Оценка лабораторной диагностики сибирской язвы в объектах окружающей среды

1. Государственное учреждение высшего профессионального образования ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.М.С

ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.М.СЕЧЕНОВА
МЕДИКО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ
ИНСТИТУТ ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ
КАФЕДРА ЭПИДЕМИОЛОГИИ
ОЦЕНКА ЛАБОРАТОРНОЙ ДИАГНОСТИКИ
СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ В ОБЪЕКТАХ
ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
Исполнитель: Мушкетова Анна Алексеевна,
интерн кафедры эпидемиологии
Руководитель: Симонова Елена Геннадьевна,
д.м.н., профессор кафедры эпидемиологии
Куратор кафедры: Симонова Елена
Геннадьевна, д.м.н., профессор кафедры
эпидемиологии

2.

Цель: Оценка качества и эффективности лабораторной
диагностики сибирской язвы в почве, воде, иле.
Задачи исследования:
1) Изучить существующие методы лабораторной диагностики
сибирской язвы и провести их сравнительный анализ.
2) Проанализировать результаты лабораторных исследований
на наличие возбудителя сибирской язвы в объектах окружающей
среды в различных эпидемиологических ситуациях.
3) Оценить качество и эффективность лабораторной
диагностики в зависимости от применяемых методов и средств.
4) Разработать рекомендации по применению наиболее
эффективных методов и средств.

3. Введение В настоящее время сибирская язва продолжает представлять серьезную проблему для здравоохранения и сельского хозяйства многих с

ВВЕДЕНИЕ
В НАСТОЯЩЕЕ ВРЕМЯ СИБИРСКАЯ ЯЗВА
ПРОДОЛЖАЕТ ПРЕДСТАВЛЯТЬ СЕРЬЕЗНУЮ
ПРОБЛЕМУ ДЛЯ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И
СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА МНОГИХ СТРАН
МИРА, ВКЛЮЧАЯ РОССИЮ.
НА ТЕРРИТОРИИ РОССИИ УЧТЕНО БОЛЕЕ 35
ТЫС. СТАЦИОНАРНО-НЕБЛАГОПОЛУЧНЫХ
ПУНКТОВ, ГДЕ СУЩЕСТВУЮТ ПОЧВЕННЫЕ
ОЧАГИ, ОБУСЛОВЛИВАЮЩИЕ
ЭПИДЕМИЧЕСКИЙ ПОТЕНЦИАЛ
ИНФЕКЦИИ [ОНИЩЕНКО Г. Г. С СОАВТ.,
1999; ЧЕРКАССКИЙ Б. JI., 2002].

4. Актуальность

АКТУАЛЬНОСТЬ
Устойчивость сибиреязвенного микроба в почве, обусловленная
феноменальной способностью спор сохраняться десятилетиями
(Буравцева Н.П., Еременко Е.И., Цыганкова О.И. и др., 1998),
способствует возникновению потенциально опасных по сибирской
язве территорий, что приводит к развитию эпизоотических и
эпидемических вспышек этого заболевания (Онищенко Г.Г., 2002;
Онищенко Г.Г., Верещагин А.И., 2005).
В целях обнаружения В. anthracis в старых захоронениях и
подозрительных в контаминации территориях, и не допущения
возможного распространения спор возбудителя заболевания за
пределы саркофага проводятся лабораторные исследования
объектов окружающей среды. В старых сибиреязвенных
скотомогильниках на глубине 150-200 см выделяются атипичные
культуры, однако при многократном пассаже на лабораторных
животных они способны восстанавливать вирулентность и
свойства, соответствующие референтным штаммам.
(Александрова С.А., 2007 ).

5. Материалы исследования.

МАТЕРИАЛЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Данные литературы
Результаты исследований выполненных в лабораториях
ООИ Центров Гигиены и Эпидемиологии в субъектах
Российской Федерации
Материалы экспертиз эпидемиологической опасности
сибиреязвенных захоронений, проведенных ЦНИИЭ
Роспотребнадзора
Информационные материалы о применяемых
диагностических методах и средствах в лабораториях
ООИ Центров Гигиены и Эпидемиологии в субъектах
Российской Федерации
Нормативно-методические документы
Донесения о вспышках сибирской язвы.

6.

