Морфология клеток гранулоцитарного ряда

1.

ЗАПОРОЖСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ
МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ
Кафедра клинической лабораторной
диагностики
МОРФОЛОГИЯ КЛЕТОК
ГРАНУЛОЦИТАРНОГО
РЯДА
кандидат медицинских наук,
доцент
Беленький Сергей Андреевич
ЗАПОРОЖЬЕ
2016

2.

Гранулоцииты (зернистые
лейкоциты) — подгруппа
белых клеток крови,
характеризующихся наличием
крупного сегментированного
ядра и присутствием в
цитоплазме специфических
гранул, выявляемых в световой
микроскоп при обычном
окрашивании.

3.

ГРАНУЛОЦИТЫ
СЕГМЕНТОЯДЕРНЫЕ
НЕЙТРОФИЛ ЭОЗИНОФИЛ БАЗОФИЛ
Гранулы представлены крупными
лизосомами и пероксисомами, а также
видоизменениями этих органоидов.

4.

Гранулоциты — наиболее
многочисленные представители
лейкоцитов, их количество
составляет 50-80% всех белых
кровяных клеток.
Размеры зрелых зернистых
лейкоцитов —10–16 мкм.
Норма содержания в крови —
2–8x109 гранулоцитов в литре.

5.

Гранулоциты образуются в
костном мозге из общей клеткипредшественника.
Индукторы гранулоцитопоэза —
ИЛ-1, ИЛ-3, ИЛ-5,
грануллоцитарно-моноцитарный
колониестимулирующий фактор
(ГМ-КСФ, GM-CSF) и
гранулоцит-стимулирующий
фактор (Г-КСФ, G-CSF).

6.

Ответ на стимуляцию выражается в
виде 3-5 делений клетокпредшественниц (4 суток) и
морфологическом дозревании (5
суток) — итого 9 суток.
Выходя в кровеносное русло, гранулоциты практически сразу делятся на два равных пула: активно
циркулирующий и пристеночный
(клетки, находящиеся в состоянии
прилипания к поверхности венул).

7.

Динамическое равновесие пулов
регулируется агентами, усиливающими пристеночное стояние (хемокины ИЛ-1, ИЛ-8, ФНО, гамма-интерферон) и ингибирующими его
(гл. обр., кортикостероиды).
Пристеночное стояние — это
первый шаг перед выходом из
кровеносного русла в ткани.
Средний полупериод циркуляции
гранулоцитов – 6-7 дней, в тканях
они живут в среднем 2 дня.

8.

ГРАНУЛОЦИТОПОЭЗ
Морфологически
неидентифицируемые клетки:
плюрипотентная стволовая
клетка крови
мультипотентная коммитированная частично детерминированная клетка (родоначальная
клетка миелопоза – КОЕ-ГЭММ)
унипотентная коммитированная детерминированная клетка
(КОЕ-Гн, КОЕ-Эо, КОЕ-Б)

9.

Морфологически неидентифицируемые
клетки нельзя различить обычными
методами под световым или электронным микроскопом (любая из них выглядит как малый лимфоцит), но они
имеют свой фенотип (антигенный
профиль). Напр., для СКК характерно
присутствие на поверхности маркеров
CD34+, CD59+, Thy1/CD90+, C-kit/
CD117+ и отсутствие маркеров,
свойственных зрелым клеткам крови
(Lin-негативность);

10.

Благодаря определенному фенотипу
(антигенному профилю) морфологически
неидентифицируемые клетки
можно выявить методом
иммуноцитохимии
(иммунологический анализ цитологического материала проводится с
помощью меченых моноклональных
антител в условиях сохранения
морфологии клеток) – один из видов
иммунохимических методов:
иммуноферментного, иммунофлюоресцентного, радиоиммунного и т.п.

11.

ГРАНУЛОЦИТОПОЭЗ
Морфологически
идентифицируемые клетки:
миелобласт (не имеет гранул)
промиелоцит (первичные азурофильные гранулы)
миелоцит (появление специфических гранул, округлое ядро)
метамиелоцит (бобовидное
ядро)
палочкоядерный лейкоцит
сегментоядерный лейкоцит

12.

