Цитология. История развития науки о клетке. Лекция 1

1. Цитология. История развития науки о клетке

Кондратьева С.В.
К.м.н., Врач КЛД высшей категории
специалист Центра по лабораторному
делу и контролю качества Томской
области
Председатель правления ассоциации
специалистов лабораторной медицины
Томской области ТРОО «ПАСЛМ»
Томск - 2015г.

2.

• Цитология исследует элементарные
единицы строения,
функционирования и
воспроизведения живой материи.
• Объекты ее исследования – клетки
многоклеточных организмов,
бактериальные клетки и клетки
простейших, грибов и растений.

3. Роберт Гук (1635-1703гг)

• английский
естествоиспытатель,
учёный-энциклопедист
• обнаружил, что пробка
разделена на множество
крошечных ячеек,
напомнивших ему
монастырские кельи, и
он назвал эти ячейки
клетками (по-английски
cell означает «келья,
ячейка, клетка»).

4.

• Р.Гук обнаружил,
что пробка
разделена на
множество
крошечных ячеек,
напомнивших ему
монастырские
кельи, и он назвал
эти ячейки
клетками (поанглийски cell
означает «келья,
ячейка, клетка»).

5. Антони ван Левенгук (1632—1723)

• В 1674 году этот
голландский мастер с
помощью микроскопа
впервые увидел в капле
воды «зверьков» —
движущиеся живые
организмы.

6. Я. Э. Пуркине

• Впервые наблюдал
яйцо в яйцеклетке
курицы

7. Галилео Галилей

• Итальянский
ученый (15641642гг)
• В 1609-1610гг
сконструировал
первый микроскоп,
в 1624г
усовершенствовал
его для
использования

8. Марчелло Мальпиги

• итальянский анатом,
который первым
применил
микроскоп для
систематических и
сравнительных
исследований
растений и
животных

9. Карл Максимович Бэр (1792-1876гг)

• Открытия, сделанные
К.М.Бэром, показали,
что клетка – единица
не только строения, но
и развития
организмов.

10. Маттиас Якоб Шлейден (1804-1881гг)

• В 1837 Шлейден
предложил новую теорию
образования растительных
клеток, признавая
решающую роль в этом
процессе клеточного ядра
• В 1842 он впервые
обнаружил ядрышки в ядре

11. Теодор Шванн (1810- 1882гг)

• Выдвинул идею об
общности строения
животных и растений и
универсальности
клеточной организации,
впервые применив
термин «клеточная
теория».

12. Основные положения клеточной теории

• Все ткани состоят из клеток;
• Клетки растений и животных имеют общие
принципы строения, так как возникают
одинаковыми путями;
• Каждая отдельная клетка самостоятельна, а
деятельность организма представляется
суммой деятельности отдельных клеток.

13. Рудольф Вирхов (1821—1902)

• Описал процесс
деления клетки и
сформулировал одно из
важнейших положений
клеточной теории:
"Всякая клетка
происходит из другой
клетки".

14. АЛЕКСАНДР ФЛЕМИНГ (1881–1955)

• Английский бактериолог.
В 1945 удостоен
Нобелевской премии по
физиологии и медицине
(совместно с Х.Флори и
Э.Чейном) за открытие
антибиотика
пенициллина.
• Открыл митоз

15. Иван Дорофеевич Чистяков (1843-1877гг )

• Русский ботаник
• Описал фазы
митотического
деления

16. Иван Николаевич Горожанкин (1848-1904гг)

• Русский ботаник
• Установил
цитологические
основы
оплодотворения у
растений

17. Сергей Гаврилович Навашин (1857 – 1930гг

• Цитолог и эмбриолог
растений
• Открыл двойное
оплодотворение (1898) у
покрытосеменных
растений.
• Заложил основы
морфологии хромосом и
кариосистематики

18. Илья Ильич Мечников (1845-1916)

• Биолог, почетный член
Императорской Санкт Петербургской Академии
наук
• Открыл явление
фагоцитоза
• Способствовал развитию
иммунологии

19.

• До начала 30-х гг. ХХв.
в цитологии
преобладало
морфологическое
изучение структур
клетки, видимых в
световой микроскоп

20.

