Лабораторная диагностика дифтерии и коклюша

1.

Лабораторная
диагностика
дифтерии и
коклюша

2. КЛАССИФИКАЦИЯ КОРИНЕБАКТЕРИЙ

ПОРЯДОК
Actinomycetales
СЕМЕЙСТВО Corynebacteriaceae
РОД
Corynebacterium
ВИДЫ
Corynebacterium non diphtheriae
ВОЗБУДИТЕЛЬ ДИФТЕРИИ
C. pseudotuberculosis
C. diphtheriae
верхние дыхательные пути
поверхность кожи
урогенитальный тракт
БИОВАРЫ:
C. pseudodiphtheriticum
gravis
mitis
intermedius
верхние дыхательные пути
поверхность кожи
C. xerosis
поверхность кожи
урогенитальный тракт
C.аmycolactum
урогенитальный тракт

3.

МАЗОК ИЗ КУЛЬТУРЫ C. diphtheriae
ОКРАСКА ПО НЕЙССЕРУ
ОКРАСКА ПО ЛЕФФЛЕРУ

4.

СРЕДЫ ДЛЯ ПЕРВИЧНОГО ПОСЕВА ИССЛЕДУЕМОГО
МАТЕРИАЛА
Среда Клауберга II
•Питательный агар
•Теллурит калия
•Глицериновая смесь
•Лаковая кровь
Кровяной
теллуритовый агар
(КТА)
•Питательный агар
•Теллурит калия
•Дефибринированная или
гемолизированная кровь

5. Колонии C. diphtheriae на среде Клауберга

Биовар gravis
Биовар mitis

6. ОСНОВНЫЕ ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ C. diphtheriae

7.

Токсигенная
культура
«Усы» преципитации
(Аг+АТ)
Аг
Аг
Аг
Ат
Аг
Аг
Ат
Ат
Аг
Токсигенная
культура
Аг
Аг (экзотоксин)
Диск,
пропитанный
антитоксином
диагностическим
дифтерийным
Ат
Ат
Нетоксигенные
культуры

8.

Проба на токсигенность: реакция преципитации в геле

9.

РНГА (РОПГА) для выявления дифтерийного
токсина
Диагностикум эритроцитарный дифтерийный
антительный жидкий для определения токсина в РНГА –
моноклональные антитела, связанные с эритроцитами.
Штаммы коринебактерий дифтерии засевают в жидкую
питательную среду и инкубируют при 37° C в течение
18 часов, используют надосадочную жидкость среды
культивирования
Через 2,5 - 3,5 часа производят учет результатов реакции.
Допускается - через 18 - 24 часа.

10.

Положительная
проба Пизу на
наличие цистиназы
В составе питательной среды:
цистин и уксусно - кислый
свинец.
Цистиназа расщепляет
цистин, выделяется
сероводород , который
взамодействуя с индикатором,
образует серно - кислый
свинец - соединение темно коричневого цвета.
Инкубация 37 ̊С – 24 часа
Ускоренный метод - большое
количество культуры – 3 часа.

11.

Проба на наличие уреазы
C. diphtheriae
не имеет уреазы
В составе питательной среды:
мочевина и фенолрот (крезолрот).
Уреаза расщепляет мочевину с
образованием аммиака и углекислоты.
Повышается pH среды - покраснение
индикатора.
При отсутствии фермента среда
остается желтой.
Ускоренная проба Заксе: 37 ̊С – 30 мин.
Бульон с мочевиной: 37̊С – 24 часа

12.

Определение активности нитратредуктиазы
Тест позволяет определить
способность восстанавливать нитраты
в нитриты. Способность к
восстановлению N03 в N02 определяют
культивированием в МПБ 24 часа при
37° C, содержащем 1% раствор KN03.
Для определения нитритов в среду
добавляют несколько капель реактива
Грисса. Этот реактив состоит из
сульфаниловой кислоты и αнафтиламина. При взаимодействии
реактива Грисса
с нитритами образуется азокраситель ,
и при положительном результате
наблюдают появление красного
окрашивания.

13.

Разложение
Редукция
нитратов
Вид
цистина
глюкозы
сахарозы
крахмала
мочевины
C. diphtheriae
+
К
-
К
-
+
C. diphtheriae
+
К
-
-
-
+
C.pseudodiphtheriticum
(C.hofmani)
-
-
-
-
+
+
(-)
gravis
mitis

14.

БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИЙ
МЕТОД

15.

Исследуемый материал
(отделяемое слизистой
зева, носа и
из места атипичной
локализации
Тампоны должны
быть доставлены в
лабораторию
не позднее 3-х часов
с момента взятия
материала.

16.

1 день
Зев
Нос
24 часа
2 день
Постановка проб на:
токсигенность, цистиназу
48 часов /3 день
Учет
Посев на:
сахарозу
глюкозу
крахмал
мочевину
72 часа / 4 день
Учет свойств
Определение биохимического варианта

17.

Протокол. Лабораторная диагностика дифтерии
День
исследования
Исследуемый
материал
Что сделать
1 день
Отделяемое слизистой зева, носа
(из мест атипичной локализации)
на тампонах
Посев на чашку с КТА
2 день
2)Рост колоний на чашках с КТА
(24 часа)
1)
Описать колонии
Результат
1)____________________
______________________
______________________
______________________
______________________
______________________
______________________
2)Изучить и зарисовать мазок из
материала колоний, окраска по
Нейссеру (Леффлеру) –
демонстрация
3)Постановка проб на:
- токсигенность,
цистиназу
4)Пересев на скошенный
сывороточный агар.
2)

18.