Процессы, происходящие по
мере созревания гранулоцитов:
уменьшение размеров клетки
изменение формы их ядер
(от округлой до сегментированной)
изменение ядерно-цитоплазматического соотношения
накопление и изменение состава гранул в цитоплазме (постепенное увеличение доли специфических гранул)

13.

Процессы, происходящие по
мере созревания гранулоцитов:
утрата способности к делению
нарастание подвижности клеток
приобретение разнообразных
рецепторов плазмолеммы, обеспечивающих выполнение главных функций клеток (фагоцитоз,
хемотаксис и др.).

14.

Миелобласт – диаметр 15-20 мкм.
Ядро округлое красно-фиолетового
цвета с нежно-сетчатой структу-рой
хроматина и 2-5 ядрышками синеголубого цвета, занимает боольшую
часть клетки (7:1; 4:1), узкий
поясок ярко-синей (базо-фильной)
цитоплазмы с неболь-шим
количеством красной (азурофильной) зернистости.
Цитохимически – положительная
реакция на миелопероксидазу.

15.

Промиелоцит – самая крупная
клетка (25 мкм). Овальное светлофиолетовое ядро в центре или
эксцентрично; хроматин мелкосетчатый с утолщенными участками; ядрышки нечёткие. Цитоплазма голубого цвета с перинуклеарной зоной просветления и
обильной азурофильной краснофиолетовой зернистостью, наслаивающейся на ядро. Ядерно-цитоплазматический индекс 5 : 1; 2 : 1.

16.

На начальных этапах развития промиелоцита эозинофильные гранулы
содержат большое количество базофильного вещества, воспринимающего
щелочную (синюю) краску, поэтому
большинство гранул оказываются
окрашенными в грязновато-синий цвет.
При крупной базофильной зернистости
в цитоплазме промиелоцита, нередко
покрывающей и ядро, его можно
ошибочно отнести к базофильному
типу, а при крупной эозинофильной
зернистости — к эозинофильному.

17.

Во избежание ошибок следует
учитывать не только окраску, но и
размеры и форму гранул:
в клетках эозинофильного ряда они
правильной округлой формы и
одинакового размера, а в клетках
базофильного ряда величина их
колеблется от мелких точечных до
крупных хлопьевидных образований
неправильной формы,
располагающихся и на ядре, и в
цитоплазме.

18.

Нейтрофильный миелоцит (12-18
мкм). Овальное (иногда с вдавлением)
тёмно-фиолетовое ядро в центре или
эксцентрично; хроматин грубый;
ядрышек нет. Цитоплазма голубоватокрасная с ацидофильной и нейтрофильной зернистостью разных оттенков (наряду с первичными появляются вторичные (специфические)
гранулы); чёткая перинуклеарная зона
просветления. Ядерно-цитоплазматитический индекс 3 : 1; 3 : 2.

19.

Эозинофильный миелоцит (12-18
мкм). Овальное (иногда с вдавлением)
красно-пурпурное ядро в центре или
эксцентрично; хроматин грубый;
ядрышек нет. Цитоплазма розоватосиняя с многочисленными крупными
округлыми специфическими оранжевокоричневыми гранулами); может
быть незначительное количество
неспецифических синих гранул.
Ядерно-цитоплазматитический индекс
3 : 1; 3 : 2.

20.

Базофильный миелоцит (12-15 мкм).
Его ядро напоминает ядро нейтрофильного миелоцита, но отличается
некоторым набуханием, из-за чего детали структуры менее четкие. Кроме
базофильного вещества в цитоплазме
можно обнаружить немного коричневато-фиолетовых нитей. Зернистость отличается от зернистости зрелого базофила более резко выраженными колебаниями в оттенках цвета зерен (темно-синяя, синяя и сине-розовая), располагающихся в цитоплазме и ядре.

21.

Различают материнские (незрелые)
и дочерние (зрелые) миелоциты.
Материнские – это более крупные
клетки, по морфологиии близки к
промиелоцитам; дочерние – более
мелкие, образующиеся в результате
деления и созревания материнских
форм.
Дочерний миелоцит – последняя
клетка в гранулоцитарном ряду,
способная к делению (!!!)

