Подготовка, отбор материала при подозрении на бешенство

1.

Кандидат ветеринарных наук
Воронцова Анастасия Андреевна

2.

Общий принцип взятия материала для выделения вирусов и бактерий
основан на четком представлении о патогенезе предполагаемой инфекции
и преимущественной локализации вируса в тех или иных органах и тканях,
иными словами - на знании тропизма (аффинитета) возбудителей, входных
ворот, путей распространения в организме, путей и сроков его выделения
из организма. Для оценки ситуации и прогнозирования возникновения
очагов инфекционных болезней животных в регионе необходимо:
• собрать базовую информацию;
• провести отбор проб биологического и патологического
материалов для проведения лабораторных исследований, которые будут
являться основным критерием в дальнейшей оценке эпизоотической
обстановки

3.

Необходимо помнить следующее:
• стартовой точкой всех лабораторных исследований болезней
животных является отбор проб;
• при отборе проб для каждого заболевания учитывается своя
специфика;
• отбор проб для исследований проводится с целью диагностики
болезни, подтверждения статуса здорового животного, в целях
мониторинга, определения сроков вакцинации;
• могут быть использованы различные варианты комбинаций
образцов и видов животных.

4.

• патматериал (кусочки органов и тканей)
• смывы (трахеальные, носовые, фарингиальные, клоакальные)
• кровь
• сыворотка крови
• молоко
• моча
• синовиальная жидкость суставов
• носовая слизь
• сперма
• соскобы с конъюнктивы, урогенитального тракта, клоаки
• яйцо
• эмбрионы кур
• мясо животных
• объекты окружающей среды
• сперма
Патматериал необходимо отбирать стерильными инструментами.

5.

Материал должен быть взят как можно раньше
после смерти животного, особенно в теплое время
года.
Начавшееся разложение трупа может сделать его
не годным для исследования.
Патологический
материал
отправляют
в
лабораторию в неконсервированном виде или в
замороженном состоянии с хладагентами.
В том случае, если невозможно доставить его в
лабораторию в течение ближайших 24-30 часов,
патматериал посылают только в консервированном
виде- 30% водный раствор химически чистого
глицерина (вода должна быть стерильная).
Небольшие трупы павших животных (поросят,
ягнят, телят), а также трупы мелких животных
лучше посылать целыми в непроницаемой таре.

6.

Кровь, гной, слизь, экссудат, мочу и другой жидкий
патологический материал посылают в стерильных
пробирках, флаконах, хорошо закрытых стерильными
резиновыми пробками или в специальных пластиковых
контейнерах.
Для микроскопического исследования - в виде мазков.
При вскрытии трупов животных материал отбирают при
строгом
соблюдении
всех
правил
асептики
и
антисептики, чтобы не инфицироваться самому, не
внести посторонних возбудителей в исследуемый
материал
и
не
допустить
распространения
инфекционного начала.
Взятые пробы материала следует как можно быстрее
поместить в условия, обеспечивающие замедление
процессов
инактивации
вируса.
Такие
условия
обеспечивают низкие температуры.

7.

Нормативные документы
Приказ Минсельхоза России от 25.11.2020 N 705 "Об утверждении
Ветеринарных
правил
осуществления
профилактических,
диагностических,
ограничительных
и
иных
мероприятий,
установления и отмены карантина и иных ограничений,
направленных на предотвращение распространения и ликвидацию
очагов бешенства" (Зарегистрировано в Минюсте России 21.12.2020
N 61631)
ГОСТ 26075-2013. Межгосударственный стандарт. Животные.Методы
лаюораторной диагностики бешенства Animals. Methods of
Laboratory Diagnostic of Rabies. Дата введения 2015-01-01.
Приказом
Федерального
агентства
по
техническому
регулированию и метрологии от 30 сентября 2013 г. № 1127-ст
межгосударственный стандарт ГОСТ 26075-2013 введен в действие
в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1
января 2015 год

8.

Приказ Минсельхоза России от 25.11.2020 N 705 "Об утверждении
Ветеринарных
правил
осуществления
профилактических,
диагностических,
ограничительных
и
иных
мероприятий,
установления и отмены карантина и иных ограничений, направленных
на предотвращение распространения и ликвидацию очагов бешенства"
(Зарегистрировано в Минюсте России 21.12.2020 N 61631)
V. Диагностические мероприятия
19. При возникновении подозрения на бешенство специалистами
госветслужбы должен проводиться отбор проб патологического
материала.
Для исследования на бешенство в лабораторию должна направляться
голова восприимчивого животного или труп восприимчивого животного
весом до 15 кг включительно целиком

9.

Отбор патологического материала для диагностики бешенства:
•Слюна
•Кровь
•Пораженная коньюнктива
•Мозг; спино-мозговая жидкость
6.1 Для проведения исследований на наличие вируса бешенства в
лабораторию направляют патологический материал - свежий труп или голову
мелких животных, голову или головной мозг крупных животных.
6.2 Отобранный для исследований патологический материал упаковывают во
влагонепроницаемую тару и доставляют в лабораторию в металлических
контейнерах. Замороженный материал помещают в криоконтейнер.
6.3 Патологический материал сопровождают документом, содержащим
следующие данные: наименование и адрес отправителя, вид животного,
анамнестические и клинико-эпизоотологические данные.
6.4 Лабораторные исследования проводят сразу же при получении
патологического материала.

10.