Сканирующий электронный микроскоп:
• В 1928- 1931гг был
сконструирован
электронный
микроскоп
• В середине ХХ века –
сканирующий
электронный
микроскоп

21.

Никакое обучение, на самом деле, не
прибавляет ума.
Оно лишь помогает сознательным
сотрудникам структурировать их
знания, добавлять что-то к
имеющемуся опыту, расширять
горизонты познания.
А для остальных обучение — трата
времени, сил и нервов.
Зав. каф. клинической лабораторной диагностики
ИГМАПО, проф. Скворцовой Р.Г.

22.

Клиническая лабораторная диагностика является
комплексной медицинской специальностью,
включающей следующие основные субдисциплины:
Клиническая биохимия
Гематология
Цитология
Лабораторная генетика
Общеклинические исследования
Иммунология
Изосерология
Молекулярная биология
Бактериология,
Вирусология
Паразитология
Токсикология
Коагулология

23.

Цитологические исследования в
лабораторной диагностике
Цитопатология, клиническая или
диагностическая цитология изучает
клеточный состав патологических
процессов.
В качестве отдельной медицинской
специальности официально признана в
1941г. После работ Паппаниколау Г. и
Траута Н.К.

24. Цитологические исследования в лабораторной диагностике

Заболевания органов желудочнокишечного тракта:
Пищевод, желудок;
Толстый кишечник;
Печень;
Поджелудочная железа
Заболевания периферических
эндокринных желез
Щитовидная железа;
Паращитовидная железа;
Вилочковая железа;
Надпочечники.
Заболевания центральной и
периферической нервной системы

25. Цитологические исследования в лабораторной диагностике

Заболевания моче-половых органов
Заболевания костно-мышечной ткани
Заболевания кожи, соединительной ткани
Заболевания молочной железы
Заболевания крови, кроветворной и
лимфатической системы

26.

В
нашей
стране
разработка
цитологического
метода
диагностики
начата в 1938г. В КДЛ Московского
научно-исследовательского
онкологического
института им. П.А.
Герцена.

27. Три этапа развития цитологии

1. эксфолиативная, в основном
гинекологическая цитология
2. аспирационная, расцвет с 1980х годов,
связан с развитием УЗ-диагностики
3. современный этап, связан с развитием
иммуноцитохимических, молекулярных
методов исследования и
автоматизированного скрининга в
гинекологической цитологии

28. Достоинства метода

Быстр, технически прост,
сравнительно дешев,
малотравматичен, информативен
Современное цитологическое заключение не
только констатирует наличие рака, но и
указывает гистологический тип опухоли и
степень
дифференцировки
согласно
общепринятым
международным
классификациям (МКБ-1О и ВОЗ).

29. По способу получения материала подразделяется:

1.дооперационную
(эксфолиативную,аспирационную,
абразивную)
2.интраоперационную

30. Эксфолиативная цитология включает:

Исследование вагинальных мазков,
мокроты, мочи, плевральной,
перикардиальной, цереброспинальной,
синовиальной жидкости и т.д.
Этот раздел цитологии отличается
простотой техники получения большого
количества различного типа клеток.
Однако, клеточный материал может быть
не очень хорошо сохранен.

31. Абразивная цитология

Материал получают из определенного
участка внутренних органов, в том числе
исследуются субэпителиальные
поражения с помощью фиброоптических
инструментов. При таком взятии
материала клетки хорошо сохраняются,
препараты легко интерпретировать.

32. Аспирационная цитология

Тонкоигольная биопсия позволяет
получить материал практически из
любого органа. Метод постоянно
совершенствуется и дает оптимальные
результаты.

33. Принципы цитологической диагностики

1. Отличие клеточного состава в норме и
патологии
2. Оценка совокупности клеток и фона
препарата
3. Цитолог должен иметь
паталогоанатомический базис
4. Каждое исследование завершается
формулировкой заключения.

34. Критерии цитологической диагностики злокачественных новообразований составляются из оценки клетки, ядра и ядрышка.