22.

Нейтрофильный метамиелоцит –
10-16 мкм диаметром.
Бобо- или почковидное тёмнопурпурное ядро в центре;
хроматин грубый, неравномерный,
глыбчатый; ядрышек нет.
Цитоплазма розово-голубоватого
цвета с обильной мелкой
азурофильной красно-фиолетовой
зернистостью.
Ядерно-цитоплазматический индекс
7 : 3; 1 : 1.

23.

Эозинофильный метамиелоцит –
10-16 мкм диаметром.
Бобо- или почковидное тёмнопурпурное ядро в центре;
хроматин грубый, сине-чёрный,
глыбчатый; ядрышек нет.
Цитоплазма розово-голубоватого
цвета с многочисленными
гранулами красно-оранжевой
окраски средней интенсивности.
Ядерно-цитоплазматический индекс
7 : 3; 1 : 1.

24.

Базофильный метамиелоцит –
10-16 мкм диаметром.
Бобо- или почковидное тёмнопурпурное ядро в центре;
хроматин грубый, сине-чёрный,
глыбчатый; ядрышек нет.
Цитоплазма розово-голубоватого
цвета с немногочисленными
крупными гранулами сине-чёрной
окраски. Ядерно-цитоплазматический индекс 7 : 3; 1 : 1.

25.

Палочкоядерный нейтрофил – 1016 мкм диаметром. Палочковид-ное
или изогнутое тёмно-фиолето-вое
ядро в центре с одинаковым
диаметром по длине; хроматин
грубый, конденсированный, крупноглыбчатый; ядрышек нет. Цитоплазма розового цвета с обильной
пылевидной нейтрофильной синефиолетовой зернистостью.
Ядерно-цитоплазматический индекс
1 : 1; 1 : 2.

26.

Палочкоядерный эозинофил – 1016 мкм диаметром. Палочковид-ное
или изогнутое тёмно-пурпурное
ядро в центре с одинаковым
диаметром по длине; хроматин
грубый, конденсированный, крупноглыбчатый; ядрышек нет. Цитоплазма розового цвета с
многочисленными оранжевокрасными гранулами.
Ядерно-цитоплазматический индекс
1 : 1; 1 : 2.

27.

Палочкоядерный базофил – 1016 мкм диаметром. Палочковидное
или изогнутое тёмно-пурпурное
ядро в центре с одинаковым
диаметром по длине; хроматин
грубый, конденсированный, крупноглыбчатый; ядрышек нет. Цитоплазма розовато-голубого цвета с
немногочисленными крупными
синевато-фиолетовыми и синечёрными гранулами. Ядерноцитоплазматический индекс 1:1; 1:2.

28.

Сегментоядерный нейтрофил –
10-15 мкм диаметром.
Дольчатое тёмно-фиолетовое ядро
в центре состоит из 2-5 сегментов
с тонкими перемычками; хроматин
конденсированный, плотно-компактный; ядрышек нет. Цитоплазма
синевато-розового цвета с
обильной пылевидной нейтрофильной розовато-фиолетовой
зернистостью. Ядерно-цитоплазматический индекс 1 : 3; 1 : 5.

29.

Сегментоядерный эозинофил –
10-15 мкм диаметром.
Дольчатое тёмно-пурпурное ядро в
центре состоит из 2-3 сегментов с
тонкими перемычками; хроматин
конденсированный, плотнокомпактный; ядрышек нет.
Цитоплазма розоватого цвета с
многочисленными крупными
круглыми оранжево-красными
гранулами. Ядерно-цитоплазматический индекс 1 : 3; 1 : 5.

30.

Сегментоядерный базофил –
10-16 мкм диаметром.
Дольчатое тёмно-пурпурное ядро в
центре, обычно из 2 сегментов с
мостиком-перемычкой; хроматин
конденсированный, плотнокомпактный; ядрышек нет.
Цитоплазма розовато-голубая с
немногочисленными крупными
тёмными сине-чёрными гранулами.
Ядерно-цитоплазматический индекс
1 : 3; 1 : 5.

