Клиническая иммунология и иммунопатология ревматических заболеваний

1. Клиническая иммунология и иммунопатология ревматических заболеваний

2. Лабораторная диагностика ревматических заболеваний

Аутоантитела
Маркеры острой фазы воспаления
Генетические маркеры
Иммуноглобулины
Криоглобулины
Компоненты системы комплемента
Цитокины и растворимые формы цитокиновых
рецепторов
Субпопуляции лимфоцитов
Маркеры метаболизма костной ткани
Показатели апоптоза

3. Клиническое значение аутоантител

Диагностический критерий ряда
аутоиммунных РЗ (ранняя диагностика )
характеристика клинико-лабораторных вариантов
заболевания
оценки активности и прогноза РЗ
подтверждение диагноза у пациентов с
недостаточным числом клинических проявлений
предиктор развития аутоиммунных РЗ у
бессимптомных пациентов

4. Ложноположительные результаты выявления аутоантител

лица пожилого и старческого возраста
прием лекарственных препаратов
вирусные и бактериальные инфекции
злокачественные новообразованиях
здоровые родственники больных аутоиммунными
заболеваниями

5. Основные виды аутоантител

антинуклеарные антитела (АНА)
ревматоидный фактор (РФ)
антитела к цитруллинированным белкам
(АЦБ)
антинейтрофильные
цитоплазматические антитела (АНЦА)
антифосфолипидные антитела (АФЛ)

6. Антинуклеарные антитела (АНА)- гетерогенная группа аутоантител, реагирующих с различными компонентами ядра.

Антитела к дезоксирибонуклеиновой кислоте (ДНК)
Антитела к гистонам
Антитела к нуклеосомам
Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам
(Антитела к Sm (Smith) антигену, Антитела к U1РНП,
Антитела к SS-A/Ro (Robert), Антитела к SS-B/La (Lane)
Склеродермические антитела (антицентромерные антитела
(АЦА), антитела к Scl-70, антинуклеолярные антитела
Миозит-специфические антитела

7. LE-клетки

Нейтрофильные лейкоциты,
содержащие фагоцитированные
фрагменты ядер других клеток,
покрытые антинуклеарными
аутоантителами

8. Клетки клеточной линии НЕр-2

Tan Е.М., 1982
FANA
Fluorescent AntiNuclear
Antibody detection
«антинуклеарный фактор»
(АНФ)
класса IgG
«антинуклеарный фактор» (АНФ) – АНА,
обнаруженные методом иммунофлюресценции

9. Схема постановки нРИФ для определения АНФ

10.

11.

Выявление антинуклеарного фактора на клеточной
линии НЕр-2 с помощью нРИФ является
основным методом выявления АНА
(Dutch EASI Group, 2010)

12. Недостатки ИФА, иммуноблоттинга

высокая частота ложно-отрицательных
результатов
( тесты ИФА пропускают до 20%
антинуклеарных антител, выявляемых с
помощью нРИФ)
- высокая частота ложно-положительных реакций

13. Значения титров АНФ

Нормальные титры АНФ в сыворотке крови
< 1:40 при использовании криостатных срезов
печени или почек лабораторных животных и
<1:160 при использовании HЕp-2 клеток
Уровни позитивности АНФ-HЕp-2:
Низкопозитивные титры
Умереннопозитивные титры
Высокопозитивные титры
1:80/1:160–1:320
1:640
>1:1280
Рекомендуемая частота определения АНФ составляет 1
раз в 6 месяцев – 1 год

14.

