Similar presentations:
Esherikhii
1.
Эшерихии2.
Род Escherichia[Bergey's Manual…,1994]
E.coli
E.blattae
E.fergusonii
E.hermanii
E.vulneris
3.
Основные биохимическиесвойства E.coli
Глюкоза (газ)
+
Лактоза
+
Сахароза
V
Продукция сероводорода
-
Цитрат Симонса
-
Фенилаланин
-
Индол
V
4.
О-антигенТермостабилен;
Липополисахарид;
Более 150 разновидностей (О1, О2, …);
Факторный состав:
‘а’ - общий фактор;
‘в’, ‘с’… - дополнительные
(О111 ав, O111ас, О128а, О128 ав, 128ас)
5.
Н - антигенБелковый;
Термолабильный жгутиковый антиген;
Более 50 разновидностей (Н1, Н2…);
Свежевыделенные штаммы обычно
слабо подвижны и обладают малым
количеством Н-антигена.
6.
К - антигеныК
А
Термостабилен (121 оС, 2 часа).
В
Термолабилен (100 оС, 1 час).
L
Термолабилен (100 оС, 1 час).
В настоящее время для обозначения всех типов
К- антигена используется единая сквозная нумерация.
Описано более 100 разновидностей (К1, К2…).
7.
Классификация E.coliE .c o li
У с ло в но -па то ге нны е
Д иа р е е ге нны е
Э П К П (E P E C )
Э нте ропа тоге нны е
кишечны е пал очки
Э Г К П (E H E C )
Э н те роге м орра гиче с кие
кишечны е пал очки
Э И К П (E IE C )
Э нтероинвазивны е
кишечны е пал очки
Э А К П (E A E C )
Энт ероагрегат ивны е
кишечны е пал очки
Э Т К П (E T E C )
Э н те ротокс иге н н ы е
кишечны е пал очки
Д А К П (D A E C )
Д и ф ф у зн о а д г е зи в н ы е
кишечны е пал очки
8.
Методы дифференциациикишечных палочек
Выявление факторов вирулентности:
адгезии к клеткам, например НЕр-2;
продукции токсинов в изолированной петле
кишечника кролика, на культуре клеток,
иммунологическими методами;
выявление инвазивности на культуре клеток
Детекция генов вирулентности с помощью
генных зондов, ПЦР и др.
Определение антигенных маркеров путем
серотипирования
9.
Методы дифференциациикишечных палочек
Выявление факторов вирулентности:
адгезии к клеткам, например НЕр-2;
продукции токсинов в изолированной петле
кишечника кролика, на культуре клеток,
иммунологическими методами;
выявление инвазивности на культуре клеток
Детекция генов вирулентности с помощью
генных зондов, ПЦР и др.
Определение антигенных маркеров путем
серотипирования
10.
Выявление токсиновE.coli
Реакция латекс-агглютинации
Иммуно-ферментный метод
Иммунохроматография
11.
ЭПКП026:NM; 026:H11; 055:NM;
055:H6; 086:NM; 086:H2;
086:H34; 0111ab:NM;
0111ab:H2; 0111ab:H12;
0111ab:H21; 0114:H2; 0119:H6;
0125ac:H21; 0127:NM; 0127:H6;
0127:H9; 0127:H21; 0128ab:H2;
0142:H6; 0158:H23
Главные факторы вирулентности - факторы адгезии:
прикрепление к кишечному эпителию и повреждение его
12.
Пили E.coli13.
ЭПКП. Стадии патогенеза1.
2.
3.
Адгезия с помощью пилей
IV типа
Секреция бактериальных
белков EspA, EspB, Esp D
(механизм действия не
ясен).
Тесное прикрепление к
мембране с помощью Tirрецептора, внедряющегося в мембрану клетки
хозяина
14.
ЭТКПГлавные факторы
вирулентности:
Термолабильный энтеротоксин
(LT)
Термостабильный энтеротоксин
(ST)
Восприимчивый контингент:
Дети
Взрослые
Клинические проявления:
Обильный жидкий стул
Тошнота, рвота
Судороги
Обезвоживание
Основные серовары
06:H16; 08:NM; 08:H9;
011:H27; 015:HII; 020:NM;
025:NM; 025:H42; 027:H7;
027:H20; 063:H12; 078:HII;
078:H12; 085:H7;
0114:H21; 0115:H21;
0126:H9; 0128ac:H7;
0128ac:H12; 0128ac:H21;
0148:H28; 0149:H4;
0159:H4; 0159:H20;
0166:H27; 0167:H5
15.
Энтеротоксины E.coliТермостабильность
Химическое
строение
Механизм действия
Генетическая
детерминанта
LT
ST
Нет
Да
Белок
Комплекс
полипептидов
Накопление
цАМФ
Накопление
цГМФ
Синтез, как правило,
обусловлен плазмидой
16.
