Микробиологическая диагностика туберкулеза и проказы

1. СТАВРОПОЛЬСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ МикробиологИческая диагностика туберкулеза и проказы

2.

Цель
— научится применять полученные знания по
общей микробиологии в частной на примере возбудителей
туберкулезной инфекции и проказы, используя знание
механизма развития данных инфекций в организме человека и
основных методов микробиологического исследования,
применение которого необходимо будущим специалистам в
рамках обязанностей врача.

3.

I. Вопросы для обсуждения:
1.Обсуждение теоретических и практических вопросов по теме занятия по
общепринятой схеме.
II.Практическая работа:
1. Демонстрация:
а) стенд-информация по теме: "Возбудители туберкулеза и проказы;
б) демонстрация роста туберкулезной палочки на специальных средах;
в) демонстрация печени, легких, селезенки морских свинок, погибших от
туберкулеза;
г) Демонстрация мазка из язв больного лепрой;
2. Лабораторная диагностика туберкулеза:
- микроскопический метод: приготовление мазков из прокипяченной мокроты
больного туберкулезом легких, окрасить по Цилю-Нильсену, микроскопия.
Методы обогащения материала для обнаружения возбудителя;
- метод микрокультур Прайса-Школьниковой;
- серодиагностика туберкулеза, постановка коалиновой реакции агглютинации,
демонстрация результатов реакции.

4.

3. Биопрепараты: вакцина БЦЖ, туберкулин.
4. Заполнить карту 13 «Туберкулез».
5. Обосновать показания и противопоказания к ревакцинации БЦЖ.
III. Вопросы для самоподготовки:
а) Каковы морфологические и культуральные особенности туберкулезной
палочки?
б) Какие существуют типы туберкулезной палочки и какова их роль в патологии
человека?
в) Почему возбудители туберкулеза устойчивы к воздействию внешних
факторов, кислот, спиртов и щелочей?
г) Как происходит заражение человека легочным туберкулезом и туберкулезом
других органов?
д)Какую роль играют лимфоциты в реакции повышенной чувствительности
замедленного типа при туберкулезе?
е) Очищенный туберкулин, его назначение и применение.

5.

ж) Какие микробиологические методы применяются для диагностики
туберкулеза?
з) Как осуществляется бактериоскопическая диагностика туберкулеза?
и) Какие методы используют для обогащения материала при
бактериоскопической диагностике туберкулеза?
к) Как осуществляется ускоренная диагностика туберкулеза (метод
микрокультур)?
л) Каково значение туберкулиновых проб в диагностике туберкулеза?
м) Какие препараты применяются для диагностики и специфической
профилактики туберкулеза?
н) Каковы морфологические свойства возбудителя проказы?
о) Какие микробиологические методы используются для диагностики проказы?

6. ТУБЕРКУЛЕЗ

7.

Туберкулез (от лат. tuberculum- бугорок) – инфекционное
заболевание человека и животных, для которого характерны
специфические воспалительные изменения в виде бугорков,
обнаруживаемых практически во всех органах и системах
человеческого организма и животных с преимущественной
локализацией в легких и лимфатических узлах.

8. Историческая справка

В XVII веке Франциск Сильвий впервые связал гранулёмы, обнаруженные в
различных тканях при вскрытии трупа, с признаками чахотки.
В 1819 году французский врач Рене Лаэннек предложил метод аускультации
лёгких, что имело большое значение в разработке методов диагностики
туберкулёза.
В 1882 году в Германии Роберт Кох после 17 лет работы в лаборатории открыл
возбудителя туберкулёза, которого назвали бациллой Коха (БК). Он обнаружил
возбудителя при микроскопическом исследовании мокроты больного.
В 1890 году Роберт Кох впервые получил туберкулин.

