Лабраторное_занятие_№_8_Общий_анализ_крови

1. Общий анализ крови

Лабораторное занятие № 8

2. Напоминаю!

•Напоминаю!
Кровь это:
• Жидкая ткань- единственная в
организме;
• За счет многообразия функций и
распространенности по всему
организму чутко реагирует на
любую патологию;
• Ценнейший биологический
материал для лабораторных
исследований т.к. кровь омывает
все органы и ткани и собирает
информацию и продукты обмена.
• Передача кислорода тканям
(эритроциты);
• Участие в иммунных реакциях
организма (лейкоцтиы);
• Участие в свертывании
(тромбоциты)

3. Кровь состоит из 2 фракций

• Жидкая часть - ПЛАЗМА
- Вода и электролиты;
- Белки в том числе
ферменты;
- Промежуточные и
конечные продукты
метаболизма;
- Система свертывания;
- Информационные
вещества (гормоны,
цитокины);
-Компоненты
внеклеточного
иммунитета (система
комплемента);
-И многое другое …..
• Клетки – ФОРМЕННЫЕ
ЭЛЕМЕНТЫ

4. Гемопоэз

-Синтез и созревание форменных
элементов крови
Центральный орган гемопоэза – красный
костный мозг, тимус
Дополнительно к гемопоэзу способны(в
порядке включения в процесс) –
селезенка, печень, лимфоузлы.
Особенность клеток крови заключается в
том, что:
Они созревают не там где потом живут.
Они очень узко специализированны .
Клетки крови лишаются очень важных
органелл (эритроциты и тромбоциты
млекопитающих лишены ядра).
В связи с этим срок жизни их не очень
большой.
Поэтому их обновление это процесс очень
быстрый и активный ( например у
человека постоянно вырабатывается и
обновляется 1,5 млн. клеток в секунду).

5. Что должно входить в общий анализ крови

Мануально или на
анализаторе
• Подсчет количества
эритроцитов
• Подсчет количества
лейкоцитов (общего)
• Подсчет количества
тромбоцитов
• Определение количества
гемоглобина
• Определение гематокрита
Исследование мазка
• Дифференциальный
подсчет лейкоцитов
(лейкоформула)
• Определение морфологии
клеток.

6. Необходимое оборудование

• Пробирки с
антикоагулянтом
• Иглы/ системы для
вакуумного забора крови
• Микроскоп
• Красители
• Центрифуга
• Счетная камера
• Лабораторные расходные
материалы (стекла,
пробирки, пипетки,
капилляры и др.)

7. Получение образцов

Подготовка пациента
• Минимизировать стресс
• Материал выбора –
венозная кровь
• Для рутинных скрининговых
исследований у
моногастричных необходима
голодная диета 12 часов
(минимум 4-6 часов)
• 2 артефакта:
• Хилез искажает замеры
гемоглобина
• Постпрандиальный
лейкоцитоз

8. Получение материала

• Взятие с иглы самотеком или в
вакуумную систему;
• Взятие из свежеустановленного
катетера;
• Нежелательно брать шприцом и
переливание в пробирку
(может произойти гемолиз
эритроцитов; начинается каскад
свертывания);
• Пробирку после взятия крови
сразу перемешивают с
антикоагулянтом;
• При взятии материала в
несколько пробирок кровь на
ОАК нужно брать в последнюю
очередь.

9. Антикоагулянты

• Вещества препятствующие свертыванию
крови;
• Несколько разных веществ с различным
механизмом действия;
• Требуют соотношения объема образца к
объему антикоагулянта;
• Каждый имеет свои плюсы и минусы;
• Есть видовые особенности.

10. ЭДТА ( этилен диамин тетраацетат, Трилон Б)

Золотой стандарт для исследования крови
млекопитающих.
Механизм основан на связывании ионов
Са, который участвует в каскаде
свертывающей системы.
При несоблюдении соотношения
образец/антикоагулянт часто образуются
агрегаты лейкоцитов и тромбоцитов.
Агрегация усиливается при длительном
хранении и охлаждении особенно у кошек
При превышении количества ЭДТА в
образце происходит эхиноцитоз
эритроцитов (изменение формы)
Пробирки с ЭДТА большинство
производителей маркирует фиолетовым
цветом. Наиболее удобны 2 и 4 мл
пробирки.
Желательно соблюдать номинальный
объем (набирать кровь до метки на
пробирки).
Неприменим для некоторых видов птиц и
для крови рептилий (гемолиз).

11. Цитрат (тринатрийцитрат, лимоннокислый натрий)

• Механизм действия
аналогичен ЭДТА.
• В практике больше
используется для
исследования
гемостаза, чем для
гематологии.
• Не предотвращает
агглютинации
тромбоцитов.
• Маркируются пробирки
голубым цветом.

12. Гепарин

Механизм действия основан на
связывании тромбина, не влияет на
концентрацию кальция и некоторых
других электролитов.
Ухудшает окраску лейкоцитов.
Хуже предотвращает агрегацию
тромбоцитов, чем ЭДТА.
Применим для биохимического
исследования электролитов в плазме.
Используется для определения
осмотической резистентности
эритроцитов и функциональных
исследований лейкоцитов (способность к
фагоциитозу).
Маркируется зеленым цветом
Является антикоагулянтом выбора для
рептилий и некоторых видов птиц.