Основные антигены антинуклеарных антител

15. Номенклатура аутоантигенов

Структура молекулы (двуспиральная ДНК - дсДНК)
Название антигена или молекулярная масса
(snRNP70)
Фамилия больного, у которого были обнаружены
аутоантитела (например, Sm - Smith)
Сокращение антигена/заболевания (PM-Scl–
полимиозит-склеродермия)

16. Гомогенный тип свечения

Антитела к дс ДНК,
гистонам - нуклеосомам
Диагностическое
значение:
СКВ
Лекарственная волчанка
Любые аутоиммунные
заболевания

17. Периферический тип свечения

Антитела к дс ДНК
Диагностическое
значение:
СКВ

18. Гранулярный (крапчатый) тип свечения

Антитела к
надмолекулярным
нуклеопротеиновым
комплексам (аутоантигенам
Sm, U1-RNP, SS-A, SS-B)
Диагностическое значение:
СКВ
СЗСТ ( 1:2560-1:10000)
Синдром Шегрена
ПМ/ДМ
Низкие титры АНФ с гранулярным типом могут определяться у
здоровых лиц без клинических признаков системного заболевания.

19. Дискретный крапчатый тип свечения

Антицентромерные антитела (АЦА)
Диагностическое значение
ССД
CREST синдром:
- Кальциноз
- Синдром Рейно
- Нарушение моторики Пищевода
- Склеродактилия
- Телеангиэктазия

20. Нуклеолярный тип свечения

Антинуклеолярные антитела
PM Scl
U3-РНП
Th/To
РНК-полимеразы I,II,III
Диагностическое значение
ССД

21. Сетчатый крапчатый тип свечения

Антитела к Scl-70 - основному
негистоновому хромосомному
белку с молекулярной массой 70
kDa
Диагностическое значение
ССД

22.

Характеристика антинуклеарного фактора
Тип свечения
Тип аутоантител
Связь с заболеваниями
Антитела к ДНК (двух и
односпиральной), ДНП, гистонам (H1,
H2A,H2B, H3, H4)
СКВ, лекарственная волчанка,
любые аутоиммунные заболевания
Антитела к дс ДНК
СКВ
Крапчатое
Антителак Sm, РНП, SS-A/Ro,
SS-B/La, Jo-1
СКВ, СЗСТ, синдром Шегрена,
ПМ/ДМ
Сетчатое
крапчатое
Антитела к Scl-70
ССД (диффузная форма)
Дискретное
крапчатое
Антитела к центромере
CREST синдром, синдром Рейно
Антитела к РНК-полимеразе 1,
PM/Scl, U3РНП
ССД (диффузная форма
Гомогенное
Периферическое
(краевое)
Нуклеолярное

23. положительные результаты определения АНФ

тесты на специфические АНА к отдельным
ядерным антигенам:
нДНК
Sm, SSA/Ro, SSB/La, Scl-70
РНП
Подтверждающие диагностические методы:
ИФА
иммуноблоттинг (ИБ)
двойная иммунодиффузия (ДИД)
контриммуноэлектрофорез (КИЭФ)

24. определение специфичности антинуклеарных антител

Нанесение очищенных антигенов в разные лунки
иммуноферментного планшета (ИФА)
нанесение на разные части нитроцеллюлезной
мембраны (иммуноблоттинг)

25. Иммуноферментный твердофазовый анализ

26.

Иммуноблот

27. Антитела к дезоксирибонуклеиновой кислоте

дсДНК - антитела, реагирующие с
двухспиральной (нативной) ДНК
осДНК - реагирующие с односпиральной
(денатурированной) ДНК
Антитела к ДНК являются серологическим
маркером СКВ.
При других РЗ тестирование антител к дсДНК не
показано

28. Антитела к ДНК

Нормальный уровень антител к дсДНК при
тестировании сывороток с помощью ИФА
составляет < 10-20 МЕ/мл
Рекомендуемая частота определения антител к дс
ДНК составляет 1 раз в 3 месяца

29.

30. Антитела к экстрагируемым ядерным антигенам

6 рибонуклеопротеиновых антигенов
Sm
SSA - SS-A/Ro (Robert)
SSB - SS-B/La (Lane)
U1-RNP
Scl-70
Jo-1

31.

Положительные результаты определения
антител к Sm
являются специфичным серологическим маркером
и диагностическим критерием СКВ
Определяются однократно
АТ Sm (ИФА) ≤ 25 ЕД /мл

32.