9. Таксономия

Семейство: Мicobacteriaceae
Род: Мicobacterium
Вид:
M. bovis
M. tuberculosis

10. Морфология и тинкториальные свойства

Признак
Примечание
Ф
О
Р
М
Ы
Типичные
Палочки
Ветвящиеся
Зерна «Муха»
Формы изменчивости типичных клеток
Ультрамалые
L-форма
О
К
Р
А
С
К
А
По Граму
Гр(+), темно-фиолетовая
По Цилю- Нильсену
Красная
Взаимное расположение
Поодиночке или цепочкой
Капсула
Микрокапсула
Жгутики
Нет
Споры
Нет

11. Культуральные свойства

37⁰С
Обязательно
Стимулирует
рост
Наличие О2
5-10%
СО2
Плотная питательная
среда ЛевенштейнаЙенсена
Колонии с
неровными
краями,
шероховатой
поверхностью
Условия
оптимального
роста
Характер
роста
Длительность
культивирования
3-4 недели
pH- 6,4-7,0
Питательные среды
Сотона
(жидкие или
полужидкие)
Тонкая нежная
пленка,
постепенно
утолщающаяся

12. Биохимические свойства

Нитраты и
нитриты
Не
восстанавливает
Восстанавливает
M. bovis
M. tuberculosis
Уреаза
Никотинамидаза
Пиразинамидаза
Образуют
Каталаза
(лабильная)

13. Резистентность

Солнечному
освещению
К 100⁰С
Чувствительны
В воде
> 1 часа
В желудочном
соке- 6 часов
Устойчивы
В почве6 мес.
В сухой
мокроте- 2
мес.
К химическим
дезинфектантам

14. Антигенные свойства

Антигены
Белки
Туберкулин
Липиды
Фосфатиды
Полисахариды
Корд- фактор
Индуцируют синтез
антител

15. Факторы патогенности

Факторы
Связаны с
высоким
содержанием
липидов
Главный фактор
патогенности
Гликолипидкорд-фактор
Защищает
туберкулезные
палочки от
фагоцитоза
Токсическое
действие на
ткани
Ингибирует фагосомолизосомальное слияние
в фвгоците
Повреждает мембраны
митохондрий в
фагоците

16. Эпидемиология

Источники инфекции- основным источником инфекции является больной
туберкулезом органов дыхания, выделяющий микробы в окружающую среду с
мокротой. Так же больные сельскохозяйственные животные, главным образом
крупный рогатый скот.
Пути передачи:
-Аэрогенный(воздушно- капельный, воздушно-пылевой)
Входными воротами при этом могут быть слизистая оболочка полости рта,
миндалины, бронхи и легкие.
- Реже пищевой путь – при употреблении термически не обработанных
мясомолочных продуктов.

17. Патогенез

Развитие туберкулезного процесса
Первичный
туберкулез
Вторичный
туберкулез
Старый
очаг
Свежий
очаг
Отсутствие
первичного
инфицирования
Прогрессирование
Суперинфекция
Очаговый
туберкулез
Расплавление
казеоза и
капсулы
Ранняя
генерализация
Реактивация
Расплавление
казеоза и
капсулы
Диссеминированный
туберкулез
Поздняя
генерализация

18.

19. Микробиологическая диагностика

Метод гомогенезации и осаждения
4.
Мокрота + NaOH (а:а).
Встряхивание.
Центрифугирование- осаждение.
Осадок + HCL – нейтрализация осадка.
5.
Итог- концентрация микробной массы в осадке раствора
1.
2.
3.

20.

Метод гомогенезации и флотации (всплывания)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Мокрота + NaOH (а:а).
Встряхивание.
Ксилол (бензол).
Встряхивание
Бактериальные клетки скапливаются на поверхности.
Итог – концентрация микробной массы в слое ксилола на поверхности
раствора.

21.

Особенности лабораторной диагностики
1.
2.
3.
4.
Бактериоскопический - ориентировочный.
Бактериологический – основной ( но длительное культивирование: 3-4
недели). Применение ускоренного метода микрокультуры.
Биологический – при трудностях выделения культуры бактериологическим
методом и для дифференциальной диагностики туберкулеза , вызванного
M. Tuberculosis или M. Bovis.
Аллергический – для определения инфицированности, аллергии, тенденции
к эпидемии туберкулеза, поствакцинальной аллергии, отбора на
ревакцинацию, на рентгенологическое обследование, для дифференциации
между аллергией, вызванной типичными и атипичными микобактериями.