ЭИКПГлавный фактор
вирулентности
Основные серовары
Внутриклеточная инвазия в
028ac:NM; 029:NM;
энтероциты
0112ac:NM; 0115:NM;
Восприимчивый контингент
0124:NM; 0124:H7;
Дети
0124:H30; 0135:NM;
Взрослые
0136:NM; 0143:NM;
Клинические проявления
0144:NM; 0152:NM;
Кровь, слизь, лейкоциты в
стуле
0164:NM; 0167:NM
17.
ЭГКПОсновные серовары
Главный фактор
вирулентности
Вероцитотоксин (Шига
подобный токсин)
Восприимчивый контингент
Дети
Взрослые
Клинические проявления
стул в виде малинового
желе
геморрагическая пурпура
О157:H7
01:NM; 02:H5; 02:H7; 04:NM; 04:H10;
05:NM; 05:H16; 06:HI; 018:NM; 018:H7;
025:NM; 026:NM; 026:HII; 026:H32; 038:H21;
039:H4; 045:H2; 050:H7; 055:H7; 055:HIO;
082:H8; 084:H2; 091:NM; 091:H21; 0103:H2;
0111:NM; 0111:H8; 0111:H30; 0111:H34;
0113:H7; 0113:H21; 0114:H48; 0115:HIO;
0117:H4; 0118:H12; 0118:H30; 0121:NM;
0121:H19; 0125:NM; 0125:H8; 0126:NM;
0126:H8; 0128:NM; 0128:H2; 0128:H8;
0128:H12; 0128:H25; 0145:NM; 0145:H25;
0146:H21; 0153:H25; 0157:NM;; 0163:H19;
0165:NM; 0165:H19; 0165:H25
18.
Бактерии, продуцирующиеШигаподобные токсины
S.dysenteriae 1 [Stx]
E.coli (более 60 сероваров из более
чем 32 серогрупп) [Stx1 или/и Stx2]
Citrobacter freundii [Stx2]
Aeromonas hydrophila, A.caviae [Stx1]
Enterobacter cloacae [ген stx2]
19.
Бактерии, продуцирующиеШигаподобные токсины
S.dysenteriae 1 [Stx]
E.coli (более 60 сероваров из более
чем 32 серогрупп) [Stx1 или/и Stx2]
Citrobacter freundii [Stx2]
Aeromonas hydrophila, A.caviae [Stx1]
Enterobacter cloacae [ген stx2]
20.
ЭГКП. Формы инфекционногопроцесса.
Носительство
Неосложненная диарея
Геморрагический колит
Гемолитико-уремический синдром
Тромботическая тромбоцитопеническая
пурпура
21.
МакКонки агар с сорбитомSMAС
CR-SMAС
SMAС
BCIG
Пептон
20,0
20,0
20,0
Сорбит
10,0
10,0
10,0
Рамноза
5,0
Соли желчных кислот №3
1,5
1,5
1,5
Натрия хлорид
5,0
5,0
5,0
Нейтральный красный
0,03
0,03
0,03
Кристал-виолет
0,001
0,001
0,001
5-bromo-4-chloro-3-indolyl- -Dglucuronide (BCIG)
0,1
Агар
pH
15,0
15,0
15,0
7.1 ± 0.2
7.1 ± 0.2
7.1 ± 0.2
22.
ТоксигенностьE.coli O157:H7
Иммунохроматография
Иммуноферментный
анализ
Латекс-агглютинация
23.
СеротипированиеE.coli O157:H7
Латекс-агглютинация
Агглютинация на стекле
24.
ЭАКП• Главные факторы
вирулентности:
– аггрегация и адгезия на
поверхности слизистой
кишечника,
– продукция цитотоксина
• Восприимчивый контингент:
– Дети
– Взрослые
• Клинические проявления:
– секреторная диарея,
иногда с кровью
Основные серовары
03:Н2; О15:Н18; О44:Н18;
086:NM; О77:Н18;
О111:Н21; О127:Н2;
О?(неизвестен):Н10
25.
ЭАКП• Главные факторы
вирулентности:
– аггрегация и адгезия на
поверхности слизистой
кишечника,
– продукция цитотоксина
• Восприимчивый контингент:
– Дети
– Взрослые
• Клинические проявления:
– секреторная диарея,
иногда с кровью
Основные серовары
03:Н2; О15:Н18; О44:Н18;
086:NM; О77:Н18;
О111:Н21; О127:Н2;
О?(неизвестен):Н10
26.
Выделение и идентификациядиареегенных эшерихий
Выделение
ЭНДО
Идентификация
ЭМС
Реакция агглютинации
с ОКА сывороткой
Lac +
Lac ТСА,
среда Клиглера
среда Рэсселя
…
Реакция агглютинации
с ОКА сывороткой
(8-10 колоний)
-
Патогенные
E.coli
НЕ ОБНАРУЖЕНЫ
+
Реакция агглютинации
с сыворотками
ОКВ, ОКС, ОКД, ОКЕ
+
-
Патогенные
E.coli
НЕ ОБНАРУЖЕНЫ
+
Другое
МПА
Эшерихии?
Определение О и К
антигенов в реакции
агглютинации
Биохимическая
идентификация
Серологическая идентификация
Посев в
пробирки
Крейджи
27.
