Клинический анализ крови
Общий анализ мочи
Биохимический анализ крови (глюкоза, АЛТ, АСТ, билирубин, мочевина,
креатинин, K, Ca, Na, Mg)
RW, ф50
УЗИ брюшной полости, почек
Определение антигена Aspergillus в сыворотке крови
ИФА с Aspergillus fumigatus
IgG4 к Aspergillus fumigatus
Компьютерная томография или рентгенография легких
Бронхоскопия
Микроскопия БАЛ, мокроты, биопсийного материала
Посев БАЛ, мокроты, биопсийного материала на плесневые грибы
Идентификация возбудителя
Биопсия очагов поражения
Гистологическое исследование биоптата
Дополнительные:
КТ или МРТ головного мозга
Консультация офтальмолога, ЛОР-врача, фтизиатра
72

73.

Хронический диссеминированный (кандидоз
Клинический анализ крови
Общий анализ мочи
Биохимический анализ крови (глюкоза, АЛТ, АСТ, билирубин, мочевина, креатинин,
щелочная фосфатаза, K, Ca, Na, Mg, P)
RW, ф50
УЗИ брюшной полости, почек
Эндоскопическая или чрезкожная биопсия очагов поражения
Посев крови на дрожжеподобные грибы
Посев мочи на дрожжеподобные грибы
Посев кала на дрожжеподобные грибы
Посев тампона из зева на дрожжеподобные грибы
КТ или МРТ брюшной полости
Микроскопия биоптатов
Посев биоптатов на дрожжеподобные грибы
Гистологическое исследование биоптата
Определение антигена Candida в сыворотке крови
Определение антител Candida в сыворотке крови
Консультация офтальмолога, ЛОР-врача, невропатолога
Микроскопия соскоба с языка
Идентификация возбудителя и определение чувствительности к антимикотикам
73

74.

Кандидозная пневмония
Клинический анализ крови
Общий анализ мочи
Биохимический анализ крови (глюкоза, АЛТ, АСТ, билирубин, мочевина, креатинин, K,
Ca, Na, Mg, P)
RW, ф50
УЗИ брюшной полости, почек
Определение антигена Candida в сыворотке крови
Определение антител к Candida в сыворотке крови
Посев крови на дрожжеподобные грибы
Посев кала на дрожжеподобные грибы
Посев тампона из зева на дрожжеподобные грибы
Микроскопия соскоба с языка
Идентификация возбудителя и определение чувствительности к антимикотикам
КТ легких
Бронхоскопия
Микроскопия БАЛ, мокроты
Посев БАЛ, мокроты на дрожжеподобные грибы
Эндоскопическая или чрезкожная биопсия очагов поражения
Микроскопия биоптатов
Посев биоптатов на дрожжеподобные грибы
Гистологическое исследование биоптата
74
Консультация офтальмолога, ЛОР-врача, фтизиатра

75.

Кандидоз полости рта и глотки
Клинический анализ крови
Общий анализ мочи
Биохимический анализ крови (глюкоза, АЛТ, АСТ, билирубин)
RW, ф50
Посев кала на дрожжеподобные грибы
Микроскопия соскоба с языка
Микроскопия налета со слизистой оболочки полости рта (3
раза)
Посев тампона из зева, слизистой щек, миндалин, десен на
дрожжеподобные грибы (3 раза)
Идентификация возбудителя и определение чувствительности к
антимикотикам
Консультация стоматолога по слизистым, ЛОР-врача,
эндокринолога
75