Клетка:
– увеличена в размере, иногда гигантская, редко размер близок к
норме, что затрудняет цитологическую диагностику, например, при
коллоидном, тубулярном раке, маститоподобном
варианте
долькового рака молочной железы, фолликулярном раке
щитовидной
железы,
карциноиде,
почечноклеточном
светлоклеточном
раке,
высокодифференцированных
веретеноклеточных саркомах;
– изменение формы и полиморфизм клеточных элементов;
– нарушение соотношения ядра и цитоплазмы в сторону
увеличения доли ядра;
– диссоциация степени зрелости ядра и цитоплазмы, например,
молодое ядро в ороговевшей цитоплазме при
высокодифференцированном плоскоклеточном раке.

35. Ядро

увеличение размера,
- полиморфизм,
- бугристость,
- неравномерный рисунок хроматина,
- наиболее постоянный признак – неровность
контуров,
- гиперхромия,
- фигуры клеточного деления в цитологических
препаратах сравнительно редки.
–

36. Ядрышко

– число ядрышек больше, чем в
нормальной клетке,
- ядрышки увеличены в размере,
- неправильной формы.

37. причины ошибочных заключений

1. в некоторых клетках рака критерии
злокачественности
могут отсутствовать или
быть выражены в неполном объеме.
2.
Необходимо
обращать
внимание
на
особенности взаимного расположения клеток,
характер межклеточных связей.
3. Заключение формулируют по совокупности
признаков
при
достаточном
количестве
клеточного материала. оценка неадекватного
материала – наиболее частая причина
ошибочных заключений.

38. Основные задачи цитологической диагностики

1. Формулировка заключения до лечения.
2. Интраоперационная срочная диагностика.
3. Контроль эффективности лечения.
4. Оценка важнейших факторов прогноза
течения заболевания.

39. Цитологическое заключение до лечения включает:

• определение гистогенеза новообразований;
• установление степени дифференцировки
опухолевого процесса;
• уточнение степени распространенности
опухоли;
• изучение фоновых изменений;
• определение некоторых факторов прогноза;
возможность
исследования
бактериальной
флоры.

40.

Критериями достоверности цитологического метода
являются результаты сопоставления с плановым
гистологическим исследованием.
Наибольший процент совпадений цитологического
заключения
с
окончательным
гистологическим
заключением
наблюдается
при
исследовании
образований кожи, молочной, щитовидной железы, при
метастатическом поражении лимфатических узлов.
Результаты исследования гиперпластических процессов
в эндометрии неудовлетворительны (30–50%).
3–24% исследований, в зависимости от локализации и
способа
получения
материала,
оказываются
неудачными
из-за
неадекватно
полученного,
неинформативного материала.

41. Гинекологическое скрининговое цитологическое исследование

42.

Цитологический скрининг представляет
собой комплекс организационных и
медицинских мероприятий,
направленных на раннее выявление
предопухолевых и опухолевых
заболеваний и снижение смертности.

43.

Рак шейки матки – наиболее
распространенный вид злокачественных
заболеваний у женщин.
В структуре заболеваемости
злокачественными новообразованиями
женского населения в России
(2010г.)число пациентов с раком шейки
матки составляло 6%.
Распространенность рака шейки матки в
России на 100 тыс. населения в 2000г. –
116 в 2010г. - 139

44.

Рекомендации для проведения эффективного
цитологического скрининга:
1. обследование женщин в возрастном
диапазоне от 15-65 лет
2. Интервал обследования 2 - 5 лет
Данный вид скрининга приводит к снижению
смертности на 84% - 90%*.

45.

46.

Цитологический скрининг онкологических
процессов шейки матки был организован в СССР
в конце 70-х - начале 80-х гг. прошлого столетия,
он сопровождался созданием в стране
централизованных цитологических лабораторий
(ЦЦЛ) и был регламентирован Приказом МЗ СССР
№ 1253 от 30.12.76. Нормативными документами
предусматривалось взятие мазков для
цитологического исследования у женщин 18 лет
и старше при ежегодных профилактических
осмотрах на предприятиях, а также у женщин,
посещающих женские консультации и
поликлиники (смотровые кабинеты).

47.