АТ к U1РНП (ИФА) ≤ 25 ЕД /мл
Рекомендуемая частота определения -1 раз в 3
месяца
диагностика СЗСТ, СКВ
прогнозирование неблагоприятного течения СКВ

33.

SS-A/Ro (ИФА) ≤ 25 ЕД /мл;
Рекомендуемая частота определения - 1 раз в 3
месяца
Положительные результаты обнаружения антител
к SS-A/Ro являются диагностическими
критериями первичного и вторичного Синдрома
Шегрена
30-50% больных СКВ (ассоциируются с
фотосенсибилизацией, СШ, гиперпродукцией РФ)

34.

SS-B/La (ИФА) ≤ 25 ЕД /мл
Рекомендуемая частота определения - 1 раз в 3
месяца
Антитела к SS-B/La обнаруживаются у 40-50%
больных СШ и 20% больных СКВ
диагностический критерий первичного и
вторичного СШ
ассоциируется с выраженной лимфоидной
инфильтрацией слюнных желез и развитием
экстрагландулярных проявлений (пурпура,
васкулит, лимфаденопатия)

35. Склеродермические антитела

- группа аутоантител, с высокой частотой
выявляемых при различных вариантах ССД.
антицентромерные антитела (АЦА)
антитела к Scl-70
антинуклеолярные антитела.

36. Антицентромерные антитела (АЦА)

распознают более 6 центромерных
нуклеопротеинов (ЦЕНП A-F).
НРИФ с помощью HEp-2 клеток (дискретный
крапчатый тип свечения)
<1:160
Рекомендуется однократное определение АЦА
Диагностика ССД , CREST синдрома.

37.

Антитела к Scl-70 – ИБ - ≤25 ЕД /мл
диагностика ССД
прогнозирование диффузного поражения кожи,
высокой вероятности развития легочного фиброза
Рекомендуется однократное определения антител
к Scl-70

38. Антинуклеолярные антитела

включают антитела к PM-Scl, U3-РНП, Th/To и
семейству РНК-полимераз I,II,III.
высокая специфичность, но низкая
чувствительность для диагностики и
прогнозирования течения ССД

39.

40. Миозит-специфические антитела

антитела к аминоацилсинтетазам т-РНК
Jo-1, PL-7, PL-12, EJ, OJ, KS,
частицам сигнального распознавания (SRP) и Mi-2
миозит-ассоциированным антигенам -PM-Scl, KJ
Рекомендуется однократное определение
антитела к Jo-1 – диагностический критерий ПМ/ДМ
с наличием антисинтетазного синдрома
антитела к Mi-2 –стероидчувствительный ДМ
Антитела к PM-Scl - субтип ДБСТ (ССД, ПМ,
поражение почек)
Антитела к KJ -миозит, феномен Рейно и
интерстициальное поражение легких

41.

42. Ревматоидные факторы (РФ)

аутоантитела IgM, IgA и IgG классов, реагирующие
с Fc-фрагментом IgG.
методы определения IgM РФ - реакция
агглютинации сенсибилизированных IgG частиц
латекса (латекс-тест) или эритроцитов барана
(реакция Ваалер-Розе), и ИФА
диагностический критерий РА
IgM РФ в высокой концентрации -маркер
прогнозирования быстропрогрессирующего
деструктивного поражения суставов и системных
проявлений при РА

43.

Нормальный уровень IgM
(латекс-агглютинациия) составляет ≤1:40,
ИФА ≤20 МЕ/мл
уровни IgM РФ
негативные (меньше или равные ВГН)
низко позитивные (≤3 ВГН)
высоко позитивные (>3 ВГН)
оценка эффективности терапии ГИБП у больных РА

44. Алгоритм лабораторной диагностики аутоиммунных ревматических заболеваний

1 - первичные (скрининговые) тесты,
2 – подтверждающие тесты,
3 –дополнительные тесты

45.

46.

обнаружение аутоантител
при отсутствии клинических признаков
не является достаточным
для постановки диагноза
аутоиммунного заболевания