13. Хранение и транспортировка образцов

• 1. Чем быстрее исследуется
образец и делается мазок, тем
лучше.
• 2.Если необходимо хранить
более 2 часов помещаем в
холодильник.
• 3. Хранить при температуре 2-8
градусов.
• 4. Не допускать охлаждение
ниже 0.
• 5.Перед исследованием
прогреть до комнатной
температуры 20 мин.
• 6.При транспортировке
исключить встряхивание и
перепады температур.

14. Осмотр образца перед работой

• На наличие сгустков покачать пробирку не менее
20 раз посмотреть в
проходящем свете. При
наличии сразу в брак(сгустки
искажают результат и
забивают анализатор).
• Выраженный хилез –
приобретает белесый
оттенок.
• Гемолиз эритроцитов.
• Агглютинация или
формирование монетных
столбиков – норма у лошади.

15. Мануальный подсчет форменных элементов

• Определение
• Имеет низкую
гематокрита в
воспроизводимость
центрифуге.
особенно по
эритроцитам.
• Подсчет эритроцитов и
лейкоцитов в камере
Горяева.
• Подсчет тромбоцитов
в камере Горяева или
по мазку.

16. Камера Горяева

• Камера Горяева – оптическое
устройство для подсчета клеток
или иных соизмеримых с ними
частиц в заданном объеме
жидкости.
• Состоит из толстого
предметного стекла, имеющее
прямоугольное углубление
(камеру)с нанесенной
микроскопической сеткой и
покровного стекла.
• Сетка камеры разделена на 225
больших квадратов из которых
25 разделены на 16 маленьких.
• Пустых квадратов ровно 100.

17.

• Сетка расположена на 7
мм ниже поверхности
стекла.
• Если на поверхность
камеры плотно
наложить покровное
стекло, то под ним
останется щель
глубиной 0,1 мм. Это и
есть собственно камера.
• В ней лежат клетки в
один слой.

18. Подсчет эритроцитов

• Подсчет эритроцитов
производят в 5 больших
квадратах , разделенных
на 16 маленьких,
расположенных по
диагонали сетки
камеры.
• Всего клетки считают в
80-ти маленьких
квадратах.
• Для подсчета
эритроцитов кровь
разводят
физиологическим
раствором.

19. Варианты разведения крови для подсчета эритроцитов

Вариант 1.
• 6 мл физраствора + 20
мкл цельной крови.
Результат умножить на
15 (перевести в
млн./мкл разделить
на 1000)
• Получается более
сильная степень
разведения и клетки
лежат более редко
Вариант 2
4 мл физраствора+
20мкл цельной крови.
Результат умножить на
10 (перевести в
млн./мкл разделить
на 1000).

20.

• Считают на
увеличении
микроскопа 10, 20 или
40.
• 40 не всегда способна
пробить покровное
стекло,
• 20 не входит в
стандартный набор
окуляров,
• 10 получается очень
мелкая картинка.

21. Референсные значения количества эритроцитов

Показатель
Эритроциты, 1012 /л
Среднее у собак
Среднее у кошек
5,6-8,0
5,3-10

22.

23. Подсчет лейкоцитов

Для подсчета лейкоцитов нужно
разрушить эритроциты
специальной жидкостью (жидкость
Тюрка: 5% раствор уксусной
кислоты подкрашенный
метиленовым синим).
Эритроциты это клетки не
имеющие ядра и ферментов,
отвечающих за целостность клетки.
Лизирующие жидкости разрушают
эритроциты, а лейкоциты остаются
целыми.
Разведение используют 1: 20 -380
мкл жидкости Тюрка и 20 мкл
цельной крови. Итоговый объем
400 мкл. Дают постоять этой
жидкости, чтобы больше
разрушилось эритроцитов.
жидкость Тюрка

24. Подсчет лейкоцитов

• Заполненную камеру
оставляют на 1-2
минуты, чтобы клетки
осели и начинают
подсчет.
• Вариант 1
• Подсчитывают
лейкоциты в 100
больших пустых
квадратах. Результат
умножают на 50
• Очень долгий и
трудоемкий.

25. Подсчет лейкоцитов

• Вариант 2
• 50 больших
неокрашенных
квадратов. Результат
умножить на 100.
• Более жизненный.

26. Референсные значения количества лейкоцитов

Показатель
Лейкоциты, 10 9 /л
Среднее у собак
Среднее у кошек
6,0-16,0
5,5-18,5

27. Подсчет тромбоцитов

• нормальное значение:
• Собака
160-550 х10^9л
• Кошка
160-630 х10^9л
• Подсчет тромбоцитов по
Фонио
• В мазке, подвергнутом
окрашиванию, считают 1000
эритроцитов и все попавшиеся
тромбоциты. В итоге получается
число, выражаемое промилле.
Чтобы получить абсолютное
количество тромбоцитов
данную величину перемножить
на количество эритроцитов,
имеющихся в 1 мкл, а затем
разделить на 1000.

28.