ПРОГРАММА ОРГАНИЗОВАННОГО
ЦИТОЛОГИЧЕСКОГО СКРИНИНГА РАКА ШЕЙКИ
МАТКИ ПРЕДУСМАТРИВАЕТ:
1. Организацию активного привлечения женщин
к цитологическому скринингу на основе
использования популяционного регистра
населения.
2. Сохранение существующих и создание новых
смотровых кабинетов и ЦЦЛ.
3. Осуществление двухступенчатого
цитологического исследования мазков из шейки
матки (1-й этап – цитотехнолог, 2-й этап – врач
клинический цитолог/цитопатолог).

48.

4. Передача информации о результатах
обследования в территориальное
координационное учреждение.
Направление пациенток с выявленной
патологией для дальнейшего
онкологического/ неонкологического
обследования и лечения в профильные
медицинские учреждения.

49.

5. Обеспечение и контроль качества
скрининговых цитологических
исследований (внутрилабораторный,
межлабораторный, региональный,
федеральный).

50.

6. Организация обучения и
продолженного обучения врачей,
биологов, медицинских технологов
(врачей клинических
цитологов/цитопатологов и
цитотехнологов), занимающихся
цитологическим скринингом,
проведение контроля уровня знаний и
навыков с выдачей удостоверения,
подтверждающего квалификацию
специалиста, участвующего в
скрининге.

51.

Сроки выполнения скринингового
исследования.
Срок от взятия материала до получения
заключения не должен превышать 7-14 дней за
исключением случаев, когда цитологическая
лаборатория обеспечивает медицинские
учреждения в отдаленных районах области (края,
республики), но не более 30 дней.
В зависимости от характера выявленной при
скрининге патологии пациентки направляются
для гинекологического, онкологического
обследование и/или лечения в соответствующие
территориальные медицинские учреждения.

52.

Цитологический метод является одним
из основных в раннем выявлении
предопухолевых
и
опухолевых
процессов.
Чувствительность
цитологического
метода исследования составляет 66 –
83%
Специфичность 60- 85%

53.

Цитологическая диагностика - оценка
морфологических особенностей клеток и
неклеточных элементов в препарате с целью
установления морфологического диагноза
неопухолевых
поражений,
доброкачественной или злокачественной
опухоли

54.

Цитологическое исследование- признанный
метод морфологической диагностики
Цитологический
диагноз
является
равноценным
гистологическому
основанием к выбору метода лечения
Точность цитологической диагностики
приближается
к
результатам
гистологического исследования или (в
некоторых ситуациях) превосходит их

55. Факторы, влияющие на качество

Взятие материала , приготовление препаратов
Некачественные стекла (толстые, старые, с
царапинами и проч.)
Маркировка и транспортировка материала
Некачественные реактивы для окрашивания
Нарушение процедуры окрашивания мазков
Квалификация кадров (гинекологи,
специалисты ЛМ)
Оформление первичной медицинской
документации (направление, результат,
журнал)

56.

Ограничения метода
Большие вариации чувствительности
в разных лабораториях в диапазоне
34% - 89%

57. Ограничения метода

Одна из основных причин низкой
чувствительности - погрешности при взятии
материала и приготовлении препаратов

58.

Получение материала и
приготовление препаратов
традиционным методом
• для цитологических препаратов нужны стандартные стекла
• материал важно распределять по стеклу тонким слоем

59. При традиционном цитологическом исследовании отмечено от 5 до 40% ложноотрицательных результатов

1.
2.
3.
4.
5.
Взятие материала
Потеря клеток при переносе
исследуемого материала с
инструмента для взятия на
поверхность предметного стекла
Некачественное приготовление мазка
Присутствие в образце элементов
крови
Интерпретация результатов

60.

Недостаток классической цитологии
Если
мазок
неадекватный
или
суждение о характере процесса по
полученному материалу невозможно,
требуется повторный визит к врачу
До следующего визита пациентка
может
принять
препараты,
способные завуалировать истинную
картину заболевания

61.

Пап-тест (цервикальный мазок)
классический:
–
–
влажная фиксация мазка,
окрашивание по Папаниколау
Цервикальный мазок в России:
–
–
высушивание препарата на воздухе без
предварительной фиксации
окрашивание по Романовскому (в
различных модификациях)

62.