22.

Ускоренный метод культивирования.
Методы Прайса – Школьниковой.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Предметное стекло
Толстым слоем мазок
Высушивание
Обработка H2SO4
Промывают физ. раствором
Опускают в стакан с цитратной кровью
Термостат 37⁰ - на 7 – 14 дней
При микроскопии: рост бактерий в виде тяжей.

23.

Лабораторные методы диагностики туберкулеза
Материал для
исследования
Органы и ткани
зараженных
свинок
Сыворотка
крови
Серологический
метод
РСК, РНГА
при активном
туберкулезе
Биологический
метод
Вскрытие
зараженных свинок
Острая и хроническая
инфекция
По результатам
биопробы
По биохимическим
свойствам
Идентификация

24.

Лабораторные методы диагностики туберкулеза
Материал для
исследования
Моча, ликвор,
мокрота
Бактериоскопический
метод
Форма, цвет,
взаимное
расположение
при окраске по
Цилю-Нильсону
Среда
ЛевенштейнаЙенсена
(рост 3-4 нед)
Кожа
Бактериологический
метод
Микрокультура
по ПрайсуШкольниковой
По
культуральным
свойствам
Аллергический
метод
Для определения
инфицированности,
поствакцинальной
аллергии, тенденции к
эпидемии туберкулеза,
для отбора на
рент.обследование,
ревакцинацию, для
дифференциальной
диагностики между
аллергией

25.

26. ПРОКАЗА

27.

Лепра- генерализованное первично-хроническое заболевание
человека, сопровождающееся гранулематозными поражениями
кожи и слизистой оболочки верхних дыхательных путей, а так же
периферичекой нервной системы и внутренних органов.

28. Историческая справка

Возбудитель лепры (Mycobacterium leprae) был открыт в 1873 в Норвегии
Г. Хансеном. Он работал в госпитале святого Йоргеса (основан в XV столетии)
в Бергене. Сейчас это музей, возможно, лучше всего сохранившийся
лепрозорий в Северной Европе. Бактерия, открытая Хансеном, стала первым
известным человечеству возбудителем болезни.

29. Таксономия

Семейство: Мicobacteriaceae
Род: Мicobacterium
Вид:
M. leprae

30. Морфология

Микобактерии лепры - прямые или слегка изогнутые палочки. В
пораженных тканях микроорганизмы располагаются внутри клеток, образуя
плотные шаровидные скопления - лепрозные шары, в которых бактерии
тесно прилегают друг к другу боковыми поверхностями («пачка сигар»).
Кислотоустойчивы, окрашиваются по методу Циля-Нильсена в красный цвет.
На искусственных питательных средах микобактерии лепры не
культивируются.

31. Биохимические свойства

M. leprae являются аэробами. Утилизируют глицерин и глюкозу в качестве
источников углеводов и имеют специфический фермент О- дифенолоксидазу
(ДОФА- оксидаза), отсутствующий у других микобактерий. Они обладают
способностью продуцировать внеклеточные липиды.

32. Антигенные свойства

M. lepra имеет общие для всех микобактерий антигены, в том числе с
вакцинным штаммом БЦЖ, что используется для профилактики лепры.
Показано наличие гетерогенных антигенов у M. lepra и лиц с группой крови
0(1), М+, Rh-, Р+. Эти люди более восприимчивы к данному заболеванию, так
ка антигенная мимикрия способствует персистенции M. lepra в
макроорганизме.
Из экстрактов M. lepra выделен и идентифицирован видоспецифический
фенольный гликолипид (ФГЛА). Антитела к ФГЛА обнаруживаются только у
больных лепрой, что используется для активного выявления больных лепрой
при обследовании больших групп лиц с помощью ИФА.

33. Эпидемиология

Источники инфекции- больной человек, который при кашле и чиханье, а так же
при разговоре выделяют в окружающую среду со слизью или мокротой
большое количество бактерий. Особенно опасны больные с
антибиотикоустойчиой лепроматозной формой лепры, у которых носовом
секрете содержится много M. lepra .
Пути передачи:
-Воздушно-капельный
-Контактный