6.5 Для исследования отбирают от крупных животных кусочки
ткани из каждого отдела головного мозга (аммоновы рога,
мозжечок, кору больших полушарий, продолговатый мозг)
размером 0,5 - 1,0 см, мозг мелких животных, например
мышей, исследуют целиком. Для исследования МФА и
методом выделения вируса бешенства в культуре клеток
мышиной нейробластомы CCL-131 (или НГУК-1) пригодны
только свежие или свежезамороженные пробы ткани
головного мозга. Не допускаются для исследований пробы
мозга животных, разлагающиеся (в стадии загнивания),
консервированные глицерином, фиксированные метиловым
спиртом,
формалином
или
другими
средствами,
способствующими
возникновению
неспецифической
флуоресценции. Для постановки биопробы допускается
использовать пробы мозга, консервированные в 30 % - 50 %ном растворе глицерина. Использование других консервантов
не допускается. Для сохранности патологический материал
может быть заморожен при температуре не выше минус 10 °С.

11.

20.
Упаковка
проб
патологического
материала
и
его
транспортирование должны обеспечивать их сохранность и
пригодность для исследований в течение срока транспортировки.
Пробы патологического материала охлаждаются, а на период
транспортирования - помещаются в термос со льдом или
охладителем.
Доставка проб патологического материала в лабораторию должна
осуществляться в течение 12 часов с момента отбора проб.
Утечка (рассеивание) патологического материала во внешнюю среду
не допускается.
Контейнеры, емкости с пробами патологического материала
должны быть упакованы и опечатаны.

12.

В
сопроводительном
письме
к
пробам
патологического материала должны быть указаны
дата, время отбора проб, вид животного, дата
последней вакцинации против бешенства, номер
серии использованной вакцины, производитель
вакцины, адрес места отбора проб, перечень
проб, основания для подозрения на бешенство,
адрес и телефоны специалиста госветслужбы,
осуществившего отбор проб.
Пробы патологического материала должны быть
доставлены
в
лабораторию
специалистом
госветслужбы.

13.

в ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных»
референтную лабораторию по бешенству и BSE
600901, г. Владимир, мкр. Юрьевец
Сопроводительное письмо
Направляется сыворотка крови для исследования на наличие антител к вирусу бешенства от:
вид животного_____________________________________________________,
порода____________________________________________________________,
пол________________________, дата рождения_________________________,
кличка____________________________________________________________
индивидуальный идентификационный номер (чип)_______________________
последняя дата вакцинации против бешенства «____» «___________» 20___г.
наименование вакцины______________________________________________
серия и номер______________________________________________________
дата взятия крови для анализа ________________________________________
ФИО владельца ____________________________________________________
Адрес, индекс владельца_____________________________________________
__________________________________________________________________
Телефон, E-mail владельца___________________________________________
Прилагаются следующие документы: 1. копия рос. паспорта владельца (стр. 2-3, 5-6);
2. копия загран. паспорта владельца (стр. с фотографией); 3. копия паспорта животного.
Подпись,
ФИО владельца ____________________________________________________
Подпись,
ФИО вет. врача ____________________________________________________
«____» «__________» 20____г.
М.П.
название организации (вет. клиника / лаборатория / СББЖ), адрес, телефон
_____________________________________________________________________________________________________

14.

К проведению исследований допускаются квалифицированные
сотрудники, имеющие опыт работы с микроорганизмами I-II групп
патогенности, изучившие методики микробиологических работ,
вакцинированные против бешенства.
Утилизацию полученного для исследования материала, а также
использованных индивидуальных средств защиты, инструментов и
т.д. проводят путем кипячения в течение 30 мин или
автоклавирования в течение 15 мин при давлении (0,11±0,20) МПа.
Для постановки биопробы допускается использование проб мозга,
консервированные в 30% -50% раствора глицерина. Использование
других
консервантов
не
допускается.
Для
сохранности
патологический материал может быть заморожен при температуре не
выше минус 10 ˚С

15.

21. Диагноз на бешенство
считается установленным в
одном из следующих случаев:
•выявлен антиген возбудителя;
•обнаружен генетический материал
возбудителя;
•выделен возбудитель в культуре клеток;
• получен положительный результат
биологической пробы на белых мышах.

16.

Лабораторные исследования проб патологического материала
должны проводиться с использованием одного из методов:
метод флуоресцирующих антител (далее - МФА),
метод иммуноферментного анализа (далее - ИФА),
полимеразная цепная реакция (далее - ПЦР),
реакция диффузионной преципитации (далее - РДП),
выделение возбудителя в культуре клеток мышиной
нейробластомы CCL-131 или невриномы Гассерова узла крысы НГУК-1,
биологическая проба на белых мышах.
В случае неустановления диагноза на бешенство методами МФА,
ИФА, РДП, ПЦР лабораторные исследования должны проводиться
методом постановки биологической пробы на белых мышах или
методом выделения возбудителя в культуре клеток мышиной
нейробластомы CCL-131 или невриномы Гассерова узла крысы НГУК-1.

17.

Руководитель лаборатории в течение 12 часов после получения
результатов лабораторных исследований в письменной форме должен
проинформировать руководителя органа исполнительной власти
соответствующего субъекта Российской Федерации, осуществляющего
переданные полномочия в области ветеринарии, специалиста
госветслужбы,
направившего
патологический
материал
на
исследования, о полученных результатах.
В случае установления диагноза на бешенство руководитель
лаборатории в течение 12 часов после получения результатов
лабораторных
исследований
в
письменной
форме
должен
проинформировать федеральный орган исполнительной власти в
области нормативно-правового регулирования в ветеринарии, а также
ветеринарные
(ветеринарно-санитарные)
службы
федеральных
органов исполнительной власти в области обороны, в сфере
внутренних дел, в сфере деятельности войск национальной гвардии
Российской Федерации, в сфере исполнения наказаний, в сфере
государственной охраны и в области обеспечения безопасности в
случае поступления проб патологического материала с объекта,
подведомственного указанным органам.