Правила окрашивания мазка.
…….
Для окрашивания мазков используется
различные методики в том числе и метод
Папаниколау. При выполнении окраски важно
точно соблюдать протоколы приготовления
растворов и протокол окрашивания. Красители
различных производителей при одинаковых условиях
могут отличаться по интенсивности красящей
способности. Поэтому оптимальную концентрацию
(разведение) и время (экспозицию) окрашивания для
каждого красителя необходимо проверить перед
началом использования. При приготовлении
растворов необходимо учитывать рН воды: она
должна быть нейтральной (рН 6,8 - 7,2), что
обеспечивается использованием буферных
растворов.

63.

Аналитический этап.
Используется двухступенчатый просмотр
микропрепаратов. Первый этап
осуществляется цитотехнологом, с помощью
обычной микроскопии или специальных
автоматизированных систем. При выявлении
отклонений от нормы проводится второй этап
– просмотр и анализ препарата врачом.
Микроскопическое изучение мазка.
Целью микроскопического исследования
цитологических препаратов является: оценка
качества цитологического материала, определение
характера поражения шейки матки в соответствии с
общепринятой системой отчетности, в том числе и
по системе Бетесда («Системы отчетности Бетесда
для цитологического исследования шейки матки.
Определения, критерии и пояснительные
примечания. 2004»).

64. Оценка адекватности материала

традиционный
препарат
препарат жидкостной
цитологии
25 пациенток SurePath
19 (76%)
25 (100%)
75 пациенток NOVAPREP
62 (86%)
72 (96%)
Традиционный препарат
(окрашивание по Романовскому), х100
Препарат SurePath
(окрашивание по Папаниколау), х100

65. Оценка наличия цилиндрического и/или метаплазированного эпителия

Традиционный препарат
(окрашивание по Романовскому), х400
Препарат SurePath
(окрашивание по Папаниколау), х400

66. Первый этап исследования цитологического препарата – важна техника

Традиционная
Цитология
Получение материала
Акушерка (скрининг) или гинеколог (скрининг и
диагностика):
Приготовление
препаратов
Акушерка (скрининг) или гинеколог (скрининг и
диагностика):
Влажная фиксация
препаратов
для окрашивания по
Папаниколау
Акушерка (скрининг) или гинеколог (скрининг и
диагностика):
Просмотр препаратов,
сортировка на нормупатологию
Медицинский технолог (цитотехнолог)

67. Интерпретация патологических изменений

Традиционная
Цитология
Интерпретация патологических
изменений клеток NILM - в пределах
нормы
Медицинский
технолог
(цитотехнолог)
Интерпретация
патологическихизменений клеток NILM патологические изменения клеток без
признаков неоплазии
Медицинский
технолог
(цитотехнолог)
Интерпретация патологических
изменений –АSC-US, ASC-H
Врач
Интерпретация патологических
изменений – LSIL
Врач

68.

69.

70.

71.

72.

73.

74.

75.

76.

77.

78.

79.

80.

81.

82.

83.

84.

85.

86.

87.

88.

89.

90.

91.

92.

93.

94.

95.

96.

97.

98.

99.

100.

Контрольное задание № 1
Женщина, 35 лет
II фаза цикла
Профосмотр

101.

102.

103.

104.

105.

Цитологический диагноз?

106.

LSIL (CIN I)

107.

Контрольное задание № 2
Женщина, 43 года
II фаза цикла
Лейкоплакия

108.

109.

110.

111.

112.

Цитологический диагноз?

113.

Плоскоклеточный рак с
ороговением

114.

Контрольное задание № 3
Женщина, 43 года
I фаза цикла
Лейкоплакия

115.

116.

117.

118.

119.

120.

Цитологический диагноз?

121.

Цитограмма воспаления с
явлениями гиперкератоза

122.

Контрольное задание № 4
Женщина, 65 лет
Менопауза
Обследование

123.

124.

125.

126.

127.

Цитологический диагноз?

128.

Эпителий слизистой оболочки
атрофического типа

129.

Параллельное или последовательное
выполнение цитологических
исследований в комплексе с
молекулярными, в том числе
молекулярно-генетическими методами
Интеграция различных методов с целью
установления правильного диагноза
Алгоритм назначения лабораторных
исследований