Культивирование в CO2-инкубаторе

1. Генная инженерия животных

Практикум
ФББ МГУ – ЦКП ИБГ РАН
2016

2. Что делать после микроинъекций?

• Культивация
• Трансплантация

3. Культивация

Проблема двуклеточного блока

4. Культивирование в CO2-инкубаторе

Cреды KSOM и KSOM-AA

5. Что мы видим при культивировании

6. Отличаем хорошие клетки от плохих

7. Отличаем хорошие клетки от плохих

8. Отличаем живые клетки от дохлых

9. 1е сутки культивирования

10. 2е сутки культивирования

11. 2е сутки культивирования: аномалии

12. 3е сутки культивирования

13. 4е сутки культивирования

14. Анализ

• Отмывка бластоцист
• ПЦР с целой бластоцистой
• ПЦР с предварительно выделенной ДНК

15. Выделение ДНК из бластоцист

• Add to the each tube 10 ul of BLB (Mix 100 ul of 1 M Tris-HCl pH 8,3 ,
100ul of 1M KCl, 100ul of 0,2% gelatin, 4,5 ul of Tween-20, 6,25ul of
Proteinase K 20mg/ml solution, bring final volume to 1mL. )
• incubate 10min at 56oC and 10 min at 95oC
• freeze and store at -20 before use
• use 5 ul of solution in PCR

16. Трансплантация эмбрионов в яйцевод

17. Состояние эндометрия

18. Анатомия половой системы

19. Схема операции

20. Разрыв капсулы яичника

21. Введение капилляра с эмбрионами

22. Еще вариант

23. Трансплантация в рог матки

24. Схема операции

25. Беременность и эмбриональное развитие

26. Матка, 8й день

27. Беременность и эмбриональное развитие

28. Зародышевые оболочки

29. Кесарево сечение

30. Новорожденные мышата

31. Кормление (21 день)

32. Анализ трансгенов: химеризм

33. Анализ трансгенов: выделение ДНК

Экспресс-методы:
• хвост
• кровь