Доставка генетических конструкций в клетки человека. (Лекция 6)

1.

ДОСТАВКА ГЕНЕТИЧЕСКИХ КОНСТРУКЦИЙ В
КЛЕТКИ ЧЕЛОВЕКА

2.

РЕТРОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Схема безопасной продукции ретровирусного вектора с высоким титром

3.

РЕТРОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Ретровирусные векторы переноса фирмы STRATAGENE

4.

РЕТРОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Ретровирусный пакующий вектор фирмы STRATAGENE

5.

РЕТРОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Env-экспрессирующие векторы фирмы STRATAGENE

6.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
host HLA class I
lipid membrane
protease
(p11, PR)
matrix protein
(p17, MA)
protein Vpr
RNA genome
capsid protein
(p24, CA)
nucleocapsid
protein (p7, NC)
host membrane
protein
cyclophilin
reverse
transcriptase
(p66/p51, RT)
p6
transmembrane
envelope protein
(gp41, TM)
integrase
(p31, IN)
Структура вириона HIV-1
surface envelope
protein (gp120, SU)

7.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
HIV virion
9
1
dsDNA
Golgi
Gag
8
4
ssRNA
5
Gag-Pol
ER
gp160
7
regulating
proteins
2
3
target cell
host DNA
nucleus
6
ssRNA
1 – viral entry
2 – fusion
3 – uncoating
4 – reverse
transcription
5 – integration
6 – transcription
7 – translation
8 – new HIV virion
budding
9 – maturation
Reproduced from Tibotec© with some modifications:
http://www.tibotec.com/content/backgrounders/www.tibotec.com/hiv_lifecycle.html
Жизненный цикл HIV-1

8.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
U3 R U5
gag
∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙ rev ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙
vif
y
∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙ tat ∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙
pol
vpr
vpu
U3 R U5
nef
env
The main HIV-1 provirus genome’s elements:
5’- as well as 3’-LTRs
packaging signal y
structural and enzymes-coding genes gag-pol and env
vif, vpr, vpu and nef accessory genes
tat and rev regulatory genes
by Christophe Delenda, 2004
Геном провируса HIV-1

9.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Envelop Vector
Packaging
Vector
Transfer Vector
TRANSIENT COTRANSFECTION OF 293T CELLS
PACKAGING CELLS MAKING
PSEUDOTYPED LENTIVIRUS
TRANSDUCTION-READY PSEUDOTYPED
LENTIVIRUS WITH LENTIVECTOR
CONSTRUCTION
Схема безопасной продукции лентивирусного вектора с высоким титром

10.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
by Christophe Delenda, 2004
«Бэкбон» лентивирусного вектора доставки

11.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Packaging plasmids comb, 3nd generation
Packaging plasmid, 2nd generation
Envelope plasmid
Пакующие векторы и векторы оболочки

12.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
FLUORESCENCE OF THE eGFP AND DsRed1 REPORTER PROTEINS
UNDER DAYLIGHT

13.

ЛЕНТИВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Репрезентативные микрофотографии мезенхимальных стволовых клеток,
модифицированных с помощью бицистронного лентивирусного вектора
pHR-CMV-dRep

14.

АДЕНОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Аденовирус

15.

АДЕНОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Геном аденовируса

16.

АДЕНОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Жизненный цикл аденовирусов

17.

АДЕНОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Возможные области клонирования
в аденовирусных векторах первого поколения

18.

АДЕНОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Карта аденовирусного вектора pAdeno-X фирмы Clontech Laboratories, Inc.

19.

АДЕНОВИРУСНЫЕ ВЕКТОРЫ
Получение аденовирусного вектора, зависимого от вируса-помочника