3
день
1. Инкубированные пробы
на
а) токсигенность и
б) цистиназу
2)
4 день
1)Учесть результаты проб,
зарисовать
1.
а)
б)
Рост чистой культуры
на скошенном
сывороточном агаре
Инкубированные посевы
на средах Гисса с
сахарозой, глюкозой,
крахмалом,
тест с мочевиной.
«-»
2) Описание роста.
2. Рост в виде «шагреневой кожи»
3) Приготовить мазок-препарат,
окрасить по Нейссеру,
зарисовать
4) Посев на среды Гисса с
сахарозой, глюкозой,
крахмалом, тест с мочевиной.
3.
«+»
Учесть биохимические свойства
Сахароза Глюкоза
Крахмал
Мочевина

19.

Показания для применения.
Лечение больных дифтерией.

20.

дифтерийный анатоксин
Гастон Рамон
(1886-1963)
Культуру бактерий,
продуцирующих экзотоксин,
выращивают в жидких
питательных средах для
накопления токсина, а
затем фильтруют через
бактериальные фильтры
для удаления микробных
тел. К фильтрату добавляют
0,3—0,4% раствора
формалина и помещают в
термостат при температуре
37—40 °С на 3—4 нед до
полного исчезновения
токсических свойств.

21. Вакцины, содержащие дифтерийный анатоксин

АКДС
АДС-анатоксин
АДС-М- анатоксин
АД-М-анатоксин
Д.Т. Вакс (дифтерия, столбняк)
БУБО-Кок (дифтерия, столбняк, коклюш,
гепатит В)

22.

Тетракок
Тетракок - вакцина для комбинированной
профилактики дифтерии, столбняка, коклюша
и полиомиелита у детей с 2-мес. до 6 лет;
1 доза вакцины Тетракок (0,5 мл) содержит:
•очищенный дифтерийный анатоксин,
•очищенный столбнячный анатоксин
•Bordetella pertussis,
•инактивированные вирусы полиомиелита
1,2,3 типов,
•гидроокись алюминия,
формальдегид,
фенолэтанол.

23.

Пентаксим® содержит антигены дифтерийного и
столбнячного анатоксина, компоненты клеточной
стенки возбудителя коклюша, инактивированный
вирус полиомиелита 1,2,3 типов и капсульные
полисахариды гемофильной палочки тип b.
Разовая доза составляет 0,5 мл.
Профилактика у детей от 3-х месяцев до 3 лет 11
месяцев 29 дней.

24.

Инфанрикс ИПВ - ацеллюлярная
вакцина для профилактики:
Дифтерии, коклюша, столбняка,
полиомиелита
Состав: ДT, СT, 3 Ag коклюшного
микроба (КT+ФГA+ПРT),
3 инактивированных вируса
полиомиелита
(тип 1, 2, 3)

25.

Инфанрикс Пента - ацеллюлярная
вакцина для профилактики:
Дифтерии, коклюша, столбняка,
полиомиелита, гепатита В
Состав: ДT, СT, 3 Ag коклюша
(КT+ФГA+ПРT), 3 инактивированных
вируса полиомиелита (тип 1, 2, 3),
очищенный HBsAg

26.

Инфанрикс Гекса -ацеллюлярная вакцина
для профилактики:
Дифтерии, коклюша, столбняка,
полиомиелита, гепатита В, Hib - инфекции
Состав: ДT, СT, 3 Ag коклюшного
микроба (КT+ФГA+ПРT), 3
инактивированных вируса
полиомиелита (тип 1, 2, 3), очищенный
HBsAg,
коньюгат капсульного
полисахарида Hib

27.

БОРДЕТЕЛЛЫ
РОД
Bordetella
ВИДЫ
B.
B.
B.
B.
pertussis
parapertussis
bronchiseptica
avium

28.

Мазок из чистой культуры B. рertussis,
окраска по методу Грама

29.

Рост колоний B. рertussis
на кровяном агаре

30.

31.

32.

33.

Забор материала от больного

34.

Среда Казеиново-угольный
агар (КУА)
Борде — Жангу
среда
кислотный гидролизат
казеина глубокой степени
расщепления
плотная питательная
крахмал растворимый
среда для
уголь активированный
культивирования
дрожжевой диализат
гемоглобинофильных калий фосфорнокислый
бактерий,
однозамещенный
представляющая собой магний хлористый
картофельнокальций хлористый
глицериновый
медь сернокислая
кровяной агар.
кислота глутаминовая
цистеин
агар микробиологический

35.

Вакцины, содержащие коклюшный
компонент

36. Протокол. Лабораторная диагностика коклюша

Исследуемый
материал
Что необходимо сделать
Мазок-препарат из культуры
B. pertussis, окрашенный по
методу Грама
Изучить морфологию (демонстрация),
зарисовать.
Колонии
B. pertussis на КУА
Изучить характер роста
(демонстрация).
Результат
______________________
______________________
______________________
______________________
______________________
______________________
______________________
______________________