31.

Миелоцит, метамиелоцит,
палочкоядерный и сегментоядерный нейтрофилы.
сегментоядерные эозинофил и
базофил

32.

Дифференциация миелоцита с вдавлением в ядре от метамиелоцита
Мысленно округляем ядро и
определяем его центр. В миелоците
выемка в ядре не достигает центра.
В метамиелоците вдавление более
выражено и соприкасается с предполагаемым центром ядра или выходит
за его пределы.

33.

Отличие метамиелоцита от
палочкоядерного гранулоцита
заключается в том, что у метамиелоцита поперечник ядра укладывается
в длинник ядра до 3 раз, а у
палочкоядерного гранулоцита –
более 3 раз.

34.

У сегментоядерного гранулоцита (в
отличие от палочкоядерного) ядро
состоит из 2-5 сегментов и хроматиновых мостиков, толщина которых менее
1/3 толщины ядерного сегмента.

35.

Если ядро имеет Т- или Y-образную
форму, представлено в виде узла или
наслаивающихся сегментов, клетку
относят к сегментоядерной.
Подобные ситуации встречаются
преимущественно среди
сегментоядерных нейтрофилов.

36.

Виды гранулоцитарных гранул:
Азурофильные (первичные) – разновидность лизосом; содержат типичные
для них гидролитические ферменты –
β-глюкуронидазу, кислую протеазу,
кислую фосфатазу, арил-сульфатазу,
кислую β-глицерофосфат-дегидрогеназу. Кроме того, содержат миелопероксидазу и лизоцим (муромидазу),
оказывающие бактерицидное действие.
По мере созревания клетки их число
уменьшается; в зрелых нейтрофилах их
10-20% от общего числа гранул.

37.

Виды гранулоцитарных гранул:
Специфические нейтрофильные
(вторичные) гранулы — их количество
возрастает по мере специализации
клетки и во взрослых нейтрофилах
составляет 80-90% от общего числа
гранул. Имеют округлую, овальную или
гантелевидную форму.
В
них нет лизосомальных ферментов и
пероксидазы, но имеются щелочная
фосфатаза, основные катионные
белки, фагоцитины, лактоферрин,
лизоцим, аминопептидазы.
.

38.

Виды гранулоцитарных гранул:
Поэтому, маркерами специфических
нейтрофильных гранул
могут служить щелочная
фосфатаза и катионные белки,
а первичных
азурофильных гранул кислая
фосфатаза и миелопероксидаза.

39.

Цитохимические маркерные
реакции
щелочная
фосфатаза
миелопероксидаза

40.

Миелобласт
CD33 CD13
CD15
Промие- CD33 CD13
лоцит
CD15
Миелоцит
Чёткие
ядрышки
Первичные гранулы (лизосомы)
Те же; CD45
Вторичные
CD14 CD11b (специфические)
гранулы
Метами- Те же и
елоцит
CD16
Бобовидное
ядро
Палочко- Те же и
ядерный CD16
Палочковидное
ядро
Сегмен- Те же и
тоядерн. CD16
Сегментированное ядро

41.

Поверхностные маркеры
CD11b – интегрин адгезии с эндотелием
CD13 – антиген миелоидных клеток
CD14 – гликозил-фосфатидил-инозитолсвязанный белок-корецептор, распознающий бактериальные ЛПС
CD15 (дисахарид) – участвует в хемотаксисе, фагоцитозе
CD16 – низкоафинный Fс рецептор
CD33 – семейство иммуноглобулинов;
внутриклеточный участок вовлечен в
ингибирование клеточной активности
(апоптоз клеток при ОМЛ)

42.

Поверхностные маркеры
CD45 – общий лейкоцитарный антиген
(тирозиновая протеинфосфатаза С –
компонент сигнальных путей)
CD59 – ингибитор мембраноатакующего
комплекса (протектин), регуляторный
белок системы комплемента.
CD90 – опосредует адгезию лейкоцитов
CD117 – цитокиновый рецептор фактора
роста стволовых клеток, тирозинкиназа
(активация сигнального пути клеточного выживания, пролиферации и дифференцировки)