• Референсный метод –
проточноцитометрический
• Главная проблема
ручного подсчета –
коэффициент
вариации СV 7-23%
• При автоматическом
подсчете СV – 4%
• Метод Фонио это
скорее оценочный
метод.
• Позволяет оценить
морфологию клеток

29. Коэффициенты вариации при ручном и автоматическом подсчете тромбоцитов

Что такое СV=15%
• 150 127 150 173
• 50 42
50
58
• 500 425 500 575
Что такое СV=4%
144 150 156
48
50
52
480 500 520

30. Импедансный подсчет тромбоцитов

• Образец проходит
через апертуру
происходит местное
сопротивление, скачок
напряжения по этому
можно понять какого
размера клетка.
• Видео

31. Оптический подсчет тромбоцитов

• Видео 54.43

32. Флуоресцентный подсчет тромбоцитов

• Видео 1.06

33. Определение гематокрита

• Гематокрит – отношение
количества форменных
элементов к общему
объему крови.
• В основной массе
клеточные элементы
это эритроциты,
поэтому гематокрит
оценивает в большей
степени объем красной
крови.

34.

• Определение производят
центрифугируя стеклянные
капилляры в специальных
гематокритных центрифугах.
Под действием
центрифужных сил
(центростремительной и
центробежной) происходит
разделение крови на плазму
и форменные элементы.
Этот показатель прежде
всего зависит от
концентрации эритроцитов,
но также зависит от размера
эритроцитов и от объема
плазмы.

35.

• Можно определять на
обычных центрифугах
– 2000 об/мин 10 мин.
• Еще одно достоинство
можно определить
состояние плазмыоранжевая –
иктеричность, белаяхилез, гемолиз –
лаковая красная.

36.

• При надломе капилляра
можно получить либо
образец плазмы, либо
образец лейкоцитарной
пленки.
• Очень важно при
лейкопении получить мазок
из концентрированных
лейкоцитов т.к. в нативном
мазке лейкоциты почти
невозможно обнаружить.
• Или для поиска клеток
опухоли и при
центрифугировании будут
находиться в этой
лейкоцитарной пленке

37.

• Капилляр подносят к
пробирке, заполняют
кровью, закрывают
пластилином и
центрифугируют.
• Затем измеряют столбик
эритроцитов и
рассчитывают гематокрит
исходя из общего объема
крови
эритроциты_______
PCV= общий объем крови *100%
Норма : собаки - 37-55%
кошки – 26-48%

38. Референсные значения гематокрита

Показатель
Гематокрит,%
Среднее у собак
Среднее у кошек
37-55
26-48

39. Методика приготовления мазков крови

• Шаг 1.
• Поместить небольшую
каплю венозной крови
на предметное стекло, с
помощью стеклянной
капиллярной пипетки
(стекла используют либо
новые, либо хорошо
обезжиренные).
• Оставляют стекло в
горизонтальном
положении.

40.

• Шаг 2.
• Размазывают каплю
крови по стеклу с
помощью чистого
шлифованного стекла,
помещая его под
углом 45°; коротким
ребром, подождав,
пока вся кровь
расплывется по нему

41.

• Шаг 3.
• Как только кровь
растеклась по ребру,
быстрым движением от
капли проводят по
предметному стеклу. Не
следует сильно
нажимать на стекло, так
как при этом
травмируются
форменные элементы
крови.

42.

Шаг 4. После приготовления мазки
быстро сушат на воздухе до
исчезновения влажного блеска.
Подсушить мазок можно, подержав
его над абажуром лампы или
помахав им в воздухе. Хорошо
сделанный мазок тонок, имеет
желтоватый цвет и оканчивается
«метелочкой».
Густо-розовые и красноватые
мазки непригодны для счета, так
как они слишком толсты и
клеточные элементы при этом
дифференцировать невозможно.
При медленном высыхании может
изменяться морфология клеток.

43. Техника мазка - слева направо:

• Мазок 1 - Идеальный
мазок
• Мазок 2 – В момент
размазывания мазка
произошла остановка.
• Мазок 3 – Перекос
мазка.
• Мазок 4 - Капля крови
слишком большая.
• Мазок 5 - Мазок
слишком короткий.

44.

Фиксация мазков. Мазки крови
необходимо в течение 2 дней
после изготовления или
зафиксировать, или окрасить.
Нефиксированные мазки через
месяц теряют способность
правильно окрашиваться.
Для фиксации мазки погружают в
метиловый спирт (5 мин), этиловый
спирт (30 мин), этиловый спирт и
этиловый эфир поровну (30 мин)
или денатурированный спирт (30
мин). Мазки помещают в кюветы с
фиксатором и закрывают крышкой.
Мазки не должны соприкасаться.
После фиксации мазки высушивают
на воздухе.
Окраска по Романовскому-Гимзе
Краситель состоит из щелочной
части (азур II - ярко-синий цвет), и
кислой части (эозин - розовокрасный цвет).
В настоящее время используется
готовый краситель РомановскогоГимзе, из которого перед началом
работы готовят рабочий раствор из
расчета 1 капля краски на 1 мл
дистиллированной воды.
Высохший фиксированный мазок
помещается в кювету с рабочим
раствором краски на 25-40 минут
(конкретное время
устанавливается опытным путем
для каждой партии красителя).