Эшерихиозные сыворотки иимуноглобулины
Сыворотки
ОК-поливалентные
ОКА, ОКВ, ОКС, ОКД, ОКЕ
Сыворотки
Н-поливалентные
НА, НВ, НС, НД
Сыворотки ОК-типовые
О1, О2, О6, O18, O20, O25, O26, O28ас, O29, O32, O33,
O44, O55, O75, O85, O86, O111ab, O114, O115, O119,
O124, O125, O126, O127, O128, O136, O142, O143, O144,
O152, O159, O164, «408»
Сыворотки
О-групповые и факторные
О1, О2, О4, О5, О6, О7, О8, О9, О11, О18авс, О18в, О18с,
О20, О22, О25, О26, О28, О32, О33, О44, О55, О75, О85,
О86, О111, О112авс, О112в, О112с, О114, О119, О124,
О125авс, О125в, О125с,О126, О127, О128, О142, О143,
О144, О157, О164
Иммуноглобулины
ОК-типовые
О1:К1; О6:К15; О20:К84; О25:К11; О26:К60; О28:К3; О32:К;
О44:К74; О55:К59; О75:К; О85:К; О86:К61; О111:К58;
О112ас:К66; О112ав:К68; О114:К90; О119:К69; О124:К72;
О125: К70; О126:К71; О127:К63; О128:К67; О142:К86;
О143:К; О144:К; О164:К
28.
Серотипированиеэшерихий
С ер оти пи р овани е в
р е а кц и и а ггл ю т и н а ц и и
О К и м м ун о гл о б ул и н ы и
ад сор би р ованны е сы вор отки
Р е а кц и я а ггл ю т и н а ц и и
на стекл е
Н еадсор би р ованны е
сы вор отки
К-антиген
с нативной
агаровой
культурой
Р е а кц и я а ггл ю т и н а ц и и
на стекл е
О-антиген
с гретой
культурой
1 час 100 град.
Р азвер нутая р еакц и я
а ггл ю т и н а ц и и
(д о т и т р а с ы в о р о т к и )
Н-антиген
с культурой с
глицеринового
агара
29.
Серотипированиеэшерихий
С ер оти пи р овани е в
р е а кц и и а ггл ю т и н а ц и и
О К и м м ун о гл о б ул и н ы и
ад сор би р ованны е сы вор отки
Р е а кц и я а ггл ю т и н а ц и и
на стекл е
Н еадсор би р ованны е
сы вор отки
К-антиген
с нативной
агаровой
культурой
Р е а кц и я а ггл ю т и н а ц и и
на стекл е
О-антиген
с гретой
культурой
1 час 100 град.
Р азвер нутая р еакц и я
а ггл ю т и н а ц и и
(д о т и т р а с ы в о р о т к и )
Н-антиген
с культурой с
глицеринового
агара
30.
Пробирка по КрейджиИнокулят
Полужидкая питательная среда
Стеклянная трубка
31.
Пробирка по КрейджиИнокулят
Полужидкая питательная среда
Стеклянная трубка
32.
Определение Н-антигеновэшерихий
П а с с а ж и н а п о л уж и д к о м а га р е
в пр оби р ках К р ей д ж и
П о с е в н а гл и ц е р и н о в ы й а га р
П о с е в н а п о л уж и д к и й а га р с
Н - сы вор откам и и без ни х
С ус п е н д и р о в а н и е в ф и з .р -р е
У ч ет р еакц и и и м м оби л и зац и и
П остановка Р А на стекл е
33.
Индикациядиареегенных эшерихий
34.
Индикациядиареегенных эшерихий
35.
Выделение ЭПКП, ЭИКП,ЭТКП
25 г продукта гомогенизировать
в 225 мл Brain heart infusion broth
10 мин при комнатной температуре, периодически встряхивая
Дать отстояться 10 мин
Надосадочную жидкость перенести
в стерильный контейнер
Инкубировать 3 часа при 35 0С
Долить равное количество
Tryptone phosphate broth двойной концентрации
Инкубировать 20 часа при 44 0С
Высев на MacConkey agar и eosin-methylene blue agar
36.
ИдентификацияПо биохимическим свойствам (20 колоний: 10 Lac+ и 10 Lac-) –
принадлежность к E.coli
ЭПКП
– Фенотипически
• Прикрепление и повреждение тканей
• Характер адгезии
• Отсутствие Vero-токсина
– Генотипически (гибридизация, PCR)
• AEF-плазмида
• eae -ген
ЭТКП
– Фенотипически
• LT – культура клеток Y-1, ST – тест на новорожденных мышах
• Латекс агглютинация, ELISA
– Генотипически – гибридизационный анализ
ЭИКП
– Фенотипически
• Керато-конъюнктивальная проба на морских свинках
• Тест на культуре клеток HeLa
– Генотипически – выявление гена invA
37.
Идентификация• По биохимическим свойствам –
принадлежность к E.coli
• По антигенным свойствам
– Реакция агглютинации на стекле
– Реакция латекс-агглютинации
• По токсигенности
– ELISA
• По генетическим признакам
– Гибридизационный анализ
– Мульплексная PCR