Культуры клеток в ветеринарной вирусологии. Лабораторные модели вирусных инфекций

1. КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК В ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ

Лабораторные модели вирусных
инфекций

2. Локализация репликации вирусов

ДНК-вирусы
РНК-вирусы

3. Органы, пригодные для получения первичных культур клеток

Культуры клеток из:
–
–
–
–
–
Фибробласты;
Легкое;
Печень;
Почка;
Поджелудочная
железа;
– Эпителий яйцевода;
– Нервная ткань;
– и др.
Лучше для производства культур брать клетки молодых организмов, эмбриональные ткани

4. Органы, пригодные для получения первичных культур клеток

Лучше для производства культур брать клетки молодых организмов, эмбриональные ткани

5. Культура клеток из эмбриональных тканей

Посуда:
– Пробирки
бактериологические и
со стеклом;
– Пробирки Лейтона;
– Флаконы Карреля;
– Флаконы Орла;
– Матрасы (разные);
– Колбы и сосуды для
суспензионного
культивирования;
– и др.

6. Культура клеток из эмбриональных тканей

Нейтральная мойка
посуды:
– Раствор детского мыла;
– Специальные моющие
средства;
– 20 ополаскиваний
воджопроводной водой;
– 50 ополаскиваний
деионизированной
водой R≥12 Мом;
– Сушка, стерилизация
180 ºС 1 час;
– и др.

7. Культура клеток из эмбриональных тканей

8. Культура клеток из эмбриональных тканей

9. Культура клеток из эмбриональных тканей

Среды и растворы:
– Фосфатный буферный
раствор;
– Раствор Хенкса;
– Раствор Версена;
– Среда Игла;
– Среда 199;
– Сыворотка крови КРС;
– Сыворотка крови
фетальная;
– Раствор трипсина;
– и др.

10. Культура клеток из эмбриональных тканей

Извлечение эмбриона и
приготовление суспензии
клеток

11. Культура клеток из эмбриональных тканей

Культуры клеток,
тканей и органов
Переживающие
Культуры тканей
(плазменные и др.)
Растущие
Изолированные
органы
Монослойные
Первично
трипсинизированные
Субкультуры
Диплоидные
Перевиваемые

12. Культура клеток из эмбриональных тканей

Переживающие культуры клеток и
тканей
– Изолированные органы

13. Культура клеток из эмбриональных тканей

Переживающие культуры клеток и
тканей
– «Плазменные» культуры тканей и
блоттинг-метод культивирования

14. Культура клеток из эмбриональных тканей

Растущие культуры клеток и тканей
– Монослойные культуры

15. Культура клеток из эмбриональных тканей

Монослойные культуры клеток
– Первично трипсинизированные
Стадии приготовления:
–
–
–
–
–
–
–
–
–
извлечение, подготовка, эмбрионов;
гомогенизация эмбрионов;
обработка трипсином;
остановка ферментации;
осаждение крупных тканей;
осаждение фибробластов;
суспендирование в ростовой среде;
разливка в посуду для культивирования;
культивирование.

16. Культура клеток из эмбриональных тканей

Монослойные культуры клеток
– Субкультуры, диплоидные, перевиваемые
Стадии приготовления:
–
–
–
–
–
–
снятие монослоя версеном или трипсином;
остановка ферментации;
осаждение клеток;
суспендирование в ростовой среде;
разливка в посуду для культивирования;
культивирование.

17. Выделение и культивирование вирусов

Вируссодержащий гомогенат ткани
– Заражение культуры клеток.
Анализ через 18 – 72 часа:
– цитопатическое действие, разрушение
монослоя;
– + реакция гемадсорбции (если вирус
гемагглютинирующий);
– + метод флюоресцирующих антител;
– + электронномикроскопический
морфологический анализ .