45. Окраса мазка крови по Романовскому-Гимзе

• Ядра клеток - краснофиолетовые;
• Эозинофильные гранулы красновато-коричневые;
• Базофильные гранулы - синие;
• Нейтрофильные гранулы фиолетовые;
• Цитоплазма лимфоцитов голубая;
• Эритроциты - бледно-красные;
• Тромбоциты - наружная часть
синяя (более светлая);
внутренняя - фиолетовая (более
темная).

46. Окраска мазка крови по Май-Грюнвальду

Данный метод очень удобен для
визуализации гранулоцитов.
Для окрашивания применяется готовый
раствор эозинметиленового синего по
Маю-Грюнвальду. Мазок без
предварительной фиксации заливают
красителем, через 5 минут промывают и
высушивают.
Лимфоциты - ядра: сине-фиолетовые;
цитоплазма: голубая;
Моноциты - ядра: сине-фиолетовые;
цитоплазма: серо-голубая;
Гранулоциты - ядра: сине-фиолетовые;
гранулы: красные, фиолетовые, темносиние (зависит от типа);
Тромбоциты - наружная часть голубая;
внутренняя - фиолетовая;
Эритроциты - розовые.

47. Окраска мазка крови по Паппенгейму

Представляет собой комбинацию двух
предыдущих методов.
Сухие нефиксированные мазки помещаются в
кювету с раствором Мая-Грюнвальда на 3..5
минут. После этого контейнер с мазками
ополаскивается дистиллированной водой, после
чего мазки помещаются в кювету с разведенным
раствором Романовского-Гимзы на 20..30 минут.
После этого мазки промываются проточной
водой и высушиваются.
Ядра клеток - красно-фиолетовые;
Цитоплазма лимфоидных клеток - светло-синяя;
Лимфоидная азурная грануляция - ярко-синяя;
Миелоидная азурная грануляция - фиолетовая;
Нейтрофильные гранулы - светло-фиолетовые;
Эозинофильные гранулы - красные, краснокоричневые;
Базофильные гранулы - темно-фиолетовые,
черные;
Эритроциты - розовые (полихроматофильные
эритроциты - синеватые);
Тельца Жолли - красновато-фиолетовые;
Тельца Ауэра - ярко-красные.
Ретикулоциты имеют темно-синюю
зернистостость

48. Экспресс-методы окраски мазков

• Набор Лейкодифф
• Набор содержит растворы
для быстрого окрашивания
мазков крови.
• Окрашивание проводят
погружением
в окрашивающие растворы
мазков.
• В состав набора входят:
Фиксирующий раствор,
Окрашивающий раствор 1
(Эозин У), Окрашивающий
раствор 2 (Азур II)
• Таблетки для приготовления
промывающего раствора.

49. Экспресс-методы окраски мазков

Набор Дифф-квик
Набор готовых красителей используется
для быстрого дифференцированного
окрашивания простейших, бактерий,
клеточных структур и тканей различных
видов таких как плоский эпителий,
выпотные жидкости, эякулят,
периферическая кровь и прочие.
Для использования Дифф Квик не нужно
предварительно готовить рабочий раствор
красителя и время окрашивания длится
порядка 1 минуты, что значительно
упрощает процесс окрашивания.
Принцип метода:
Форменные элементы клеток и клеточных
элементов избирательно окрашиваются
реагентами, входящими в состав набора.
Дифференциальный анализ служит для
детальной оценки лейкоцитарного ряда, а
именно для разъяснения лейкопении или
лейкоцитоза.

50. Экспресс-методы окраски мазков

Набор Гемстандарт
Короткое время окраски – через 1 минуту
готово
• бриллиантовые цвета
• хорошее дифференциальное
окрашивание
• постоянно воспроизводимое качество
окраски
• результат окраски соответствует методу
Папенгейма
• применение в гематологии, цитологии и
гистологии
• хорошая стойкость а также долгая
годность, таким образом, экономично в
использовании
• для большой гематологической
лаборатории, для диагностики в
экстренном случае а также для
практической лаборатории.

51. Экспресс-методы окраски мазков

• Достоинства – быстрота и простота
исполнения. Хорошее окрашивание.
• Недостатки. Хуже прокрашивает ядерный
хроматин, чем спиртовые краски, часто не
окрашивают гранулы базофилов и других
гранулярных лейкоцитов.

52. Измерение гемоглобина

• Метод с гемометром
Сали.
• Очень старый метод
очень субъективен,
требует хорошего
освещения хорошего
цвета в стандартных
растворах.

53.

• Исследование на
биохимическом
анализатореполуавтомате.
• Но у птиц и рептилий
кровь нужно
отцентрифугировать
т.к ядра могут мешать.

54. Референсные значения количества гемоглобина

Показатель Среднее у
собак
Гемоглобин,
г /л
120-180
Среднее у
кошек
80-150
• В практике гемоглобин
при неотложном
состоянии не так
критичен как
гематокрит.
• Состояние красной
крови можно
определить по
гематокриту.