Глубина поиска 10 лет.
Методы исследования: описательнооценочный, ретроспективный
эпидемиологический анализ

7.

Были изучены эпизоотолого-эпидемиологической ситуации
по сибирской язве 8 субъектов Российской Федерации:
Алтайский край
Кировская область
Нижегородская область
Республика Татарстан
Свердловская область
Тверская область
Ульяновская область
Чувашская Республика

8.

Исследуемые территории с давних времен
характеризовались развитым
животноводством. Ранее в регионах
ежегодно регистрировались эпизоотии
сибирской язвы, в результате которых
образовались многочисленные почвенные
очаги и сибиреязвенные захоронения, часть
сведений о которых утеряна. В настоящее
время по показателям заболеваемости
сельско-хозяйственных животных лидирует
Алтайский край.

9. эпидемиологическое расследование заболеваемости сибирской язвой в алтайском крае в 2012 г.

ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОЕ РАССЛЕДОВАНИЕ ЗАБОЛЕВАЕМОСТИ
СИБИРСКОЙ ЯЗВОЙ В АЛТАЙСКОМ КРАЕ В 2012 Г.
В 2012г. сибирская язва зарегистрирована в двух районах Алтайского
края: Целинном (село Дружба, село Марушка) и Быстроистокском
(село Быстрый Исток) с количеством заболевших - 6 человек.
Вспышка сибирской язвы в Целинном районе началась со случая падежа
12.08.12г. на пастбище села Дружба частной коровы.
При проведении эпидрасследования были определены два участка
пастбища возможно являющихся почвенными очагами. Первый,
наиболее вероятный, старая свалка, прилегающая к пастбищу, куда
длительное время вывозился навоз с ферм, бытовой мусор и, не
исключено, трупы павших с/х животных. В 2011 г., с целью
освобождения площадей под посевы пшеницы, одним из местных
фермеров свалка бульдозерами была перемещена непосредственно на
пастбище.
Второй возможный почвенный очаг – полевой пруд. В июне 2012 г. здесь
проводились земляные работы, связанные со строительством
небольшой дамбы.

10.

С целью поиска источника заражения в лаборатории ФБУЗ «Центр гигиены и
эпидемиологии в Алтайском крае» исследовано 46 проб объектов окружающей
среды (почва с пастбища и ферм, трава с пастбища, вода из полевого пруда и
пруда расположенного в селе, водопроводная вода, корма).
• Получен 1 положительный результат в РНГА с антительным
диагностикумом (производство ФГУ «48 ЦНИИ МО РФ» г. Киров) от образца
почвы забранного в окрестностях полевого пруда, в дальнейшем, однако, не
подтвержденный методом ПЦР.
Специалистами ФКУЗ «Алтайская противочумная станция» Роспотребнадзора
(г.Горно-Алтайск) исследовано 176 проб почвы, в том числе: 126 - с различных
участков пастбища, свалки и из окрестностей полевого пруда; 20 - села
Рупосово (места содержания 5 собак); 10 –подворье в селе Дружба; 20 – на
территории фермерского хозяйства ИП М.В. в селе Марушка.
• Антиген сибиреязвенного микроба был выявлен в 2 пробах почвы взятых со
свалки в РНГА (диагностикум производства Казахского НЦКиЗИ). Однако
дальнейшее исследование положительных проб биологическим методом и в
ПЦР дало отрицательный результат.
• 2 положительных результата в РНГА, подтвержденных методом ПЦР,
получены из проб почвы забранных с места содержания павшей коровы
подворья В.
• Результат исследования 3 проб воды из сельского пруда и скважины,
расположенной на частном подворье В - отрицательный.

11.

По многочисленным литературным данным,
с помощью используемых в настоящее
время микробиологических методов
удается выделить микроб сибирской язвы
даже из заведомо инфицированных участков
почвы не более чем в 1-3% исследуемых проб.
Эти данные свидетельствуют о
необходимости усовершенствования
используемой в практике здравоохранения
схемы бактериологического исследования
внешней среды на обсемененность
Bac.anthracis.