55. Общий сухой остаток крови

• Определяют на
рефрактометре.
• Сухой остаток прямо
пропорционален
количеству растворенных
веществ в плазме,
основную часть из
которых составляют белки.
• Для исследования
достаточно капли плазмы.
• Ее берут из
гематокритного капилляра

56. Интерпретация полученных показателей

По изменению гематокрита и сухого остатка
можно судить о состоянии пациента.
Гематокрит оценивает количество форменных
элементов,
сухой остаток оценивает количество белков
плазмы.
Когда повышен PCV и CO это свидетельствует о
дегидратации организма т.к. в крови повышено
как количество клеток так и количество
растворенных веществ в плазме и снижено
количество воды.
Повышен PCV а СО в норме или снижен то нужно
понять:
это является истинным повышением
эритроцитов или одновременная потеря воды и
сухого остатка ( острая кровопотеря после
сокращения селезенки).
состояние истинной полицитемии
PCV в норме, СО в норме – все хорошо?
PCV в норме, СО снижен – нет ли потери белка?
PCV понижен, СО повышен - анемия и
дегидратация. После регидратации анемия будет
еще больше.
PCV понижен, СО в норме недостаток продукции
эритроцитов или гемолиз эритроцитов.
PCV снижен, СО снижен – где то идет обширная
кровопотеря.

57.

При неотложном состоянии при минимуме
оборудования (центрифуга, стеклянные капилляры,
микроскоп, камера Горяева, ) быстро можно
определить следующие показатели:
• Подсчитать количество лейкоцитов в камере
Горяева.
• Изучить мазок крови (морфология клеток,
некоторые количественные показатели).
• Подсчитать гематокрит.
• Определить общий сухой остаток.
• Занимает 10 минут.

58.

• Общий анализ крови в автоматическом
анализаторе

59. Необходимое оборудование

1. Гематологический анализатор с
расходниками.
Принцип работы гематологических
анализаторов крови
В основе устройства автоматических
гематологических анализаторов лежат три
технологии:
Электрический импеданс
Проточная цитометрия
Флуоресцентная проточная цитометрия
Эти три метода предполагают
использование химических реагентов,
приводящих к лизису или изменению
клеток для фиксации измеряемых
параметров.
Например, электрический импеданс
позволяет дифференцировать эритроциты,
лейкоциты и тромбоциты по объему.
Добавление ядрообразующего агента,
который сжимает лимфоциты больше, чем
другие лейкоциты, позволяет
дифференцировать объем лимфоцитов.

60.

Электрический импеданс
Традиционным методом является метод
электрического импеданса.
Суть его состоит в том, что кровь пропускается
между двумя электродами через отверстие
настолько узкое, что через него может проходить
только одна клетка. Импеданс или, проще говоря,
проводимость среды изменяется по мере
прохождения клеток через отверстие и это
изменение пропорционально объему/размеру
проходящих клеток. Данная зависимость и
позволяет производить их дифференцированный
подсчет.
Импедансный анализ позволяет выполнить
клинический анализа крови с определением
гранулоцитов, лимфоцитов и моноцитов, но он
не позволяет различать гранулярные лейкоциты
одинакового размера: эозинофилы, базофилы и
нейтрофилы.
Скорость автоматического подсчета по данному
методу в гематологических анализаторах
составляет до 10000 клеток в секунду, и типичный
анализ по импедансному методу может быть
проведен менее чем за минуту.
Видео 29.28

61. Проточная цитометрия

Лазерная проточная цитометрия –
более дорогостоящий метод по
сравнению с импедансным,
поскольку требует более дорогих
реагентов, но он позволяет
получать детальную картину
морфологии клеток крови. Это
лучший метод для определения
лейкоцитарной пятикомпонентной
формулы.
Суть метода состоит в том, что
поток образца крови проходит
через лазерный луч. Измеряется
поглощение луча, а рассеянный
свет измеряется под разными
углами для определения
зернистости, диаметра и
внутренней сложности клетки. Это
фактически те же самые
морфологические характеристики
клетки, которые можно определить
вручную с помощью микроскопа.

62. Флуоресцентная проточная цитометрия

• Добавление специальных
флуоресцентных добавок
позволяет расширить
применение проточной
цитометрии до
возможности оценивать
специфические популяции
клеток.
• Флуоресцентные
красители позволяют
оценить соотношение
ядро-плазма в каждой
окрашенной клетке. Это
используется для анализа
тромбоцитов, и
ретикулоцитов.
• Видео 54.56 мин

63.

64. Эритроциты RBC

Эритроциты RBC
Red Blood Cells/эритроциты, 1012 /л -наиболее
многочисленные представители форменных
элементов крови. Они образуются из
ретикулоцитов по выходе их из красного
костного мозга. Окончательно ретикулоцит
созревает в течение нескольких часов.
Эритроцитоз—повышение количества
эритроцитов, может быть абсолютным и
относительным.
Относительный эритроцитоз – вследствие
уменьшения объёма циркулирующей крови или
выброса эритроцитов из кровяных депо.
Причины:
возбуждение;
физическая нагрузка;
боль;
потеря жидкости (диарея, рвота, избыточный
диурез, избыточная потливость);
лишение питья;
повышение сосудистой проницаемости с
выходом в ткани жидкости и белков.
Абсолютный эритроцитоз – увеличение массы
циркулирующих эритроцитов вследствие
усиления гемопоэза.
Симптоматические эритроцитозы, вызванные
гипоксией:
заболевания лёгких;
пороки сердца;
наличие аномальных гемоглобинов;
повышенная физическая нагрузка;
пребывание на большой высоте над уровнем
моря;
ожирение;
хроническая метгемоглобинемия (редко).
Симптоматические эритроцитозы, связанные с
неадекватно повышенной продукцией
эритропоэтина:
гидронефроз и поликистоз почек (с местной
гипоксией ткани почек);
рак паренхимы почки (выделяет эритропоэтин);
рак паренхимы печени (выделяет подобные
эритропоэтину белки).
Симптоматические эритроцитозы, связанные с
избытком адренокортикостероидов или
андрогенов в организме:
синдром Кушинга;
феохромоцитома;
гиперальдестеронизм

65. Эритроциты RBC

Эритроцитопения – снижение количества
эритроцитов в крови.
Причины:
1. Анемии различного генеза.
2. Увеличение объёма циркулирующей крови
(относительная анемия):
гипергидратация;
секвестрация эритроцитов в селезёнке;
гиперпротеинемия;
гемоделюция (разведение крови) в случае
опережения расширения сосудистого
пространства и распределения общей
эритроцитарной массы в организме (анемия
новорождённых, анемия беременных);
повышение концентрации цитотоксических
эстрогенов при функционирующих кистозных
яичниках (собаки).
3.Инфекционные агенты:
Ehrlichia canis (собаки);
парвовирус (собаки);
инфекция кошачьим вирусом лейкоза (ВЛКинфекция);
панлейкопения (кошки – редко);
инфекция вирусом иммунодефицита кошек
(ВИК-инфекция).
4.Иммуноопосредованные — идиопатическая
апластическая анемия.
5.Лучевая терапия.
6.Миелофтиз (расстройство, которое
характеризуется замещением гемопоэтических
клеток аномальными клетками):
миелогенный лейкоз;
лимфоидный лейкоз;
множественная миелома;
миелодиспластические синдромы;
миелофиброз;
остеосклероз;
метастазирующие лимфомы;
метастазирующие тучноклеточные опухоли.

66. Гемоглобин (Hb, Hemoglobin), г/л

Гемоглобин (Hb, Hemoglobin) представляет собой железо-порфириновый белковый
комплекс, который занимает центральную позицию в физиологии как молекула,
связывающая, транспортирующая и доставляющая кислород к тканям.
Также гемоглобин способен связывать углекислый газ и доставлять его в легкие.
Гемоглобин синтезируется в развивающихся эритроцитах, его синтез согласовывается со
стадией развития предшественников эритроцитов.
Гемоглобин состоит из двух альфа- и двух бета-полипептидных цепей, каждая из которых
содержит небелковую простетическую группу (гем), прочно удерживающуюся в гидрофобной
впадине молекулы гемоглобина. Синтез цепей гема и глобина тонко скоординирован так, что
свободного гема или глобина в цитоплазме развивающихся эритроидных клеток мало или
вообще нет.
Повторное использование гемоглобина происходит после разрушения эритроцитов внутри
или вне сосудистого русла.
В физиологических условиях осуществляется внесосудистый гемолиз старых эритроцитов,
которые в дальнейшем попадают в селезенку, где фагоцитируются макрофагами.
При внутрисосудистом гемолизе эритроцитов гемоглобин высвобождается в кровоток в
свободной форме. Такой гемоглобин обладает высокой окислительной способностью. Плазма
крови быстро «очищается» от свободного гемоглобина с помощью нескольких механизмов.
Наиболее важным является связывание гемоглобина с гаптоглобином с последующим
захватом этого комплекса клетками ретикулоэндотелиальной системы (РЭС). Период
полувыведения гемоглобина составляет 20-30 минут.

67. Гематокрит (НСТ, Hematocrit),% 

Гематокрит (НСТ, Hematocrit),%
• Гематокрит (НСТ, Hematocrit) – это процентное
содержание эритроцитов в крови.
• Измерение гематокрита можно осуществить
методом центрифугирования с использованием
микрогематокритных капилляров. Погрешность
такого измерения составляет всего ± 1%.
• Одним из преимуществ гематологических
приборов является то, что уровень гематокрита
может можно определить расчетным путем с
использованием концентрации эритроцитов (RBC) и
среднего объема эритроцитов (MCV): HCT (%) =
MCV(фл)×RBC( 1012 /л )/10.

68. Эритроцитарные индексы

СРЕДНИЙ ОБЪЁМ
ЭРИТРОЦИТА MCV (Mean Cell
Volume) ) представляет собой
средний объем эритроцита,
измеренный в фемтолитрах (фл) –
показатель, используемый для
характеристики типа анемии.
Значение MCV в пределах нормы
характеризует эритроцит как
нормоцит, меньше нормального
как микроцит, больше
нормального интервала макроцит
Референсные интервалы:
собаки – 60 –72 fL
кошки – 39 – 50 fL;
Повышено (макроцитоз):
макроцитарные и мегалобластические
анемии (В12-фолиеводефицитная);
анемии,могущие
сопровождаться макроцитозом
(гемолитическая);
здоровые грейхаунды;
врожденый макроцитоз у пуделей;
регенеративные анемии;
Понижено (микроцитоз):
микроцитарные
анемии (железодефицитная,
сидеробластическая, талассемия);
анемии,
которые сопровождаться микроцитозо
м (гемолитическая, гемоглобинопатии);
портосистемные анастомозы и липидоз
у кошек;
печеночная недостаточность;
здоровые собаки азиатских пород
(шиба ину, акита, джиндо);
молодые животные;
гипертонические характеристики
нарушения водно-солевого баланса.