12. Теоретическая подготовка

ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ПОДГОТОВКА
Какими нормативными документами
руководствуются в настоящее время для
лабораторной диагностики сибирской язвы из
объектов окружающей среды?
История развития лабораторной диагностики
сибирской язвы.
Материал для исследования, взятие, пересылка
материала и подготовка проб для исследования.
Какие проводятся лабораторные исследования?
Методика их проведения.

13. Нормативные документы:

НОРМАТИВНЫЕ ДОКУМЕНТЫ:
СП 1.3.3118-13 "Безопасность работы с микроорганизмами I - II
групп патогенности (опасности) "
СП 1.2.036-95 "Порядок учета, хранения, передачи и
транспортирования микроорганизмов I - IV групп
патогенности"
МУ 1.3.1794-03 "Организация работы при исследованиях
методом ПЦР материала, инфицированного
микроорганизмами I - II групп патогенности".
МУК 4.2.2413-08 "Лабораторная диагностика и обнаружение
возбудителя сибирской язвы"
МУК 4.2.2941-11 "Порядок организации и проведения
лабораторной диагностики сибирской язвы для лабораторий
территориального, регионального и федерального уровней"

14.

15.

Был проанализирован и систематизирован архивный
материал лабораторных исследований 19 скотомогильников
Российской Федерации. Была составлена таблица, в которой
отображается:
•В каких федеральных округах/областях проводились исследования
•Какая лаборатория выполняла исследования
•Периоды отбора проб и выполнения лабораторных исследований
•Количество проб окружающей среды
•Каким методом проводились лабораторные исследования
•Какими нормативными документами руководствовались при
проведении лабораторных исследований
•Описана место расположение и характеристика сибиреязвенного
скотомогильника (в каком году было сделано захоронение, его
содержимое, площадь)
•Заказчик лабораторных исследований

16.

17.

18.

19.

С целью оценки лабораторной
диагностики сибирской язвы в
объектах окружающей среды были
разосланы официальные запросы по 8
субъектам Российской Федерации
(Алтайский край, Кировская область,
Нижегородская область, Республика
Татарстан, Свердловская область,
Тверская область, Ульяновская
область, Чувашская Республика).

20.

Интересовало:
Информация по кадровому составу (количество
работников, укомплектован или нет штат сотрудников,
состав штата, образование и стаж работы сотрудников)
Информация по используемым тест-системам ПЦР,
питательным средам, диагностическим препаратам
(производителя, срок годности, и имеются ли в запасе
данные тест-системы)
Информация
по
техническому
оснащению
лаборатории (какие аппараты имеются/используются,
наличие испытательных и измерительных аппаратов,
когда
был
получен
аттестат
аккредитации
лаборатории)

21.

22.

23.

• Во многих лабораториях штат сотрудников не укомплектован (
Алтайский край, Кировская область, Свердловская область)
• Для ПЦР-диагностики используют тест-системы "АмплиСенс Bacillus anthracis-FRT"
Набор реагентов для выявления ДНК Bacillus anthracis в биологическом материале и
объектах окружающей среды методом ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной
детекцией в режиме реального времени". Производства ФГУН ЦНИИ Эпидемиологии
Роспотребнадзора
• Используют следующие питательные среды: ГРМ-бульон, ГРМ-агар, Питательная
среда для выделения возбудителя сибирской язвы сухая, Питательная среда для
выделения возбудителя сибирской язвы сухая с селективной добавкой, Бульон
Хоттингера, Агар Хоттингера, МПА, МПБ, Питательные среды для постановки
биохимического ряда.
• Диагностические препараты: Иммуноглобулины диагностические флуоресцирующие
сибиреязвенные споровые адсорбированные сухие,. Иммуноглобулины
диагностические флуоресцирующие сибиреязвенные вегетативные адсорбированные
сухие, Бактериофаг Fah-ВНИИВВиМ сибиреязвенный диагностический
• В лабораториях имеются в запасе тест-системы, наборы реагентов, питательные
среды, диагностические препараты с хорошим сроком годности на случай подозрения
сибирской язвы.
• Лаборатории имеют действующий аттестат аккредитации.
• Для ПЦР-диагностики используют: прибор для проведения ПЦР в режиме реального
времени Rotor-Gene Q, прибор для проведения ПЦР в режиме реального времени Rotor-Gene
6000

24.

25. Спасибо за внимание!

СПАСИБО ЗА
ВНИМАНИЕ!