69. Эритроцитраные индексы

• СРЕДНЯЯ КОНЦЕНТРАЦИЯ
ГЕМОГЛОБИНА В
ЭРИТРОЦИТАХ MCH (Mean
Cell Hemoglobin) – среднее
содержание гемоглобина в
эритроцитах, рассчитанное
в пикограммах (пг).
• Расчетный показатель: MCH
(пг) = (концентрация Hb ×
10) ÷ RBC (млн.)
• Референсные интервалы:
• собаки – 19,5 — 25,5 Pg
• Кошки –12,5 — 17,5 Pg
MCH не дает дополнительных преимуществ
при интерпретации клинического анализа,
так как зависит от MCV и MCHC. Например,
более мелкие эритроциты содержат меньше
Hb, таким образом, значение MCH будет
снижено.
Величина MCH, как правило, прямо
коррелирует с величиной MCV, за
исключением животных, у которых имеются
макроцитарные гипохромные эритроциты.
В некоторых случаях при железодефицитной
анемии MCH может уменьшаться до
снижения MCHC.
MCH обычно не используется в
классификации анемий. Если динамика
значений MCHC и MCH отличается, то
интерпретация концентрации гемоглобина
должна основываться на значении MCHC,
поскольку этот индекс корректируется исходя
из объема клеток

70. Эритроцитраные индексы

MCHC (Mean Corpuscular
Hemoglobin Concentration) –
средняя концентрация
гемоглобина в эритроцитах.
Расчетный показатель: MCHC (г/дл)
= (Концентрация Hb (пг)×100) ÷ HCT
(%)
Референсные интервалы:
собаки – 320-385 г/л
кошки – 310 — 385 г/л
Повышение МСНС (бывает крайне редко) –
причины:
гиперхромные анемии (сфероцитоз,
овалоцитоз);
гиперосмолярные нарушения водноэлектролитного обмена.
Ложное повышение МСНС (артефакт) – причины:
гемолиз эритроцитов in vivo и in vitro;.
липемия;
присутствие телец Хейнца в эритроцитах;
агглютинация эритроцитов в присутствие
холодовых агглютининов.
Понижение МСНС причины:
регенераторные анемии (если в крови много
стрессовых ретикулоцитов);
хроническая железодефицитная анемия;
наследственный стоматоцитоз (собаки);
гипоосмолярные нарушения водноэлектролитного обмена.
Ложное понижение МСНС – у собак и кошек с
гипернатриемией

71. Эритроцитарные индексы

• ПОКАЗАТЕЛЬ
АНИЗОЦИТОЗА
ЭРИТРОЦИТОВ (RDW) –
коэффициент вариации
распределения
эритроцитов по объёму.
• Состояние, при котором
одновременно
обнаруживаются
эритроциты различной
величины (анизоцитоза).
• Референсные интервалы:
• Собаки – 11,0 – 16,0 %;
• Кошки – 13,5 – 18,0 %;
• Повышено:
• макроцитарные анемии;
• миелодиспластические
синдромы;
• метастазы
новообразований в
костный мозг;
• железодефицитные
анемии.

72. Тромбоциты PLT

Тромбоциты (PLT, Platelets) – это безъядерные кровяные
пластинки (осколки мегакариоцитов), являющиеся одним из
факторов первой линии защиты от кровотечения в местах
повреждения сосудов.
Тромбоцитоз —повышение количества тромбоцитов может
быть первичным (результат первичной пролиферации
мегакариоцитов) и вторичным (реактивным), возникающим на
фоне какого либо заболевания.
Причины:
миелопролиферативные процессы (эритремия, миелофиброз);
хронические воспалительные заболевания;
злокачественные новообразования;
кровотечения, гемолитическая анемия;
после хирургических операций;
после спленэктомии;
применение кортикостероидов.
Тромбоцитопения — уменьшение количества тромбоцитов в
крови может быть вызвано снижением их образования
(недостаточностью кроветворения), повышением их деструкции
или секвестрации, а также повышенным потреблением.
Причины:
наследственные тромбоцитопении;
ДВС-синдром;
поражение костного мозга;
инфекции;
тромбоэмболическая болезнь;
гиперспленизм;
васкулит;
иммунообусловленные заболевания;
лучевая терапия;
применение антигистаминов, антибиотиков, диуретиков,
противосудорожных средств, викасола, гепарина, препаратов
наперстянки, нитритов, эстрогенов и пр.
У кошек размер тромбоцитов почти в два раза
больше, чем у других видов животных. Кроме того,
макротромбоциты обнаруживаются при многих
гематологических нарушениях у кошек. Появление в
крови макротромбоцитов не является
патогномоничным признаком, но это приводит к
ложному занижению числа тромбоцитов при
автоматическом подсчете.
В случаях уменьшения количества тромбоцитов ниже
референсных значений производится
дополнительное микроскопическое исследование
мазка крови. При этом ветеринарный гематолог
обязательно указывает наличие макротромбоцитов.
При агрегации тромбоцитов также может
происходить ложное занижение результатов при
автоматическом подсчете тромбоцитов. Хотя
агрегация может происходить у любых видов
животных, данное явление наиболее характерно для
кошек.
У собак породы грейхаунд, как правило,
наблюдается более низкое количество тромбоцитов
в крови по сравнению с другими породами собак.
Спонтанные петехии или экхимозы обычно не
происходят до тех пор, пока количество тромбоцитов
ниже 20х109л. Превышение референсного предела
количества тромбоцитов (как правило, более чем
800х109л) указывает на тромбоцитоз. Тромбоцитоз,
связанный с воспалительным процессом
(реактивный тромбоцитоз), как правило, не связан с
высоким риском развития тромбоза. Однако
тромбоцитоз, связанный с миелопролиферативными
заболеваниями, может увеличить риск развития
тромбоэмболических заболеваний.

73. ЛЕЙКОЦИТЫ (WBC)

ЛЕЙКОЦИТЫ (WBC)
ЛЕЙКОЦИТЫ (WBC White Blood Cells) образуются в
красном костном мозге и в лимфатических узлах.
Лейкоциты разделяют на гранулоциты и
агранулоциты. Гранулоциты, включая нейтрофилы,
эозинофилы и базофилы, имеют
цитоплазматические гранулы и дольчатые ядра.
К агранулоцитам относятся моноциты и лимфоциты.
У этих клеток отсутствуют цитоплазматические
гранулы, в целом они имеют круглые или
бобовидные ядра с неровными контурами.
Основная функция лейкоцитов — защита организма
от чужеродных агентов. Иммунологические
реакции реализуются благодаря фагоцитарной
активности лейкоцитов, их участию в клеточном и
гуморальном иммунитете, обмене гистамина.
Референсные интервалы:
собаки – 6,0 – 16,0 х 10 9 /л
кошки – 5,5 – 18,5 х 10 9 /л
Лейкоцитоз – увеличение количества лейкоцитов
выше пределов нормы.
Физиологический лейкоцитоз :
страх;
возбуждение;
грубое обращение;
физические нагрузки;
судороги.
Стрессовый лейкоцитоз:
травмы;
хирургические операции;
приступы боли;
злокачественные новообразования;
спонтанная или ятрогенная болезнь Кушинга;
вторая половина беременности
(физиологический со сдвигом вправо).
Воспалительный лейкоцитоз:
инфекции (бактериальные, грибковые,
вирусные и др.);
травмы;
некрозы;
аллергии;
кровотечения;
гемолиз;
воспалительные состояния;
острые местные гнойные процессы.
Неадекватные реакции лейкоцитов:
тяжёлые гнойные инфекции;
грамотрицательный сепсис.

74. ЛЕЙКОЦИТЫ (WBC)

ЛЕЙКОЦИТЫ (WBC)
Лейкопения – уменьшение количества
лейкоцитов меньше пределов нормы.
Снижение количества лейкоцитов в результате
уменьшения гемопоэза:
инфекция вирусом лейкоза кошек (кошки);
инфекция вирусом иммунодефицита кошек
(кошки);
вирусный энтерит кошек (кошки);
парвовирусный энтерит (собаки);
панлейкопения кошек;
гипоплазия и аплазия костного мозга;
повреждение костного мозга химическими
средствами, лекарственными препаратами и т.д.
миелопролиферативные заболевания ;
миелофтиз;
приём цитотоксических препаратов;
ионизирующее облучение;
острые лейкозы;
метастазы новообразований в костный мозг;
циклическая лейкопения у мраморно-голубых
колли (наследственная, связанная с циклическим
гемопоэзом).
Лейкоцитарная секвестрация:
эндотоксический шок;
септический шок;
анафилактический шок.
Повышенная утилизация лейкоцитов:
грамотрицательный сепсис;
эндотоксический или септический шок;
виремия;
тяжёлые гнойные инфекции;
токсоплазмоз (кошки).
Повышенное разрушение лейкоцитов:
грамотрицательный сепсис;
эндотоксический или септический шок;
ДВС-синдром;
гиперспленизм (первичный, вторичный);
иммуннообусловленная лейкопения.
Результат действия лекарственных препаратов:
сульфаниламиды;
некоторые антибиотики;
нестероидные противовоспалительные
препараты;
тиреостатики;
противоэпилептические препараты;
антиспазматические пероральные препараты.

75. Лейкоцитарная формула

• Лейкоцитарная формула — процентное
соотношение различных видов лейкоцитов в мазке
крови. Она имеет большое диагностическое
значение.
• Уменьшение или увеличение лейкоцитов в крови
может быть за счёт отдельных видов лейкоцитов.
• Увеличение или уменьшение числа отдельных
видов лейкоцитов в крови может быть абсолютным
(с уменьшением или увеличением общего
содержания лейкоцитов) или относительным (при
нормальном общем содержанием лейкоцитов).

76.

• Современные
гематологические
анализаторы способны
дифференцировать 5
видов лейкоцитов.
Нейтрофилы,
эозинофилы, базофилы,
лимфоциты, моноциты.
• Анализаторы не могут:
• Дифференцировать
палочкоядерные и
сегментоядерные
нейтрофилы
• Оценить морфологию
клеток
• Определить токсичность
в нейтрофилах
• Обнаружить
инфекционные агенты в
крови (бактерии)